芒果苷及其磷脂復(fù)合物大鼠在體腸吸收對比研究*

張偉玲，王亞靜，田 慧，軒肖玉，高 旭，于 悅

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實驗室-省部共建國家重點(diǎn)實驗室培育，天津 300193）

芒果苷（MGF），又名芒果素、知母寧，為漆樹科植物芒果葉的主要活性成分，具有廣泛的藥理活性，如抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗糖尿病等作用[1]。但由于MGF脂水均難溶，導(dǎo)致口服吸收差，生物利用度低，限制了其療效的發(fā)揮和臨床應(yīng)用[2]。將藥物制成磷脂復(fù)合物可提高藥物的親脂性，促進(jìn)藥物透過生物膜，改善藥物在胃腸道內(nèi)的吸收[3-6]。因此，本課題組前期制備了芒果苷磷脂復(fù)合物（MPC）[7]，用以提高芒果苷的脂溶性。筆者進(jìn)一步考察了其在體大鼠腸吸收的情況，與芒果苷進(jìn)行了比較，以期為芒果苷新制劑的開發(fā)提供一定的生物藥劑學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1200 型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；BT100－1F型恒流泵（保定蘭格恒流泵有限公司）；DKB－501A型超級恒溫水槽（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）。

芒果苷（MGF）對照品（天津中新藥業(yè)，批號：110505－11純度＞98%）；MGF原料（天津中新藥業(yè)，批號：100523，含量 90%）；MPC（自制，批號：111119，理論含量31.25%）；甲醇和乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

雄性SD大鼠，體質(zhì)量180～200 g。由北京華阜康生物科技股份有限公司提供[許可證號：SCXK（京）2009－0004]。

2 方法與結(jié)果

2.1 灌流液中芒果苷的高效液相色譜（HPLC）測定方法的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱：C18柱（VenusilMP－200mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈：0.1%甲酸（16∶84）；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：260 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.1.2 方法專屬性 取K-R試液進(jìn)行腸灌流，收集6 h的空白腸灌流液，以此腸灌流液配制芒果苷對照品溶液，經(jīng)HPLC法測定，在此條件下空白腸灌流液不干擾芒果苷的測定，藥物的保留時間為8.582 min。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取MGF對照品10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使其溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取該溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL 于 100 mL 量瓶中，加K-R試液稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，以峰面積對濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程為A=83542×C-11937，r=0.9998，線性范圍為 0.25～8 μg/mL。

2.1.4 精密度與回收率 取標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項下的對照品溶液，濃度1 μg/mL，重復(fù)測定5次，計算峰面積的RSD為1.95%。精密稱取芒果苷對照品0.5、2、4 mg，各3份，分別置100 mL量瓶中，按摩爾比1∶1加入磷脂，加K-R試液適量，超聲30 min使其溶解，用K-R試液稀釋至刻度，搖勻。各精密量取1 mL，分別置10 mL量瓶中，用K-R試液稀釋至刻度，搖勻，濾過，進(jìn)樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算濃度C，求得回收率。測得低、中、高3個濃度的回收率分別為 99.15%、96.84%、98.91%（n＝3）。結(jié)果表明精密度和回收率均符合方法學(xué)測定的要求。

2.1.5 穩(wěn)定性 取標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項下的對照品溶液，濃度 2 μg/mL，置 37 ℃水浴中，分別于 0、1、2、4、6 h取樣，進(jìn)樣，測定芒果苷的含量。MPC在灌流液中6 h內(nèi)的RSD為1.81%，表明MPC在灌流液中6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2 大鼠腸灌流實驗

2.2.1 溶液的配制

1）MGF灌流液：取MGF，用pH6.8的K-R緩釋液配制成的含MGF為3 μg/mL的溶液。

2）MPC灌流液：取MPC，用pH6.8的K-R緩釋液配制成的含MGF為3 μg/mL的溶液。

3）K-R 試液（pH＝6.8）：含氯化鈉 7.8 g/L、氯化鉀0.35 g/L、無水氯化鈣0.37 g/L、磷酸二氫鈉0.32 g/L、氯化鎂0.02 g/L、碳酸氫鈉1.37 g/L、葡萄糖1.48 g/L。

2.2.2 實驗方法 取SD大鼠，禁食12 h，可自由飲水，腹腔注射20%烏拉坦麻醉（劑量1.0 g/kg），固定并維持體溫。沿腹中線打開腹腔，約4 cm，分離十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸各腸段。各腸段區(qū)間如下：十二指腸段為自幽門下1 cm處開始；空腸段為自幽門15 cm處開始；回腸段為自盲腸上行20 cm處開始；結(jié)腸段為緊鄰盲腸至直腸，各段均取10～15 cm。每段于兩端切口，用預(yù)熱至37℃的生理鹽水將腸內(nèi)容物沖洗干凈，插管后結(jié)扎。傷口處用浸有生理鹽水的脫脂棉覆蓋保濕，紅外燈下保溫。進(jìn)口處用已知質(zhì)量的裝有供試液的小瓶以0.2 mL/min的流速進(jìn)行灌流，出液口處用另一已知質(zhì)量的小瓶收集，持續(xù)105 min，每隔15 min迅速更換一次供試液小瓶和收集液小瓶，稱質(zhì)量，以計算進(jìn)出口灌流液的質(zhì)量，同時HPLC法測定藥物的濃度。實驗結(jié)束后，處死大鼠，剪下被考察的腸段，測量長度（l）和內(nèi)半徑（r）。計算并比較MGF和MPC各吸收部位下的藥物吸收速率常數(shù)（Ka）和表觀吸收系數(shù)（Papp）值，取 5 組數(shù)據(jù)的平均值進(jìn)行比較。并采用SPSS 18.5軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）。結(jié)果見表1和表2。

