HPLC-ELSD法測定補心氣口服液中黃芪甲苷的含量

馬涵濤，沈新倫，杜雄軍

（1.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽471003；2.湖北福人金身藥業(yè)有限公司，湖北咸寧 437100；3.湖北福人藥業(yè)股份有限公司，湖北通城 437400）

HPLC-ELSD法測定補心氣口服液中黃芪甲苷的含量

馬涵濤1＊，沈新倫2，杜雄軍3

（1.河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南洛陽471003；2.湖北福人金身藥業(yè)有限公司，湖北咸寧 437100；3.湖北福人藥業(yè)股份有限公司，湖北通城 437400）

目的：建立測定補心氣口服液中黃芪甲苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測（HPLC-ELSD）法。色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動相為乙腈-水（35∶65），流速為1.0 mL·min－1，柱溫為常溫，進樣量為20μL，蒸發(fā)光散射檢測器的載氣（空氣）流速為2.50 L·min－1，蒸發(fā)溫度為90℃，霧化溫度為50℃。結(jié)果：黃芪甲苷進樣量在1～22μg范圍內(nèi)的自然對數(shù)值與峰面積積分值的自然對數(shù)值呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 7）；平均回收率為97.13%，RSD＝2.65%（n＝6）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于補心氣口服液的質(zhì)量控制。

補心氣口服液；黃芪甲苷；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法；含量測定

補心氣口服液是由黃芪、石菖蒲、人參、薤白4味中藥制成的復(fù)方成藥，具有補益心氣、理氣止痛的功效，用于氣短、心悸、乏力、頭暈等心氣虛損型胸痹心痛的治療。黃芪甲苷是該方君藥黃芪的主要有效成分，通過測定黃芪甲苷含量，能夠更好地控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量。為此，筆者參考有關(guān)文獻[1-3]，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測（HPLC-ELSD）法，建立了測定補心氣口服液中黃芪甲苷含量的方法。

1 儀器與試藥

P230 HPLC儀（大連依利特分析儀器有限公司）；PLELS2100蒸發(fā)光散射檢測器（英國Polymer Laboratories公司）；AUW120D電子天平（日本島津公司）

黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110781-200512）；補心氣口服液（湖北福人金身藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：20050112，20061016，20061017，20061018，20061117，20061118，20061119，20061202，20061203，20061204）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（35∶65）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：常溫；進樣量：20μL；蒸發(fā)光散射檢測器的載氣（空氣）流速：2.50 L·min－1；蒸發(fā)溫度：90℃；霧化溫度：50℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取補心氣口服液樣品20 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次25 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20 mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方工藝制備缺黃芪藥材的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法操作，即得。

2.3 干擾試驗

取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，陰性對照在對照品和供試品出峰的相應(yīng)位置無干擾峰，表明處方中其他成分對黃芪甲苷的含量測定無影響。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.黃芪甲苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；1.astragalosideⅣ

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取黃芪甲苷對照品49.8 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用（黃芪甲苷濃度為1.992 mg·mL－1）。精密吸取上述溶液0.25、0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，各進樣20μL，記錄色譜圖。以對照品峰面積的自然對數(shù)值（Y）為縱坐標(biāo)，以進樣量（μg）的自然對數(shù)值（X）為橫坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸方程Y＝1.532 3X+4.726 8（r＝0.999 7）。結(jié)果表明，黃芪甲苷進樣量在1～22μg范圍內(nèi)的自然對數(shù)值與峰面積積分值的自然對數(shù)值呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液20μL，重復(fù)進樣5次，測定峰面積。結(jié)果，黃芪甲苷峰面積的RSD＝1.90%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批樣品（批號：20050112）適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，分別于0、1、2、3、4、5 h進樣測定峰面積。結(jié)果，黃芪甲苷峰面積的RSD＝2.03%，表明5 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批樣品（批號：20050112）適量，分別按“2.2.2”項下方法制成5份供試品溶液，分別進樣測定含量。結(jié)果，RSD＝0.42%，表明本方法重復(fù)性好。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的同一批樣品（批號：20050112）6份，每份10 mL，精密加入黃芪甲苷溶液（濃度為0.508 mg·mL－1）8 mL，按“2.9”項下方法和“2.1”項下色譜條件測定含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測定

分別精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液10、20μL及供試品溶液20μL，按“2.1”項下色譜條件測定，以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算黃芪甲苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

在樣品提取過程中，考察了水飽和的正丁醇的提取次數(shù)和氨試液洗滌的次數(shù)。通過比較，確定用水飽和的正丁醇振搖提取5次，氨試液洗滌3次，效果較佳，能夠?qū)悠分械狞S芪甲苷提取完全，且操作過程中黃芪甲苷沒有損失。

本試驗選擇了不同的流動相進行考察，包括乙腈-水-四氫呋喃（33∶65∶4）、甲醇-水（1∶1）、乙腈-水（35∶65）等，其中乙腈-水（35∶65）出峰時間、峰的分離度、峰形都比較好，因此選擇乙腈-水（35∶65）作為本試驗的流動相。

本方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，適用于補心氣口服液的質(zhì)量控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：213.

[2] 張開蓮，凌立新，楊思進.HPLC-ELSD法測定心安顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中國藥房，2009，20（24）：1 884.

[3] 趙靈芝，朱丹妮，嚴(yán)永清.HPLC-ELSD法測定黃芪中黃芪甲苷的含量[J].藥物分析雜志，1999，19（6）：403.

Content Determination of AstragalosideⅣin Buxinqi Oral Solution by HPLC-ELSD

MA Han-tao
（The First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology，Henan Luoyang 471003，China）
SHEN Xin-lun
（Hubei Furen Jinshen Medicinal Limited Company，Hubei Xianning 437100，China）
DU Xiong-jun
（Hubei Furen Medicinal Co.，Ltd.，Hubei Tongcheng 437400，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of astragalosideⅣ in Buxinqi oral solution.METHODS：HPLC-ELSD method was adopted.The separation was performed on Kromasil ODS C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（35∶65）at the flow rate of 1.0 mL·min－1.The column temperature was room temperature and injection volume was 20μL.The flow rate of carrier gas（air）of ELS detector was 2.50 L·min－1.The evaporating temperature was 90℃ and atomizing temperature was 50℃.RESULTS：The linear range of astragalosideⅣ was 1～22μg（r＝0.999 7）with an average recovery of 97.13%（RSD＝2.65%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and reproducible，and it can be used for the quality control of Buxinqi oral solution.

Buxinqi oral solution；AstragalosideⅣ；HPLC-ELSD；Content determination

R917

A

1001-0408（2012）36-3444-02

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.36.33

2012-05-06

2012-08-15）