覆盆子提取物祛黃褐斑作用研究

徐冰 張聰恪 王海玉 張炎 李立 陳東方

覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子Rubus chingii Hu的果實(shí)，屬藥食兩用。作為中藥具有益腎助陽，固精縮尿的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，覆盆子具有免疫增強(qiáng)、抗衰老、抗誘變等多種作用［1～3］。覆盆子提取物鞣花酸是其功效成分，鞣花酸具有美白、抗紫外線、促進(jìn)彈性纖維生成的綜合祛斑效果，是皮膚科醫(yī)學(xué)公認(rèn)可使用的有效美白成分之一。本試驗(yàn)中的受試物是由覆盆子提取物、維生素C和維生素E為原料制成的保健食品。在動(dòng)物毒性試驗(yàn)已證明其是安全、無毒副作用的前提下，我們對覆盆子祛黃褐斑作用進(jìn)行了人體試食試驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 樣品 受試樣品由北京某生物科技發(fā)展有限公司提供。人群推薦量為2.08 g/d(0.52 g/片，2片/次，2次/d)。

1.2 受試者選擇

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)體檢符合下列條件的自愿受試者。面部淡褐色至深褐色，界限清楚的斑片，通常對稱性分布，無炎性表現(xiàn)及鱗屑;無明顯自覺癥狀;主要發(fā)生在青春期后，女性多發(fā);病情有一定的季節(jié)性，夏重冬輕;無明顯內(nèi)分泌疾病，并排出其他疾病引起的色素沉著。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 年齡在18歲以下或65歲以上者，妊娠或哺乳期婦女，過敏體質(zhì)及對本保健食品過敏者;合并有心肝腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病，精神病患者;嗜酒者或吸煙者;短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品，影響到對結(jié)果的判斷者;未按規(guī)定服用受試物，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組 采用自身和組間兩種對照設(shè)計(jì)。按受試者的黃褐斑顏色、面積情況隨機(jī)分為試食組和對照組，盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如戶外活動(dòng)情況、年齡等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。

1.4 樣品的劑量和使用方法 試食組服用覆盆子提取物，2片/次，2次/d，服用量為2.08 g/d，連續(xù)30 d。對照組采用空白對照。受試者在試食期間停止使用有關(guān)養(yǎng)顏祛斑的藥物或其他保健品及化妝品。試驗(yàn)期間不改變原來的飲食習(xí)慣，正常飲食。

1.5 儀器與試劑 意大利Autolab型全自動(dòng)生化分析儀、日本CA-500型血球計(jì)數(shù)儀、美國BM-200尿十項(xiàng)分析儀、美國TH600型X透視儀、美國MAC5000型心電圖儀、Syneogy型B超診斷儀。中國科學(xué)院地理研究所設(shè)計(jì)研制，測繪出版社1992年出版《實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)色卡》(第一版)，生化試劑盒全部由中生公司提供。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 安全性指標(biāo) 包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等一般狀況;血、尿、便常規(guī)檢查;肝、腎功能等生化指標(biāo)檢查;胸透、心電圖、腹部B超檢查(僅試驗(yàn)前檢查一次)

1.6.2 功效性指標(biāo) ①顏面部黃褐斑面積大小檢測:用標(biāo)尺測量受試前后整個(gè)顏面部黃褐斑的面積(mm2)。②顏面部黃褐斑顏色深淺檢測:按照中國科學(xué)院地理研究所設(shè)計(jì)研制，測繪出版社1992年出版的《實(shí)用標(biāo)準(zhǔn)色卡》(第一版)中的棕色(Y+M+Bk即黃+品紅+黑的疊色)色卡為黃褐斑深淺的判斷標(biāo)準(zhǔn):I度(15、20、5)，II度(30、40、10)，Ⅲ度(40、60、15)。

1.7 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定

1.7.1 數(shù)據(jù)處理 對試食前后黃褐斑顏色積分和面積變化進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，同時(shí)計(jì)算有效率。色卡Ⅰ度、Ⅱ度和Ⅲ度分別計(jì)分為1分、2分和3分。結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，有效率用χ2檢驗(yàn)。

1.7.2 功效判定標(biāo)準(zhǔn) 有效:黃褐斑顏色下降Ⅰ度，面積減少大于10%，且不產(chǎn)生新的黃褐斑。無效:黃褐斑顏色及面積無明顯變化。

1.7.3 結(jié)果判定 試食組黃褐斑面積平均減少，且≥10%，顏色積分明顯下降，自身前后比較及與對照組比較，差別均有顯著性，且不產(chǎn)生新的黃褐斑，判定該受試樣品具有祛黃褐斑功能。

2 結(jié)果

2.1 分組及入選情況 受試者108例，隨機(jī)分為試食組和對照組，每組各54例，均為女性。其中試食組試食結(jié)束時(shí)有2例未按規(guī)定服用受試物，2例未在規(guī)定時(shí)間復(fù)查;對照組有4例未復(fù)查。試食組與對照組各有4例被排除，有效病例共100例，每組50例，病例脫失率均為7.41%。試食組年齡最小30歲，最大65歲，平均(49.80±8.59)歲;對照組年齡27～60歲，平均(48.92±9.42)歲。

