2種阿奇霉素片的人體生物等效性研究

張亞玲，何海霞

（1.重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院，重慶401220；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，重慶400016）

2種阿奇霉素片的人體生物等效性研究

張亞玲1＊，何海霞2

（1.重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院，重慶401220；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，重慶400016）

目的：比較2種阿奇霉素片的人體生物等效性。方法：18名健康男性志愿受試者采用雙周期雙制劑交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，單劑量口服2種阿奇霉素片，用微生物杯碟法測定血藥濃度，以3p97計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并進(jìn)行生物等效性評價(jià)。結(jié)果：2種阿奇霉素片主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為：cmax（1.21±0.56）、（1.25±0.62）μg·mL－1，tmax（1.94±0.64）、（2.44±1.15）h，AUC0～144h（11.33±7.49）、（11.61±7.15）μg·h·mL－1，受試制劑的相對生物利用度為（97.59±12.72）%。結(jié)論：經(jīng)方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)，2種阿奇霉素片具有生物等效性。

阿奇霉素片；藥動(dòng)學(xué)；生物等效性

阿奇霉素是第2代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，自20世紀(jì)80年代開發(fā)上市并應(yīng)用于臨床以來，因其穩(wěn)定性較好、抗菌譜廣、血藥濃度高、具很好的抗生素后效應(yīng)[1]，為臨床醫(yī)師所青睞，國內(nèi)仿制廠家較多。為評價(jià)西南藥業(yè)股份有限公司研制的阿奇霉素片是否與市售石家莊制藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的阿奇霉素片生物等效，本研究以健康男性為研究對象，采用雙周期雙制劑交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，單劑量口服給藥，微生物杯碟法測定其血藥濃度，對其藥動(dòng)學(xué)和生物等效性進(jìn)行了考察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1 試藥

受試制劑：阿奇霉素片（西南藥業(yè)股份有限公司，規(guī)格：每片0.25 g，批號：20040201，含量：99.83%）；參比制劑：阿奇霉素片（石家莊制藥集團(tuán)有限公司，規(guī)格：每片0.25 g，批號：030901，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H10980218）；阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，購于重慶市藥檢所，批號：130352-200203，每1 mg相當(dāng)于946 u）；其余培養(yǎng)基成分均為分析純。

1.2 研究對象

18名男性健康志愿者，漢族，平均年齡（23.6±1.10）歲；平均體重（61.9±6.25）kg；平均身高（169.4±5.06）cm。試驗(yàn)前所有受試者經(jīng)肝腎功能、血壓、心電圖檢查均正常，于充分了解試驗(yàn)內(nèi)容后志愿簽署知情同意書。本試驗(yàn)經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批通過。

2 方法與結(jié)果

2.1 給藥方法及血樣采集

18名受試者隨機(jī)分成2組，雙周期雙制劑交叉空腹口服受試制劑或參比制劑500 mg。受試者試驗(yàn)前禁食12 h，于次日晨8：00時(shí)空腹以200 mL溫水送服藥物，服藥后4 h進(jìn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)餐。試驗(yàn)期間不得服用茶、咖啡及飲料。2次周期間隔3周。留取受試者服藥前和服藥后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、24.0、48.0、72.0、96.0、144.0 h時(shí)血樣各 3 mL 于血清管中。離心，分離血清，一式2份，置－20℃冰箱保存待測。

2.2 血藥濃度的測定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱取阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)品適量，用無水乙醇溶解后加緩沖液（pH 7.8）稀釋成1 mg·mL－1標(biāo)準(zhǔn)貯備液，置于－40℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.2 指示菌：藤黃八疊球菌[編號28001][2，3]。

2.2.3 Ⅱ號培養(yǎng)基[4]：蛋白胨6 g、牛肉浸膏1.5 g、酵母浸膏6 g、葡萄糖1 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL，調(diào)pH值至7.8～8.0，在115℃滅菌30 min后備用。

2.2.4 測定方法：參照文獻(xiàn)[5]，采用微生物杯碟法，將Ⅱ號培養(yǎng)基熔化后冷至約50℃，加入適量藤黃微球菌菌液，混勻，于超凈工作臺上倒入經(jīng)高壓滅菌的平皿中（12 mL/皿），冷凝后放入不銹鋼小杯，每個(gè)血樣分別加入2個(gè)小杯；同時(shí)另放2個(gè)小杯，內(nèi)加標(biāo)準(zhǔn)溶液。靜置相同時(shí)間后，置37℃孵育14～16 h，取出，以游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血液標(biāo)本中的藥物濃度。

2.3 方法學(xué)研究

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取空白血清，加阿奇霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，配制成相當(dāng)于濃度為2.4、1.2、0.6、0.3、0.15、0.075、0.038、0.019、0.009、0.005μg·mL－1的血清樣品，濃度為組間距1∶2，中心濃度為0.1μg·mL－1，用磷酸鹽緩沖液（pH 7.8）和正常人血清各半作為稀釋液。測定抑菌圈，以血藥濃度的對數(shù)為縱坐標(biāo)（Y）、抑菌圈的直徑為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行回歸運(yùn)算，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Y＝0.134 2X－0.631 1（r＝0.998 3）。結(jié)果表明，阿奇霉素血藥濃度在0.005～2.4μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，最低檢測濃度為0.005μg·mL－1。

