兩種免疫分析方法檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物的差異分析

北京市大興區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科（北京102600） 舒海英

乙型肝炎是我國(guó)常見(jiàn)的傳染病之一，感染較為廣泛、危害較嚴(yán)重的病毒性肝炎之一，嚴(yán)重危害人民健康［1］。乙肝血清學(xué)標(biāo)記物檢查仍作為目前臨床診斷、治療和判斷乙肝病毒感染者病程及傳染性的重要指標(biāo)之一，其中應(yīng)用免疫技術(shù)測(cè)定乙肝病毒感染診斷的主要手段［2］。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Enzymelinked immunosorbent assay，ELLSA）是檢測(cè)乙肝病毒感染病原學(xué)診斷的傳統(tǒng)方法，該法操作簡(jiǎn)單，但是檢測(cè)易受外界因素影響［3，4］。隨著免疫技術(shù)的不斷發(fā)展，化學(xué)發(fā)光免疫法（Chemiluminescence immunoassay，CLIA）在臨床應(yīng)用日趨廣泛。本文對(duì)兩種檢測(cè)方法的差異性進(jìn)行分析，為臨床上乙肝病毒血清標(biāo)記物的測(cè)定方法選擇提供依據(jù)。

資料和方法

1 一般資料 選擇2011年1～12月隨機(jī)選取在我院傳染科門(mén)診的首次就診患者300例作為研究對(duì)象。診斷標(biāo)準(zhǔn)：如肝組織學(xué)顯示Knodell HAI≥4，或≥G2／S2炎癥壞死／纖維化，ALT≥2×ULN，且同時(shí)HBV DNA陽(yáng)性其中男性患者173（57.67%）例，女性患者127（42.33%）例；年齡19～62歲，平均年齡為38.42±15.85歲。

2 試劑與儀器 BECKMAN COULTER Unicel DXI800酶標(biāo)儀，ELISA試劑為儀器配套；發(fā)光免疫分析儀科美-600（意大利產(chǎn)地），試劑為北京萬(wàn)泰生物藥業(yè)有限公司，質(zhì)控品均為臨檢質(zhì)控中心提供。

3 方 法 受試者肘靜脈取血后放室溫靜置30min后于離心機(jī)3 000rpm／min離心5min分離血清后，分別采用ELISA法和CLIA法對(duì)乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物進(jìn)行測(cè)定，包括乙肝病毒表面抗原（HB-sAg）、乙肝病毒表面抗體（HBsAb）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、乙肝病毒e抗體（HBeAb）和乙肝病毒核心抗體（HBcAb）。操作過(guò)程和結(jié)果判斷均嚴(yán)格按照操作規(guī)程及試驗(yàn)說(shuō)明進(jìn)行。

結(jié) 果

1 CLIA法與ELLSA法靈敏度的比較 CLIA法檢測(cè) HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和 HBcAb的靈敏度均高于ELLSA法，具體結(jié)果，見(jiàn)表1。

表1 CLIA與ELLSA檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物的靈敏度比較

2 CLIA法與ELLSA法測(cè)定結(jié)果的比較 兩種方法對(duì)300例血液檢測(cè)結(jié)果顯示，除了HbeAb外（P＜0.05），其他 HBsAg、HBsAb、HBeAg和 HBcAb的檢測(cè)結(jié)果基本一致（P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 CLIA法與ELLSA法對(duì)300例血液測(cè)定結(jié)果的比較

3 CLIA法與ELLSA法測(cè)定陽(yáng)性結(jié)果的一致率 HbeAb陽(yáng)性率的一致性較低，僅為65.52%。詳見(jiàn)表3。

表3 CLIA法與ELLSA法測(cè)定陽(yáng)性率

討 論

據(jù)WHO報(bào)道，全球約20億人感染過(guò)乙肝病毒，其中17.5%為慢性乙肝病毒感染者，每年約有100萬(wàn)人死于乙肝病毒感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌［5］。慢性乙肝是我國(guó)常見(jiàn)的傳染病之一，感染較為廣泛、危害較嚴(yán)重的病毒性肝炎之一。根據(jù)2002年我國(guó)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，普通人群的HBsAg陽(yáng)性率為9.09%，而感染慢性乙肝病毒的患者其原發(fā)性肝癌的相對(duì)危險(xiǎn)性至少增加300倍，嚴(yán)重影響了人們的身體健康［6］。因此，快速、準(zhǔn)確的診斷乙肝病毒感染具有重要的臨床意義。

