穴位埋線對(duì)衰老模型大鼠慢性應(yīng)激下丘腦-垂體-腎上腺軸的調(diào)節(jié)作用

邊心會(huì) 張 宏 徐朝霞 (廣州市番禺區(qū)中醫(yī)院，廣東 廣州 511400)

下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸作為機(jī)體神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的樞紐，在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和衰老調(diào)節(jié)中起著非常重要的作用。應(yīng)激則是機(jī)體受到強(qiáng)烈刺激后出現(xiàn)的一系列神經(jīng)內(nèi)分泌免疫反應(yīng)，以及由此引起的各種功能和代謝的改變。研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期的慢性應(yīng)激可引起神經(jīng)內(nèi)分泌免疫功能紊亂，加速機(jī)體的衰老進(jìn)程〔1～3〕。本文重在觀察慢性應(yīng)激對(duì)衰老機(jī)體HPA軸的影響以及穴位埋線的調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 健康3月齡SD雄性大鼠48只，SPF級(jí)，體重200～250 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。大鼠按體重隨機(jī)分為四組：空白對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、模型+應(yīng)激組(C組)、模型+應(yīng)激+埋線組(D組)每組12只。大鼠均飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，分籠飼養(yǎng)，每籠4只，飼養(yǎng)溫度21℃ ～24℃，光照時(shí)間為12 h左右，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)固體混合飼料喂養(yǎng)，自由飲食。

1.2 主要試劑與儀器 D-半乳糖廈門(mén)興隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司提供;制動(dòng)應(yīng)激器為有機(jī)玻璃制成，由河南省新鄉(xiāng)縣實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備廠提供;醫(yī)用羊腸線為可吸收性外科縫線3-0鉻制，上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品有限公司生產(chǎn);放免測(cè)量?jī)x由上海日環(huán)儀器一廠生產(chǎn)(型號(hào)TSN-695B);低溫離心機(jī)為德國(guó)Allergra公司生產(chǎn)(型號(hào)X-22R);皮質(zhì)醇(Cor)檢測(cè)藥盒由北京科美東雅生物有限公司提供(批號(hào)060825);促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)檢測(cè)藥盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供(批號(hào)060809);促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)檢測(cè)藥盒由中國(guó)第二軍醫(yī)大學(xué)提供(批號(hào)060801)。

1.3 模型制備 本實(shí)驗(yàn)過(guò)程共8 w。B組、C組與D組連續(xù)8 w給予腹腔注射5%D-半乳糖溶液(生理鹽水配制，120 mg·kg－1·d－1)，每天1次，A 組每天給予腹腔注射等量生理鹽水;C組與D組從第5周開(kāi)始給予制動(dòng)應(yīng)激，應(yīng)激工具為由大鼠固定儀改制而成的限制活動(dòng)筒。將造模大鼠置于應(yīng)激裝置中，應(yīng)激裝置以完全限制大鼠活動(dòng)為度，應(yīng)激每天1次，連續(xù)應(yīng)激4 w，并通過(guò)循序延長(zhǎng)制動(dòng)時(shí)間增加應(yīng)激強(qiáng)度。應(yīng)激時(shí)間分別為d1～d4：60 min/d;d5～d8：90 min/d;d9～d12：120 min/d;d13 ～ d16：150 min/d;d17 ～ d20：180 min/d;d21 ～d24：210 min/d;d25 ～d28：240 min/d。每天應(yīng)激時(shí)間安排在上午9：00 ～12：00。

1.4 埋線取穴與方法 D組從第1周開(kāi)始給予穴位埋線，選取“腎俞雙”、“肝俞雙”、“百會(huì)”、“內(nèi)關(guān)雙”作為穴位埋線處方?！澳I俞”和“百會(huì)一組，”“肝俞”和“內(nèi)關(guān)”一 組，兩組交替埋線。穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》。將大鼠在清醒狀態(tài)下俯臥固定于大鼠固定架上，將醫(yī)用羊腸線剪成0.4～0.6 cm數(shù)小段，用鑷子將其傳入7號(hào)注射針針頭中，然后將預(yù)先剪去針尖的2寸針灸針作為針芯緩慢插入注射針頭管中，組成一套。埋線時(shí)，穴位皮膚局部消毒后，將注射針頭刺入穴位，抵住毫針針尾，緩慢將針頭內(nèi)羊腸線推入穴位內(nèi)，待覺(jué)指下有空虛感后方可出針，并確認(rèn)羊腸線已埋入穴位內(nèi)，然后用消毒干棉球按壓針孔1 min。穴位埋線每周1次，共埋線8次。

