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    RP-HPLC-ELSD法測定野生白花丹藥材1~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量*

    2012-11-14 11:17:36戴先芝黃艷菲李艷丹張吉仲
    云南中醫(yī)中藥雜志 2012年2期
    關(guān)鍵詞:谷甾醇葉中白花

    戴先芝,丁 玲,黃艷菲,李艷丹,張吉仲,劉 圓△

    (1.阿壩師范高等??茖W(xué)校,四川 汶川623002;2.西南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院,四川 成都610041)

    白花丹是雙子葉植物藍(lán)雪科植物白雪花(Pl umbago zeyl anica L.)的全草[1]。為多民族醫(yī)常用藥材,民間應(yīng)用廣泛,具有散瘀消腫、祛風(fēng)止痛等功效[1]。收載于1996年版《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》第二冊和1998年版國家衛(wèi)生部部頒維藥標(biāo)準(zhǔn)。文獻(xiàn)資料及本課題組前期的研究表明,白花丹具有抗腫瘤、抗炎、抗肝損傷等藥理作用[2~8]。目前國內(nèi)外日益重視白花丹藥材的應(yīng)用和開發(fā),除有效成分白花丹醌外,對其有效成分β-谷甾醇的研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)擬對野生白花丹藥材1~12月份的根、莖、葉中的β-谷甾醇含量進(jìn)行測定,以期為白花丹野生變家種提供有用的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 儀器 Waters 2695系列高效液相色譜儀(Waters公司),Empower色譜工作站,浙江大學(xué)N2000色譜工作站,Sedex-75型蒸發(fā)光散射檢測器(奧泰公司);色譜柱為迪馬C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)。RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。METTLER AE 240雙量程分析天平。

    1.2 試藥 β-谷甾醇對照品(成都市藥檢所,供含量測定用);甲醇為色譜純;所用提取試劑均為分析純。

    1.3 藥材 實(shí)驗(yàn)所用藥材樣品采自于白花丹最適產(chǎn)地云南西雙版納(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所南藥園),經(jīng)西南民族大學(xué)劉圓教授鑒定。

    2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件 色譜柱為迪馬C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相為純甲醇;流速為1.0 mL/min;柱溫25℃;蒸發(fā)光散射檢測器檢測參數(shù)為漂移管溫度65℃,N2流速為2.5 L·min-1。色譜圖見圖1~圖2。

    圖1 β-谷甾醇對照品HPLC色譜圖(A)

    圖2 樣品HPLC色譜圖(B)

    2.2 對照品溶液的制備 精密稱取β-谷甾醇對照品10.3 mg,用甲醇溶解于50 mL容量瓶中,制成0.103 mg/mL的溶液作為對照品。

    2.3 樣品溶液的制備 精密稱取白花丹藥材樣品約3 g,置于索氏提取器中,精密加入150 mL的甲醇溶液,索氏提取3 h,取出放冷,揮去溶劑,用甲醇溶解于25 mL容量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。

    2.4 方法學(xué)考察

    2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取β-谷甾醇對照品溶液,依選定色譜條件,測定不同進(jìn)樣量下β-谷甾醇的峰面積值,得回歸方程為:Y=1.500 5 X+5.683 6,r=0.998(n=6)。表明β-谷甾醇在0.103~2.575μg范圍內(nèi)與峰面積值線性關(guān)系良好。

    2.4.2 精密度試驗(yàn) 分別精密吸取β-谷甾醇10μL,各重復(fù)進(jìn)樣6次,得RSD為0.015%,結(jié)果表明精密度良好。

    2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品根溶液20μL,按選定色譜條件下于0、2、4、6、8 h測定樣品溶液中β-谷甾醇峰面積值,得RSD為0.029%,表明樣品穩(wěn)定性良好。

    2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 分別精密取同一白花丹根藥材6份,各約3 g,按樣品溶液制備項(xiàng)下方法制備樣品,按照選定的色譜條件測定6份樣品溶液中β-谷甾醇的含量,得RSD為1.284%。

    2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 精確稱取已知含量的白花丹藥材9份,各約3.0 g,分別加入濃度為0.131 mg/mLβ-谷甾醇對照品溶液,按樣品溶液制備方法制備并測定,結(jié)果見表1。

    表1 β-谷甾醇加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

    2.5 樣品含量測定 取白花丹野生1~12月份藥材根、莖、葉按2.3項(xiàng)下樣品溶液的制備方法制備,進(jìn)樣量為10μL,測定β-谷甾醇的含量,結(jié)果見表2。

    表2 1~12月份根、莖、葉中β-谷甾醇的含量(n=3)

    3 小結(jié)與討論

    野生白花丹1~12月份藥材根中β-谷甾醇含量變化范圍為0%~0.0681%,莖中β-谷甾醇含量變化范圍為0%~0.0874%,葉中β-谷甾醇含量變化范圍為0.0424%~0.1367%。白花丹藥材中β-谷甾醇含量在葉中含量最高,根中含量最低或未檢出,說明有些少數(shù)民族地區(qū)采用葉來抗炎、消腫是有科學(xué)依據(jù)的。野生白花丹葉可作為再生資源。由含量變化可看出β-谷甾醇含量在3、5、7、8月份最高,冬季含量最低。

    [1]宋立人,洪 恂,丁緒亮,等 .現(xiàn)代中藥學(xué)大詞典[M].上冊 .北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:283.

    [2]甘炳春,楊新全,李榕濤 .黎族民間治療外傷藥用植物的收集整理[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志,2005,77:357~360.

    [3]張秀蘭,史瑞芽 .白花丹煎劑外洗治療瘡瘍206例的護(hù)理[J].護(hù)理學(xué)雜志,1993,8(5):223.

    [4]趙霞,陸陽 .不同劑量白花丹醌對豬多形白細(xì)胞中花生四烯酸的代謝產(chǎn)生相反作用[J].中草藥,1996,27(5):315.

    [5]趙鐵建,鐘振國,方卓,等 .白花丹提取物抗小鼠肝纖維化作用的研究[J].廣西中醫(yī)藥,2005,28(4):50~52.

    [6]趙艷麗,陸道培 .白花丹醌對人急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的體外效應(yīng)[J].中國實(shí)驗(yàn)血液雜志,2006,14(2):208~211.

    [7]劉圓,劉超,顏曉燕,等 .白花丹不同提取部位體外抗腫瘤及急毒研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2007,23(4):557~558.

    [8]張吉仲,劉圓,焦?jié)?.白花丹不同有機(jī)溶劑提取物和白花丹醌對移植性乳腺癌和S180肉瘤的作用[J].2008,24(8):1040~1043.

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