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    力竭游泳訓(xùn)練后大鼠伏核5-羥色胺陽性細(xì)胞的表達(dá)

    2012-12-01 06:16:24李克王進(jìn)劉永林
    中國實用醫(yī)藥 2012年6期
    關(guān)鍵詞:力竭反應(yīng)物羥色胺

    李克 王進(jìn) 劉永林

    5-羥色胺(5-Hydroxyptamine,5-HT)是一種吲哚衍生物,廣泛存在于哺乳動物組織內(nèi)。5-羥色胺遞質(zhì)系統(tǒng)也比較集中,其神經(jīng)元主要位于低位腦干近中線區(qū)的中縫核內(nèi)。按其纖維投射途徑的不同,也可分為三部分:上行部分、下行部分和支配低位腦干部分。上行部分的神經(jīng)元位于中縫核上部,其神經(jīng)纖維投射到紋狀體、丘腦、下丘腦、邊緣前腦和大腦皮層。腦內(nèi)5-羥色胺主要來自中縫核上部,破壞中縫核上部可使腦內(nèi)5-羥色胺含量明顯降低。

    伏核(nucleus accumbens,NAc)是錐體外系的重要組成部是把情緒動機(jī)轉(zhuǎn)化為運動的神經(jīng)界面,是邊緣運動的接口[1]。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料 雄性Wistar大鼠 沈陽醫(yī)學(xué)院動物室提供,5-HT試劑盒(購于Sigma公司);LUZEX-F顯微圖像分析儀(日本,松下公司)

    1.2 實驗動物分組 本實驗選用雄性健康Wistar大鼠40只,體重260~300 g,隨機(jī)分成兩組。正常對照組:20只。實驗組:20只。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 力竭游泳訓(xùn)練大鼠模型制備 大鼠在長1.5 m,寬0.8 m,高0.6 m,水深0.5 m,水溫(35±2)℃的游泳池內(nèi)進(jìn)行訓(xùn)練,時間為1周。力竭游泳訓(xùn)練的標(biāo)準(zhǔn)為:大鼠游泳動作明顯失調(diào),且沉入水中10 s不再浮起[2]。

    1.3.2 組化標(biāo)本制備 對實驗動物用1%戊巴比妥鈉(40 ml/Kg)腹腔麻醉后開胸,經(jīng)左心室70滴/min滴入1%肝素鈉的生理鹽水500 ml,同時剪開右心耳。繼用0.1 m磷酸鹽緩沖液(PBS,pH=7.4)配制的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定。取出實驗動物的腦組織,放入含4%多聚甲醛PBS的固定液中進(jìn)行后固定大約2 h,之后將實驗動物的腦組織切成薄片移入含20%蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放,至組織薄片沉底,經(jīng)水包埋,恒冷箱連續(xù)橫切片,片厚20 μm。經(jīng)OCT包埋,恒冷箱連續(xù)切片,片厚16 μm,-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.3 尼氏染色 冰凍切片吹干,經(jīng)PBS漂洗5 min 3次,將切片置入1%甲苯胺藍(lán)溶液中37℃孵育90 min,取出后用蒸餾水沖洗,PBS漂洗5 min 3次,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,光鏡下觀察。

    1.3.4 5-HT染色方法 ①冰凍切片吹干,PBS沖洗5 min 3次。②1:50正常羊血清中孵育30 min。③傾去血清,加入兔抗5-HT抗體(1:4000),4℃過夜。④PBS沖洗5 min 3次。⑤滴加生物素化抗兔抗體(二抗)1:40稀釋,室溫孵育60 min。⑥PBS沖洗5 min 3次。⑦滴加HRP標(biāo)記的卵白素1:40稀釋,室溫孵育60 min。⑧PBS沖洗5 min 3次。⑨DAB成色5 min。⑩PBS沖洗5 min 3次。[11]梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,光鏡下觀察。[12]對照實驗在鄰近切片上進(jìn)行,用抗原吸收后的一抗代替一抗,結(jié)果為陰性。