計算公式：

式中：Qin和Qout分別為灌入和收集的供試液體積(假定供試液密度為1.0 g/mL，根據(jù)測得質(zhì)量計算體積)；Q為灌流速度；Cin和Cout分別為進(jìn)口和出口處供試液中的藥物濃度。l和r分別為被灌流腸段的長度（cm）和橫截面半徑（cm）；Q為灌流速度（0.2 mL/min），t為灌流時間（0.25 h）；V 為灌流腸段的體積。Ka和 Papp為中間 4～5 個時間段（45～105 min）樣品的平均值。

表1 MGF和MPC在不同吸收部位的吸收速率常數(shù)Ka（±s，n＝5）Tab.1 Effect of different regions of intestinal on Kaof MGF and MPC（±s，n＝5）

表1 MGF和MPC在不同吸收部位的吸收速率常數(shù)Ka（±s，n＝5）Tab.1 Effect of different regions of intestinal on Kaof MGF and MPC（±s，n＝5）

注：與 MGF 相比，*P<0.1；與 MGF 相比，**P<0.01。

腸段Ka（×10－2/min）MPC MGF十二指腸 4.45±0.76* 3.40±1.19空腸 6.85±2.10** 4.15±0.99回腸 3.41±0.61* 2.33±0.51結(jié)腸 4.36±0.583.95±1.31

表2 MGF和MPC在不同吸收部位的表觀吸收系數(shù)Pap（p±s，n＝5）Tab.2 Effect of different regions of intestine on Pappof MGF and MPC（±s，n＝5）

表2 MGF和MPC在不同吸收部位的表觀吸收系數(shù)Pap（p±s，n＝5）Tab.2 Effect of different regions of intestine on Pappof MGF and MPC（±s，n＝5）

注：與 MGF 相比，**P<0.01。

腸段Papp（×10－3cm/min）MPC MGF十二指腸 4.86±0.584.27±1.57空腸 9.14±2.47** 4.84±1.37回腸 4.39±1.043.60±1.35結(jié)腸 5.30±1.484.79±0.62

由表1和表2可知，MPC各吸收部位的Ka和Papp值與MGF相比，均有不同程度的提高，說明磷脂復(fù)合物對芒果苷的腸吸收具有改善作用。經(jīng)方差分析，MPC在十二指腸和回腸的Ka值與MGF相比均有所提高（P＜0.1）。MPC 在空腸段的 Ka和 Papp值較 MGF 均提高顯著（P＜0.01），Ka和 Papp值分別增加了1.65和1.89倍，說明磷脂復(fù)合物對芒果苷的腸吸收改善部位主要在空腸。

3 討論

吸收是藥物在生物體內(nèi)發(fā)揮療效的前提，藥物的腸吸收在某一程度上能夠反映藥物經(jīng)口服后整體的吸收情況[8]。因吸收速度是影響藥物進(jìn)一步分布、代謝、排泄的決定性因素，而藥物透過生物膜的滲透能力是吸收的限速過程，因此，吸收速率常數(shù)Ka和表觀吸收系數(shù)Papp成為研究藥物腸吸收的重要動力學(xué)參數(shù)[9-10]。其中Ka代表藥物從吸收部位進(jìn)入體循環(huán)的速度，用來衡量藥物吸收速度的快慢；Papp代表藥物透過生物膜的滲透能力。

目前研究藥物腸吸收的方法有外翻腸囊法、腸灌流法、分離腸黏膜法等[11]，其中在體腸灌流模型能夠較真實的模仿腸道的環(huán)境，吸收速率穩(wěn)定，與人體腸吸收有很好的相關(guān)性，因此常被用來考察藥物的腸吸收情況[12-13]。本實驗以動力學(xué)參數(shù)Ka和Papp為指標(biāo)，通過大鼠在體腸灌流模型來考察藥物的腸吸收情況。MPC和MGF腸吸收的對比結(jié)果顯示（見表1和表2），MPC在各吸收部位的Ka和Papp值較MGF均有不同程度的提高，其中在空腸段的提高最為顯著（P＜0.01），表明磷脂復(fù)合物無論是從吸收速度還是吸收程度上均對芒果苷的腸吸收有所改善。這可能與磷脂復(fù)合物對芒果苷親脂性的提高有關(guān)。磷脂與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)相似，具有細(xì)胞親和力，與藥物結(jié)合后，非選擇性的增強(qiáng)了與腸壁細(xì)胞的親和力，使藥物更易透過腸壁細(xì)胞膜，從而提高了藥物在各吸收部位的滲透能力，進(jìn)而提高藥物的腸吸收速度。由此可見，將藥物制成磷脂復(fù)合物是改善中藥活性成分腸吸收的一種有效途徑，對于提高中藥制劑的口服生物利用度具有重要意義。

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