目前乙肝病毒免疫標(biāo)志物是臨床上乙型肝炎感染的主要診斷手段之一，其反映了機(jī)體對(duì)乙肝病毒的免疫反應(yīng)強(qiáng)度。ELISA法是臨床上傳統(tǒng)的乙肝病毒感染診斷方法，該方法操作簡(jiǎn)單，適于大批量樣本檢測(cè)，對(duì)于判斷患者是否感染乙肝病毒以及所處階段有著重要的作用［7］。 應(yīng)用ELISA法，HBsAg、抗-HBs、HBeAg若顯色即為陽(yáng)性，顯色深淺表示含量的高低。但是ELISA法也存在以下缺點(diǎn)：①內(nèi)源性物質(zhì)、外源性物質(zhì)、試劑盒質(zhì)量以及反應(yīng)溫度等均可影響到其檢測(cè)的準(zhǔn)確性；②HBsAg出現(xiàn)變異株可出現(xiàn)假陰性；③HBsAg含量過(guò)高會(huì)出現(xiàn)“鉤狀效應(yīng)”；④ 無(wú)法對(duì)患者體內(nèi)的病毒感染進(jìn)行定量［7］。

CLIA是將高靈敏的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于檢測(cè)各種分析物質(zhì)的分析技術(shù)，是繼放射免疫分析、ELISA和熒光免疫分析之后發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)最新免疫測(cè)定技術(shù)［8］。與上述其他分析方法相比，CLIA具有無(wú)輻射、標(biāo)記物有效期長(zhǎng)及可實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)［9］。此外，CLIA具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、線(xiàn)性范圍寬、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。LIA技術(shù)除了上述特點(diǎn)外，還可以對(duì)機(jī)體病毒感染情況進(jìn)行定量檢測(cè)。因此，CLIA在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)方面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。本研究結(jié)果顯示，CLIA 法檢測(cè) HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和 HBcAb的靈敏度 0.2ng／ml、10 mIU／ml、0.1Ncu／ml、1Ncu／ml和0.5Ncu／ml，而ECLIA法檢測(cè)上述乙肝病毒血清標(biāo)志物的靈敏度分別為，1ng／ml、30mIU／ml、2Ncu／ml、2Ncu／ml和4 Ncu／ml。因此，CLIA法檢測(cè)乙肝病毒血清標(biāo)志物的靈敏度均優(yōu)于ECLIA法。

CLIA法和ECLIA法對(duì)300份血樣檢測(cè)結(jié)果顯示，HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb的檢測(cè)結(jié)果基本一致（P＞0.05），但是CLIA法和ECLIA法檢測(cè)HbeAb的結(jié)果差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。ELSIA法檢測(cè)HBsAg、HBsAb、HBeAg和HBcAb相對(duì)于CLIA法的陽(yáng)性符合率較高，分別為94.17%、96.23%、97.20%和92.42%，而ELSIA法檢測(cè) HBeAb相對(duì)于CLIA的陽(yáng)性符合率僅為65.52%。因此，從整體上來(lái)看，CLIA法測(cè)量乙型肝炎血清標(biāo)志物效果優(yōu)于ELSA法。

總之，采用CLIA檢測(cè)乙型肝炎血清標(biāo)志物的靈敏度及符合率優(yōu)于ELISA法，并且可以直接對(duì)血清標(biāo)志物表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。

［1］王佑娟，吳琴琴，范云潔，等.成人健康體檢人群中乙肝感染狀況的初步觀察［J］.四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008，39（6）：1067-1068.

［2］王靜霞，肖 飛，王婭琳，等.兒童乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)分析［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2009，29（3）：281-282.

［3］馬春宇. ELISA法和DNA熒光定量PCR法檢測(cè)乙肝病毒的相關(guān)性研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（7）：957-958.

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［6］黃肖利，馬曉寧，陳 雯，等.乙肝病毒核酸熒光定量與乙肝免疫標(biāo)志物定量檢測(cè)及肝功能的相關(guān)性研究［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2008，24（18）：3179-3181.

［7］馬春宇.ELISA法和DNA熒光定量PCR法檢測(cè)乙肝病毒的相關(guān)性研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（7）：957-958.

［8］肖 勤，林金明.化學(xué)發(fā)光免疫分析新進(jìn)展［J］.分析試驗(yàn)室，2011，30（1）：111-122.

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