虹吸法與離心法制備冷沉淀的質(zhì)量分析

付竹筠

冷沉淀是臨床上較常用的一種血液成分，它是由新鮮冰凍血漿在2~6 ℃環(huán)境下融化后殘留的白色沉淀物。其主要成分是凝血因子Ⅷ、纖維蛋白原、纖維結(jié)合蛋白、血管性血友病因子等，特別是冷沉淀中Ⅷ因子是體內(nèi)纖溶系統(tǒng)的重要成分。但由于Ⅷ容易受外界因素影響而不穩(wěn)定，所以不同的制備工藝和設(shè)備所制備的冷沉淀，其質(zhì)量存在較大差異。為了選擇一種合適的方法制備冷沉淀，筆者分別運(yùn)用CT-4T.6C型低溫水浴融化箱融化新鮮冰凍血漿虹吸法和4 ℃冰箱融化新鮮冰凍血漿離心法制備冷沉淀并進(jìn)行質(zhì)量比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 血液來(lái)源 制備冷沉淀的原料漿均來(lái)源于筆者所在市無(wú)償獻(xiàn)血者的合格血液，采集全血400 ml（要求采血順利，血流通暢無(wú)凝塊），6 h內(nèi)分離出血漿約220 ml并在血漿速凍機(jī)中冰凍成塊，貯存在-30 ℃以下的冰箱中備用。

1.2 儀器設(shè)備 CT-4T.6C型低溫水浴融化箱（美國(guó)Cytotherm公司），4 ℃日本三洋冰箱，索福RC-12BP大容量離心機(jī)，CA-50凝血酶儀（日本Sysmex公司）。

1.3 冷沉淀的制備方法

1.3.1 虹吸法 運(yùn)用CT-4T.6C型低溫水浴融化箱融化新鮮冰凍血漿虹吸法制備冷沉淀。制備方法為：將12袋待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置于溫度恒定在6 ℃的CT-4T.6C型低溫水浴融化箱的水浴箱中，融化15 min后血袋管道變軟，松開(kāi)轉(zhuǎn)移空袋的止流夾，將轉(zhuǎn)移空袋置于水浴箱外，位置低于血漿袋，兩袋之間形成一定的高度落差。在血漿融化的過(guò)程中水浴箱不停地?fù)u晃，使水和新鮮冰凍血漿能充分地接觸，保證血漿受熱均勻。血漿融化后，隨時(shí)被虹吸至轉(zhuǎn)移空袋中，當(dāng)血漿融化至剩下40~50 ml血漿與沉淀物時(shí)，閉合導(dǎo)管，阻斷虹吸，將血漿與沉淀物混合，即制成冷沉淀凝血因子，制備過(guò)程約需1 h。

1.3.2 離心法 運(yùn)用4 ℃冰箱融化新鮮冰凍血漿離心法制備冷沉淀。制備方法為：取出12袋待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，置（4±2）℃冰箱中融化10~11 h，待其融化至尚剩下少量冰渣時(shí)取出離心（3000 r/min，10 min，溫度0~4 ℃），移出上層血漿至轉(zhuǎn)移空袋，將留下的20~30 ml血漿與沉淀物混合，即制成冷沉淀凝血因子。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

12袋采用虹吸法和12袋采用離心法制備的冷沉淀，其凝血因子Ⅷ和纖維蛋白原的含量均達(dá)到我國(guó)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]，凝血因子Ⅷ的含量分別為（120±11）IU/袋，（90±9）IU/袋，兩者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；纖維蛋白原的含量分別為（165±12）mg/袋，（168±10）mg/袋，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1 虹吸法與離心法制備冷沉淀Ⅷ因子、纖維蛋白原含量比較

3 討論

冷沉淀主要用于兒童血友病甲、血管性血友病、先天性或獲得性纖維蛋白原缺乏癥患者，冷沉淀也經(jīng)常用于手術(shù)后出血，嚴(yán)重外傷及DIC等患者的治療，是一種臨床療效顯著，已被臨床醫(yī)師廣泛接受的血液產(chǎn)品。因此血站應(yīng)為臨床提供優(yōu)質(zhì)高效的冷沉淀，以保證臨床療效。

新鮮冰凍血漿內(nèi)含有全部的凝血因子，其中的Ⅷ因子是一種不穩(wěn)定的凝血因子。新鮮冰凍血漿融化后，Ⅷ因子活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而有明顯的降低，其活性衰減了41.17%[2]，國(guó)內(nèi)報(bào)道在1 h內(nèi)融化完成所制冷沉淀質(zhì)量最好[3]；Ⅷ因子在2~6 ℃的水浴中制備其回收率較高，在8 ℃以上產(chǎn)生自融。所以新鮮冰凍血漿的融化時(shí)間和融化溫度是影響冷沉淀質(zhì)量的關(guān)鍵因素。本文結(jié)果顯示，虹吸法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量較離心法制備的冷沉淀Ⅷ因子含量顯著升高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；但兩種方法制備的冷沉淀纖維蛋白原含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這是因?yàn)檫\(yùn)用CT-4T.6C型低溫水浴融化箱融化新鮮冰凍血漿虹吸法制備冷沉淀僅需1 h，且可使水浴箱中水的溫度恒定6 ℃，因而極大地避免了Ⅷ因子的喪失。而運(yùn)用4 ℃冰箱融化新鮮冰凍血漿離心法制備冷沉淀，新鮮冰凍血漿需要在4 ℃冰箱中經(jīng)過(guò)10~11 h緩慢融化至一定程度后，再進(jìn)行離心分離，耗時(shí)長(zhǎng)，離心時(shí)不可避免的溫度上升，制備后期產(chǎn)品在室溫下完成，均可導(dǎo)致Ⅷ因衰減較多。纖維蛋白原是一種穩(wěn)定的凝血因子，受制備時(shí)間和制備溫度的影響較小，所以兩種方法制備的冷沉淀纖維蛋白原含量無(wú)明顯差異。虹吸法制備冷沉淀簡(jiǎn)便、快捷，凝血因子Ⅷ含量高，優(yōu)于離心法，值得推廣應(yīng)用。

[1] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中國(guó)輸血技術(shù)操作規(guī)程（血站部分）[M].天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1997：44.

[2] 楊江存，李芒會(huì)，于青，等.新鮮冰凍血漿融化后不同放置時(shí)間凝血因子的變化[J].中國(guó)輸血雜志，2005，18（3）：211-212.

[3] 高峰.臨床輸血與檢驗(yàn)[J].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：139-140.