1.5 標(biāo)本采集與制備 各組大鼠于第8周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后上午8：00～12：00進(jìn)行稱(chēng)重取材。所有大鼠腹腔注射麻醉(6%水合氯醛0.3 ml/100 g)，快速眼球取血，將4 ml全血導(dǎo)入預(yù)先準(zhǔn)備的試管中，于 4℃中靜置 1 h后離心。離心條件：4℃，3 000 r/min，15 min。離心后取上清液，于－30℃中保存，待測(cè)血清Cor和血漿ACTH。取血后迅速斷頭，于冰盤(pán)中迅速開(kāi)顱取下丘腦，并稱(chēng)重。然后下丘腦于冰浴中用玻璃勻漿器勻漿，低溫離心(4℃，4 000 r/min，20 min)，取上清液保存于 －30℃中，待測(cè)下丘腦CRH。用放射免疫法分別測(cè)定三種激素的含量，檢測(cè)步驟分別依據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件處理，數(shù)據(jù)均以s表示，多組間資料統(tǒng)計(jì)采用方差分析進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1。B組、C組的血清Cor含量明顯高于A組(P＜0.05，P＜0.01);而C組血清 Cor的含量比 B組升高更明顯(P＜0.05);而D組血清Cor含量明顯降低，與C組相比有顯著性差異(P＜0.05)。與A組相比，B組血漿ACTH、下丘腦CRH含量有所升高，但差異無(wú)顯著性(P＞0.05);C組兩種激素含量升高明顯，與A組相比有顯著性差異(P＜0.05);D組兩種激素含量明顯降低，與C組相比差異有顯著性(P＜0.05)。

表1 各組大鼠血清Cor、血漿ACTH和下丘腦CRH的含量( s，n=12)

表1 各組大鼠血清Cor、血漿ACTH和下丘腦CRH的含量( s，n=12)

與A組比較：1)P＜0.05;2)P＜0.01;與C組比較;3)P＜0.05

組別 血清Cor(pg/ml)血漿ACTH(pg/ml)下丘腦CRH(pg/mg)A組21.58±3.26 34.02±5.22 73.18±35.23 B組 37.93±5.451)3) 51.97±7.53 125.27±53.55 C組 55.04±6.952) 62.79±9.731) 213.20±45.541)D組 37.28±8.233) 35.13±9.13) 84.46±35.673)

3 討論

HPA軸主要由下丘腦、垂體和腎上腺組成，三者構(gòu)成一種級(jí)別上的相互協(xié)調(diào)的反饋調(diào)節(jié)系統(tǒng)。HPA軸作為神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的樞紐，在維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和機(jī)體衰老調(diào)節(jié)中起著非常重要的作用，而機(jī)體對(duì)外環(huán)境的適應(yīng)能力和對(duì)應(yīng)激耐受能力的下降是衰老的突出特征，因此可以說(shuō)HPA軸功能的增齡性變化參與了機(jī)體的衰老過(guò)程，是導(dǎo)致機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)調(diào)節(jié)能力下降的重要原因。HPA軸功能亢進(jìn)可引發(fā)神經(jīng)、內(nèi)分泌和免疫功能的廣泛改變，導(dǎo)致內(nèi)環(huán)境紊亂，促進(jìn)機(jī)體衰老。

