HPLC法測(cè)定頸椎通絡(luò)丸桂皮醛、芍藥苷含量△

孟克巴牙爾 常 嵐 張高娃 趙 陽(yáng) 白音夫?

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古呼和浩特010020;2.呼和浩特市環(huán)境科學(xué)研究所，內(nèi)蒙古呼和浩特010030;3.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院2010級(jí)研究生，內(nèi)蒙古呼和浩特 010050)

頸椎通絡(luò)丸是我院所臨床協(xié)定處方制劑。具有祛風(fēng)通絡(luò)，活血化瘀作用，用于頸椎病引起的頭痛、頭暈、耳鳴等癥。主要由白芍、葛根、桂枝、羌活、地龍、烏蛇、防風(fēng)、制草烏、甘草等藥材組成。制法，以上藥材粉碎成細(xì)粉，加蜂蜜制成小蜜丸。本文采用液相色譜法對(duì)桂皮醛、芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器、試劑及樣品

高效液相色譜儀:1100型(美國(guó) Agilentg公司制造);NC－2000中北色譜工作站;1/10萬(wàn)光電天平:TG332A型(湘儀制造);超聲清洗儀:AS2060B型(上?？茖W(xué)儀器公司制造)。

甲醇、乙腈:色譜純，由美國(guó)Tedai公司生產(chǎn);磷酸為分析純;水為三蒸水。桂皮醛(710～9005)芍藥苷(0736～200014)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。頸椎通絡(luò)丸由內(nèi)蒙古中蒙醫(yī)醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件:非羅門(mén) Kromasil色譜柱 C18(4.6×200mm，5μm)。流速:1mL·min－1;柱溫:30℃。桂皮醛測(cè)定波長(zhǎng)290nm，流動(dòng)相:甲醇－1%:磷酸(300:200);芍藥苷測(cè)定波長(zhǎng)為230nm，流動(dòng)相:乙腈－0.1%磷酸溶液(22:78)［1］。

2.2 測(cè)定溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取桂皮醛對(duì)照品適量，用甲醇配制成0.08mg·mL－1;濃度的溶液。精密稱(chēng)取芍藥苷對(duì)照品適量，用甲醇配制成0.09mg·mL－1;濃度的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品，用剪刀剪碎，稱(chēng)取0.4g，置研缽內(nèi)，加甲醇2ml研磨直到全部溶散，甲醇溶液轉(zhuǎn)移至50mL具塞錐形瓶中，用甲醇沖洗研缽3次，每次2mL。超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，再將甲醇溶液轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜止，用0.45μm濾膜濾過(guò)，即的。

2.2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn):依照樣品制備方法分別制備不含肉桂和芍藥的頸椎通絡(luò)丸的陰性制劑，依照色譜條件測(cè)定。桂皮醛陰性樣品與芍藥苷陰性樣品在與樣品相應(yīng)的保留時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾峰出現(xiàn)，表明，其它藥材對(duì)桂皮醛及芍藥苷的測(cè)定無(wú)干擾。

2.3 線性關(guān)系考察:精密吸取桂皮醛溶液1mL置10mL量瓶?jī)?nèi)為A溶液，由A溶液量取1mL按上法稀釋為B溶液。吸取 B 溶液2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色譜條件測(cè)定峰面積。回歸方程:Y=5738+4369354x，r=0.9999。桂皮醛在 0.02 ～0.64μg成線性關(guān)系。

芍藥苷對(duì)照品溶液為A，精密吸取1mL置10mL量瓶?jī)?nèi)加甲醇至刻度為B溶液。吸取A溶液4、6、8μL，B溶液2、4、6μL按色譜條件測(cè)定峰面積?；貧w方程:Y=20038+3807746x，r=0.999。芍藥苷在 0.0182 ～0.546μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液4μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，分別測(cè)定桂皮醛和芍藥苷峰面積，結(jié)果峰面積的RSD分別為0.74%與1.01%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同批號(hào)供試品溶液，分別于樣品制備后第0，2，4，8h進(jìn)樣 4μL，測(cè)定桂皮醛和芍藥苷峰面積，結(jié)果峰面積的RSD分別為0.65%與1.10%，樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定

2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取同批次樣品，按2.2項(xiàng)下的方法制備5份樣品。分別測(cè)定桂皮醛和芍藥苷含量，桂皮醛平均含量 0.21 mg·g－1，RSD 為 3.5%;芍藥苷平均含量 0.16 mg·g－1，RSD 為 3.7%。

2.7 回收率試驗(yàn):取已知桂皮醛和芍藥苷含量頸椎通絡(luò)丸0.3g，置10mL容量瓶?jī)?nèi)分別精密加入桂皮醛對(duì)照品溶液1mL(0.08mg·mL－1)，芍藥苷對(duì)照品溶液 0.5mL(0.091mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液轉(zhuǎn)入置50mL具塞錐形瓶中，按供試品方法制備，提取，過(guò)濾。按色譜條件測(cè)定。計(jì)算測(cè)定平均回收率。見(jiàn)表1樣品編號(hào)1～5為桂皮醛加樣回收率測(cè)定，6～10為芍藥苷加樣回收率測(cè)定3樣品測(cè)定分別吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液4μL，依上述色譜條件測(cè)定不同批號(hào)桂皮醛和芍藥苷含量，二者平均含量分別為 0.24 mg﹒ g－1、0.16 mg﹒g–1。

表1 頸椎通絡(luò)丸加樣回收率測(cè)定

表2 樣品中桂皮醛和芍藥苷含量測(cè)定(n=5)

4 討論

對(duì)供試品溶液制備方法進(jìn)行研究。分別考察超聲、回流提取方法，結(jié)果表明超聲處理方法操作簡(jiǎn)便、省時(shí)，提取效率高。對(duì)提取時(shí)間考察表明，樣品超聲處理30min后桂皮醛與芍藥苷含量不再增加。色譜柱適用性研究表明，Agilent XDB －C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非羅門(mén)Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)均可適用本試驗(yàn)測(cè)定。測(cè)定結(jié)果表明，桂皮醛含量在 0.21 ～0.27 mg·g－1，芍藥苷含量0.12 ～0.19mg·g－1，批次之間含量差異不大。采用 HPLC法測(cè)定頸椎通絡(luò)丸指標(biāo)性成分，可作為有效控制藥品的質(zhì)量的方法之一。該方法重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、可靠。

［1］中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)［S］.中國(guó)醫(yī)藥出版社，2010.127，96