2.3.2 日內(nèi)、日間精密度與回收率：采用2.400、0.300、0.040、0.005μg·mL－14個(gè)質(zhì)控濃度的阿奇霉素血清，各配制若干份，按照“2.3.1”項(xiàng)下方法操作，分別于日內(nèi)或日間測定其抑菌圈，計(jì)算出日內(nèi)、日間相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）和回收率，結(jié)果見表1。

表1 精密度及回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of precision and recovery tests（n＝6）

由表1可見，4個(gè)質(zhì)控濃度的平均回收率在（96.97±1.49）%～（105.55±3.44）%之間；日內(nèi) RSD≤4.29%，日間RSD≤4.18%。因此，阿奇霉素微生物測定方法的精密性和準(zhǔn)確性符合“化學(xué)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性指導(dǎo)原則”的要求。

2.4 數(shù)據(jù)處理

采用藥動(dòng)學(xué)軟件3p97進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)算主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，cmax、tmax以實(shí)測值計(jì)算，AUC按梯形面積法計(jì)算，并求得受試制劑相對生物利用度（F）。取值范圍0～144 h。利用方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)對2種片劑進(jìn)行生物等效性評價(jià)。

2.5 生物等效性研究

2.5.1 藥-時(shí)曲線：18名受試者交叉口服受試制劑或參比制劑各500 mg后，2種阿奇霉素片的平均藥-時(shí)曲線見圖1。

2.5.2 藥動(dòng)學(xué)參數(shù)：18名受試者交叉口服受試制劑或參比制劑各500 mg后，2種阿奇霉素片的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。2.5.3 生物等效性評價(jià)：受試制劑的相對生物利用度為（97.59±12.72）%。將所得的AUC和cmax經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，并進(jìn)一步采用雙單側(cè)t檢驗(yàn)和1－2α置信區(qū)間法進(jìn)行生物等效性評價(jià)，結(jié)果見表3。

圖1 2種阿奇霉素片的平均藥-時(shí)曲線Fig 1 Mean plasma concentration-time curves of 2 kinds of Azihromycin tablets

表2 2種阿奇霉素片在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較（n＝18）Tab 2 Comparison of pharmacokinetics parameters of 2 kinds of Azihromycin tablets in human body（n＝18）

表3 2種片劑主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)雙單側(cè)t檢驗(yàn)及1－2α置信區(qū)間法檢驗(yàn)結(jié)果Tab 3 Results of t-tests and 1－2α confidence interval method of main pharmacokinetics parameters of 2 kinds of Azihromycin tablets

由表3可見，受試制劑與參比制劑生物等效；用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)Kruskall-Wallis法，判定tmax亦無差異，P＞0.05。

3 討論

本文以2010年版《中國藥典》為依據(jù)，采用經(jīng)典微生物法測定血清中阿奇霉素濃度，方法簡單易行。經(jīng)方法學(xué)研究驗(yàn)證，日內(nèi)、日間精密度與回收率良好，靈敏度亦達(dá)到了生物樣品測定的要求。

有關(guān)阿奇霉素測定方法國內(nèi)已有報(bào)道[2，3，6，7]，有高效液相色譜（HPLC）-紫外法、液-質(zhì)聯(lián)用法、微生物法等。本研究采用微生物法測定阿奇霉素血藥濃度，與儀器法相比，測定的是樣品對敏感菌株的抑菌活性，與臨床應(yīng)用的要求相符，更能體現(xiàn)其醫(yī)療價(jià)值，且具有成本低、易開展工作等優(yōu)點(diǎn)。

18名受試者單劑量空腹口服2種阿奇霉素片后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)報(bào)道[2，3，6，7]相似。受試制劑的 cmax、tmax、AUC0～144h和AUC0～∞經(jīng)雙單側(cè)t檢驗(yàn)和1－2α置信區(qū)間法檢驗(yàn)，結(jié)果顯示與參比制劑具生物等效性，且試驗(yàn)期間無一例受試者發(fā)生不良反應(yīng)，表明受試制劑與上市的參比制劑具生物等效性。

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Bioequivalence of 2 Kinds of Azihromycin Tablets in Healthy Volunteers

ZHANG Ya-ling
（Chongqing Changshou District People’s Hospital，Chongqing 401220，China）
HE Hai-xia
（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To compare the bioequivalence of 2 kinds of Azihromycin tablets in healthy volunteers.METHODS：2 kinds of Azihromycin tablets were administered by randomized crossover way in 18 male volunteers for 2 periods，and the blood concentrations of azihromycin were determined by microbiological assay.The pharmacokinetic parameters were calculated with 3p97 pharmacokinetic program and the bioequivalence was evaluated.RESULTS：Main pharmacokinetic parameters were as follows：cmax（1.21±0.56）μg·mL－1and（1.25±0.62）μg·mL－1；tmax（1.94±0.64）h and（2.44±1.15）h；AUC0～144h（11.33±7.49）μg·h·mL－1and（11.61±7.15）μg·h·mL－1.The relative bioavailability of test tablets was（97.59±12.72）%.CONCLUSION：Results of variance analysis and t-tests suggest that 2 kinds of Azihromycin tablets are bioequivalent.

Azihromycin tablet；Pharmacokinetics；Bioequivalence

R969.1；R978.1+5

A

1001-0408（2012）46-4358-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.46.14

2012-07-16

2012-08-16）

＊碩士研究生。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：022-23626417。E-mail：zhangyuan0089@126.com

#通訊作者：主任藥師，博士。研究方向：臨床藥學(xué)。電話：022-23626417。E-mail：zlq0713@yahoo.com.cn