應(yīng)激是機(jī)體受到強(qiáng)烈刺激后發(fā)生的以交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)和HPA軸功能增強(qiáng)為主要特點(diǎn)的非特異性反應(yīng)。HPA軸的激活及由此引起的GC分泌增加，是應(yīng)激反應(yīng)最重要的特征。當(dāng)機(jī)體感受應(yīng)激原時(shí)，HPA軸興奮性提高，腎上腺分泌糖皮質(zhì)激素(GC)水平升高，從而動(dòng)員儲(chǔ)備，適應(yīng)環(huán)境〔4〕。HPA軸在應(yīng)激時(shí)的激活是機(jī)體對(duì)應(yīng)激作出的一種適應(yīng)性反應(yīng)，在保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能以應(yīng)付不良刺激方面有重要的意義。但若機(jī)體長(zhǎng)期處于應(yīng)激狀態(tài)，HPA軸功能持續(xù)亢進(jìn)，使機(jī)體長(zhǎng)期處于高水平的GC中，則嚴(yán)重影響人類(lèi)的身心健康，加速機(jī)體的正常衰老過(guò)程。研究發(fā)現(xiàn)，HPA軸應(yīng)激反應(yīng)的高位調(diào)節(jié)中樞是海馬，長(zhǎng)期持續(xù)的應(yīng)激選擇性損傷海馬，使海馬對(duì)HPA軸功能的抑制性調(diào)節(jié)作用減弱，導(dǎo)致HPA軸功能長(zhǎng)期亢進(jìn)，從而引發(fā)神經(jīng)內(nèi)分泌功能紊亂，促進(jìn)機(jī)體衰老過(guò)程〔5〕。中醫(yī)理論認(rèn)為，慢性應(yīng)激主要通過(guò)影響人的心、肝、腎、腦等功能，使機(jī)體出現(xiàn)氣血流通不暢，臟腑功能紊亂，陰陽(yáng)失調(diào)，加速機(jī)體的衰老。本實(shí)驗(yàn)選取腎俞、肝俞、內(nèi)關(guān)、百會(huì)作穴位埋線治療。因?yàn)楦斡岷湍I俞為肝腎兩臟的背俞穴，是臟腑氣血的匯聚地，能補(bǔ)腎疏肝、理氣和血、調(diào)節(jié)陰陽(yáng)、強(qiáng)腰健骨。內(nèi)關(guān)為手厥陰心包經(jīng)絡(luò)穴，有益氣養(yǎng)心、安神除煩、寬胸理氣等作用。百會(huì)為督脈穴位，為三陽(yáng)五會(huì)，與腦髓關(guān)系尤為密切，具有協(xié)調(diào)百脈之功。穴位埋線四穴，可疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)節(jié)平衡、益智復(fù)聰，提高抵抗力，改善學(xué)習(xí)記憶力。穴位埋線療法，是一種簡(jiǎn)便易行的，融多種療法、多種效應(yīng)于一體的復(fù)合治療方法〔6〕，具有省時(shí)方便、作用柔和持久的特點(diǎn)，通過(guò)穴位埋線刺激，可改善衰老機(jī)體和慢性應(yīng)激導(dǎo)致的HPA軸功能紊亂，減輕應(yīng)激損傷，延緩衰老。

1 Seckl JR.Glucocorticoids，ageing and nerve cell damage〔J〕.J Neuroendocrinol，2000;12(8)：709-10.

2 王曉英，包天桐.應(yīng)激與衰老的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中國(guó)自然醫(yī)學(xué)雜志，2001;3(4)：199-202.

3 韓 娟.慢性應(yīng)激對(duì)大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響及中藥的調(diào)節(jié)作用〔J〕.吉林中醫(yī)藥，2002;22(4)：54-5.

4 McEwen BS.Stress and the aging hippocampus〔J〕.Front Neuroendocrinol，1999;20(1)：49-70.

5 連曉媛，張均田，包天桐.海馬與下丘腦-垂體-腎上腺軸功能的調(diào)節(jié)〔J〕.國(guó)外醫(yī)學(xué)·內(nèi)分泌學(xué)分冊(cè)，1998;18(4)：169.

6 尹改珍，霍新慧.穴位埋線療法現(xiàn)代臨床應(yīng)用〔J〕.針灸臨床雜志，2006;22(10)：58.