    1.4 顯微圖像定量分析 用Luzex-F顯微圖像分析儀測定伏核內(nèi)單位面積5-HT陽性反應(yīng)物平均灰度值,所得數(shù)據(jù)經(jīng)計算機(jī)SAS軟件系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理,用±s表示。

    2 結(jié)果

    2.1 尼氏染色結(jié)果 正常對照組大鼠伏核內(nèi)神經(jīng)原細(xì)胞的尼氏染色切片上,神經(jīng)元數(shù)量較多,排列緊密,形態(tài)完整,泡漿有內(nèi)尼氏體。

    實驗組伏核內(nèi)細(xì)胞,正常神經(jīng)元數(shù)量明顯增多,細(xì)胞豐滿,泡漿內(nèi)尼氏體豐富。根據(jù)尼氏染色說明力竭訓(xùn)練大鼠模型制備成功。

    2.2 5-HT染色結(jié)果 正常對照組可見5-HT陽性反應(yīng)物分布于大鼠伏核內(nèi),分布于胞質(zhì)及突起,胞核不著色,細(xì)胞形態(tài)完整但細(xì)胞數(shù)量少,纖維豐富。與正常對照組比較,實驗對照組5-HT陽性反應(yīng)物大量增多(P<0.01)可見大量陽性細(xì)胞及陽性纖維。見表1和圖1。

    表1 力竭游泳訓(xùn)練后大鼠與正常大鼠伏核單位面積5-HT陽性物反應(yīng)物平均灰度值(±s)

    表1 力竭游泳訓(xùn)練后大鼠與正常大鼠伏核單位面積5-HT陽性物反應(yīng)物平均灰度值(±s)

    注:*與正常組比較P<0.01

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    圖1 力竭游泳訓(xùn)練后大鼠與正常大鼠伏核單位面積5-HT陽性物反應(yīng)物平均灰度值

    3 討論

    NAc是錐體外系的重要結(jié)構(gòu),伏核參與腹側(cè)環(huán)路啟動的運動,主要影響并參與運動相關(guān)的情感和動機(jī)反應(yīng)。

    5-HT是分布與腦干中縫核簇內(nèi)的重要神經(jīng)遞質(zhì),它通過廣泛的纖維投射和多種受體的介導(dǎo),參與多種機(jī)體的生理活動[3]。過量的5-HT可能在中樞系統(tǒng)引起人體疲勞,在運動情況下,無論是間歇性運動或持續(xù)性運動,都會使游離色氨酸更容易進(jìn)入腦內(nèi),使腦內(nèi)5-HT濃度升高,使肌體出現(xiàn)疲勞。本實驗的結(jié)果表明經(jīng)過力竭游泳訓(xùn)練的雄性大鼠的紋狀神經(jīng)元內(nèi)5-HT陽性反應(yīng)物大量增多。提示,運動鍛煉對大鼠的伏核神經(jīng)元內(nèi)5-HT陽性反有一定的影響、根據(jù)這一結(jié)果,我們推測,經(jīng)力竭游泳訓(xùn)練后軀體運動的協(xié)調(diào)性顯著增強(qiáng),除了與肌肉的張力有關(guān)外,與神經(jīng)遞質(zhì)功能增強(qiáng)有一定關(guān)系[4]。5-HT可以作為力竭訓(xùn)練強(qiáng)度的檢測指標(biāo)。

    [1]Femandez-Espejo E.How does the nucleus accumbens function.Rev Neurol,2000,30:845-849.

    [2]朱全,浦鈞宗.大鼠游泳訓(xùn)練在運動實驗中的應(yīng)用.中國運動醫(yī)學(xué)雜志,1996,15(10):125.

    [3]鄒慧莉,趙廣宇宿長軍,等.快速眼動睡眠剝奪對中樞5-羥色胺缺失小鼠orexin陽性神經(jīng)元活性的影響.神經(jīng)解剖學(xué)雜志,2009,25(3):312-316.

    [4]Andersen P.Pathwag of postsgnaptic inhibition in the hipp ocanpus.Neurophgsiol,1964,27:608.

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