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    5-Fu與三種抗癌藥對大腸實(shí)體瘤的聯(lián)合用藥體外藥敏試驗(yàn)

    2012-11-21 07:12:32王海燕
    關(guān)鍵詞:單藥大腸癌抑制率

    王海燕

    通常情況下的體外藥敏試驗(yàn)采用單藥進(jìn)行研究,因此得到的結(jié)果僅為單藥的體外敏感性,這與臨床上采用的聯(lián)合化療結(jié)果可能存在差異,不能夠真實(shí)反映出聯(lián)合化療過程中各個(gè)藥物間的拮抗、相加或協(xié)同作用[1]。因此,本研究采用甲基噻唑基四唑方法對114例大腸癌細(xì)胞開展不同化療藥物的體外敏感性測定,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 我院自2009年12月至2011年12月期間共收治114例大腸癌患者,其中男50例,女64例;年齡33~82歲,平均為(65.1±11.7)歲;其中50例為直腸癌,64例為結(jié)腸癌;病理檢查結(jié)果顯示均為腺癌,其中中分化腺癌90例、中-低分化腺癌18例,低分化腺癌6例。

    1.2 抗癌藥物工作液 抗癌藥物均使用生理鹽水進(jìn)行配制,并于-20℃保存?zhèn)溆?。其中氟尿嘧?5-Fu)的質(zhì)量終濃度為100 mg/L;絲裂霉素(MMC)終濃度10 mg/L;順氯氨鉑(DDP)為20 mg/L;卡鉑(CBDCA)為50 mg/L。綜合分析藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行篩選,最終確定化療方法包括:5-Fu+MMC;5-Fu+DDP;5-Fu+CBDCA。上述藥物的終質(zhì)量濃度同單藥使用濃度相同。

    1.3 方法 應(yīng)用手術(shù)剪刀將大腸癌標(biāo)本剪碎,對于較小且較硬的瘤體,可采用0.2 mg/ml的膠原酶以及脫氧核糖核酸酶進(jìn)行消化,通過篩網(wǎng)過濾,用RPMI 1640培養(yǎng)液制成1×106~5×106個(gè)細(xì)胞/ml的癌細(xì)胞懸液,置于96孔培養(yǎng)板中[2]。分別設(shè)置給藥組、對照組以及空白組,給藥組給予抗癌藥,保證單藥與聯(lián)合用藥均達(dá)到終質(zhì)量濃度;對照組未給予抗癌藥;空白組僅給予培養(yǎng)液,且無大腸癌細(xì)胞。溫度為37℃時(shí)CO2(5%)培養(yǎng)72 h。每孔內(nèi)加入20 μl以生理鹽水配置而成的MTT(5 mg/ml)溶液,待4~8 h后每孔再加入濃度為10%的十二烷基硫酸鈉100 μl,于第2天通過微量盤讀數(shù)儀在570 nm波長下記錄各孔光密度(D)值??拱┧幰种坡?%)=(1-D給藥組/D對照組)×100%。評價(jià)兩種藥物聯(lián)用的拮抗、協(xié)同或相加效應(yīng)根據(jù)金氏公式觀察q值[2]。公式為q=EA+B/EA+EB-EA×E B。其中的EA+B表示兩藥聯(lián)用抑制率;EA與EB表示單用時(shí)抑制率;q大于1.15代表兩藥聯(lián)用發(fā)揮協(xié)同作用;q小于0.85代表兩藥聯(lián)用發(fā)揮拮抗作用;0.85≤q≤1.15代表兩藥聯(lián)用發(fā)揮相加作用[3]。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較進(jìn)行t檢驗(yàn),組間率的比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn),對于P<0.05代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    在全部大腸癌細(xì)胞中,對照組D值小于0.1者14例。聯(lián)用抗癌藥物對100例大腸癌細(xì)胞的抑制率高于單獨(dú)用藥,其中DDP組與5-Fu+DDP組,CBDCA組與5-Fu+CBDCA組相比,差異顯著(P<0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。按照3組聯(lián)用方案得到對100例大腸癌細(xì)胞發(fā)揮作用的體外抑制率,得到其q值,并根據(jù)金氏公式得到5-Fu+MMC聯(lián)合給藥后q=1.002±0.253,出現(xiàn)拮抗者為22例、相加者為52例、協(xié)同者為26例;5-Fu+DDP組的q=1.042±0.283,出現(xiàn)拮抗者為20例、相加者為38例、協(xié)同者為42例;5-Fu+CBDCA組的q=1.194±0.259,出現(xiàn)拮抗者為14例、相加者為46例、協(xié)同者為40例。

    表1 三種藥物單用以及同5-Fu聯(lián)用后對大腸癌細(xì)胞的抑制率[n=100,(±s),%]

    表1 三種藥物單用以及同5-Fu聯(lián)用后對大腸癌細(xì)胞的抑制率[n=100,(±s),%]

    注:同單藥組相比,**P<0.01

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    3 討論

    目前治療大腸癌的主要方法是以5-Fu為基礎(chǔ)用藥的聯(lián)合化療過程。聯(lián)合用藥能夠產(chǎn)生協(xié)同作用,其臨床療效比各單藥之和要好得多。但是,必須考慮到的是聯(lián)合用藥也可能出現(xiàn)療效下降,即發(fā)生拮抗的可能性,倘若不合理的聯(lián)合用藥將給患者帶來不堪設(shè)想的后果。5-Fu能夠阻礙DNA的合成,造成癌細(xì)胞因DNA合成受阻而死亡;DDP、MMC以及CBDCA能夠破壞DNA結(jié)構(gòu),進(jìn)而將癌細(xì)胞殺滅[4]。所以將5-Fu與上述三種藥物聯(lián)合用藥能夠發(fā)揮互補(bǔ)性作用,從理論上分析應(yīng)當(dāng)具有協(xié)同作用,聯(lián)合給藥后其臨床療效應(yīng)該好于單用5-Fu。本研究的體外藥敏試驗(yàn)測定結(jié)果也的確證實(shí)了上述觀點(diǎn)。據(jù)此,我們推測大腸癌細(xì)胞體外聯(lián)合藥敏試驗(yàn)可能與臨床化療效果存在一定的相關(guān)性,能夠有助于臨床選擇具有協(xié)同作用、摒棄具有拮抗作用的化療藥物組合??傊?,體外抗癌藥物合用藥敏試驗(yàn)是切實(shí)可行的,但其與臨床療效是否具有相關(guān)性尚不能確定,隨著將來對聯(lián)合用藥各藥物之間作用機(jī)理研究全面開展,必將建立起更為科學(xué)的體外聯(lián)合藥敏試驗(yàn)方法。

    [1]翟曉波,李炳生,張毅,等.MTT法和雙瓊脂MTT法測腫瘤藥敏及其臨床應(yīng)用.中國臨床藥學(xué)雜志,1996,5(3):102.

    [2]侯華新,黎丹戎,秦菁,等.黃芩黃酮A對人肝癌細(xì)胞7402的抑制能力及體外增效作用.中國臨床藥學(xué)雜志,2000,9(3):166.

    [3]潘啟超,胥彬.腫瘤藥理學(xué)與化學(xué)治療學(xué).第2版.鄭州:河南醫(yī)科大學(xué)出版社,2000:626-637.

    [4]任建林,田林,梁建芳.大腸癌細(xì)胞原代培養(yǎng)及5-氟脲嘧啶藥敏檢測的研究.山西醫(yī)藥雜志,2010,17(9):824-826.

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