2.2 功效觀察

2.2.1 黃褐斑顏色深淺變化，見表1。

表1 試食前后黃褐斑顏色深淺度變化()

表1 試食前后黃褐斑顏色深淺度變化()

注:＊＊自身比較P＜0.01，##組間比較P＜0.01

組別 例數(shù) 試食前 試食后 差值試食組 50 2.44±0.41 2.24±0.35＊＊## 0.20±0.34##對照組50 2.48±0.36 2.47±0.37 0.01±0.12

2.2.2 黃褐斑面積大小變化，見表2。

表2 試食前后黃褐斑面積大小變化()

表2 試食前后黃褐斑面積大小變化()

注:*自身比較P＜0.05，##組間比較P＜0.01

組別 例數(shù) 試食前(mm2) 試食后(mm2) 差值(mm2) 減少百分比(%)試食組 50 5387±2196 4387±1703*##50 5584±1883 5406±1861 177±486 2.89±9.34 1000±840 17.14±10.52對照組

2.2.3 功效判定，見表3。

表3 試食前后功效判定結(jié)果(例，%)

由表1、2、3可見，試食組試食后黃褐斑顏色變淺，黃褐斑面積減少，自身比較及與對照組相比差異均有顯著性;試食組有效率與對照組比較差異有顯著性。

2.3 安全性觀察 試食組和對照組受試對象在試驗(yàn)前、后的精神狀況、睡眠、飲食、大小便等情況無明顯改變。試驗(yàn)過程中所有受試對象均未見不良反應(yīng)及過敏反應(yīng)。服用覆盆子提取物1個(gè)月，受試者肝功能、腎功能、血液生化等多項(xiàng)安全性指標(biāo)均未見明顯變化。腹部B超、心電圖、X線胸部透視試食前試食組和對照組均未見明顯異常。

3 討論

黃褐斑是常見的色素代謝異常性疾病，多發(fā)于中青年女性。其產(chǎn)生是由于皮膚表皮基層的黑色素細(xì)胞生成的黑色素過多造成。研究發(fā)現(xiàn)，酪氨酸酶在黑素合成中起到關(guān)鍵作用［4］。人體內(nèi)的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下轉(zhuǎn)化為多巴、多巴醌、多巴色素等，最終轉(zhuǎn)變?yōu)樯仡w粒。在皮膚黃褐斑發(fā)生部位，酪氨酸酶活性增強(qiáng)，黑色素細(xì)胞活性增強(qiáng)，色素的產(chǎn)生與排泄失去了平衡，最終黑色素過剩聚集表皮細(xì)胞內(nèi)，形成黃褐斑。

覆盆子的功效成分鞣花酸，能降低酪氨酸酶和過氧化氫酶的活性，從而減少黑色素細(xì)胞的代謝強(qiáng)度，減少黑色素的生成，而達(dá)到祛斑作用。鞣花酸在整個(gè)紫外線區(qū)域均有較強(qiáng)的吸收作用，可以通過吸收紫外線起防曬或清除自由基的作用。有報(bào)道，口服鞣花酸純品4周后可使受試者皮膚色素沉著得到明顯改善，紫外線照射引起的紅斑受到抑制［5］。此外，覆盆子含有豐富的類黃酮素和維生素C，能有效抑制黑色素的形成，不但對肌膚有活化和修復(fù)功效，還具有美白作用。

覆盆子提取物的人體試食觀察結(jié)果顯示，試食組按要求服用30 d后，黃褐斑面積減少(1000±840)mm2(自身前后比較P＜0.05)，面積減少百分比為(17.14±10.52)%;顏色積分下降(0.20±0.34)分(自身前后比較P＜0.01);且未產(chǎn)生新的黃褐斑。試食組有效34例，有效率68.00%。試食組試食后黃褐斑面積及顏色積分與對照組比較，差異均有顯著性(P＜0.01)。根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版)中祛黃褐斑功能判定標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)定該保健食品有祛黃褐斑的作用。

［1］陳坤華，方軍，宮斌，等.覆盆子提取成分促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖作用及與環(huán)核苷酸的關(guān)系.上海免疫學(xué)雜志，1995，15(5):302-304.

［2］朱樹森，張炳烈，李文彬，等.覆盆子對衰老模型小鼠腦功能的影響.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1998，26(4):42-43.

［3］付德潤，鐘承民，郭偉，等.覆盆子抗誘變作用的實(shí)驗(yàn)研究.中國全科醫(yī)學(xué)雜志，1998，1(1):35-37.

［4］García-Molina F，F(xiàn)enoll LG，Morote JC，et al.Opposite effects of peroxidase in the initial stages of tyrosinase-catalysed melanin biosynthesis.J Biochem Cell Biol，2005，37(6):1179-1196.

［5］Kouichi KASAI，Mineka YOSHIMURA，Takuro KOGA，et al.Effects of oral administration of ellagic acid-rich pomegranate extract on ultraviolet-induced pigmentation in the human skin.J Nutr Sci Vitaminol，2006，52(5):383-388.