基于UPLC/Q-TOF-MS不同比例人參配伍藜蘆增毒的物質(zhì)基礎(chǔ)及動(dòng)物毒性關(guān)聯(lián)性研究

楊 亮, 王宇光, 梁乾德, 劉浩生, 馬增春, 肖成榮,譚洪玲, 湯響林, 張伯禮, 高 月

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，安徽 合肥 230032； 2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所藥理毒理研究室，北京 100850；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

2012-04-26；

2012-07-10

國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(批準(zhǔn)號(hào)：2011CB505304,2012CB518402), 國(guó)家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào)：81073149)， 北京市自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào)：7112110)資助

楊 亮(1989～)，男，碩士研究生，中藥藥理學(xué)專業(yè)。E-mail: yangliang19890322@163.com

王宇光,男，從事中藥藥理學(xué)研究。E-mail:wang-yuguang@139.com

高 月，女，博士，研究員，從事中藥藥理毒理研究。E-mail: gaoyue@nic.bmi.ac.cn

基于UPLC/Q-TOF-MS不同比例人參配伍藜蘆增毒的物質(zhì)基礎(chǔ)及動(dòng)物毒性關(guān)聯(lián)性研究

楊 亮1,2, 王宇光2, 梁乾德2, 劉浩生1, 馬增春2, 肖成榮2,譚洪玲2, 湯響林2, 張伯禮3, 高 月2

(1.安徽醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院，安徽 合肥 230032； 2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所藥理毒理研究室，北京 100850；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193)

通過(guò)小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)，探索中藥十八反中藜蘆與人參藥對(duì)不同配比時(shí)毒性變化趨勢(shì)，結(jié)合超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC/Q-TOF-MS)對(duì)不同配比對(duì)應(yīng)的毒性成分進(jìn)行分析，采用MassLynx4.1分析軟件，結(jié)合主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判別(OPLS-DA)分析生物堿類成分變化。固定藜蘆用量時(shí)，藜蘆與人參在不同配比情況下小鼠死亡率隨人參劑量增大呈下降趨勢(shì)，藜蘆酰棋盤花胺、3-當(dāng)歸酰棋盤花胺、紅介芬胺、計(jì)米亭堿、藜蘆胺和3-藜蘆?；?jì)明堿等生物堿含量在不同配比中的變化趨勢(shì)與動(dòng)物毒性變化一致。以上幾種生物堿在藜蘆與人參合用時(shí)可能是毒性效應(yīng)的關(guān)鍵成分，能夠反映配伍毒性的變化趨勢(shì)。

藜蘆；人參；急性毒性；UPLC/Q-TOF MS

中藥成分復(fù)雜，自古人們對(duì)其探索的最大難點(diǎn)就是其化學(xué)本質(zhì)，中藥復(fù)方更是如此，但中藥在臨床上應(yīng)用十分廣泛。中藥十八反是中藥理論中重要組成部分，其配伍禁忌一方面限制了中藥在臨床上的應(yīng)用，同時(shí)也給中藥蒙上了一層神秘的面紗[1-2]。藜蘆與人參就是中藥十八反中非常重要的一對(duì)相反藥對(duì)。藜蘆有大毒，在中藥復(fù)方中主要用于催吐，在臨床使用時(shí)相當(dāng)謹(jǐn)慎；人參是常見(jiàn)的補(bǔ)氣藥，也是名貴藥材，享有“東北三寶”的美譽(yù)，但是受傳統(tǒng)中藥“十八反”理論的影響，限制了其臨床使用[3-6]，因此探究其相反作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，并在化學(xué)層面上弄清二者不同配比對(duì)其毒性成分溶出和毒性影響的規(guī)律，對(duì)理解相關(guān)中藥配伍禁忌和臨床應(yīng)用都有重要意義。目前研究藜蘆化學(xué)成分的文獻(xiàn)并不少見(jiàn)[7-10]，藜蘆中主要的毒性來(lái)源為其生物堿類，因此對(duì)生物堿類成分變化研究顯得尤為關(guān)鍵。

本實(shí)驗(yàn)是在前期兩味單藥急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行的，即藜蘆半數(shù)致死量(LD50)為2.566 g/kg,人參最大耐受量(MTD)為80 g/kg。首先固定藜蘆用量，將藜蘆與人參不同配比的水煎液進(jìn)行小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)，并對(duì)上述水煎液對(duì)應(yīng)進(jìn)行物質(zhì)基礎(chǔ)分析，即在兩個(gè)層面上設(shè)計(jì)本實(shí)驗(yàn):一方面考察藜蘆與人參在不同配比時(shí)的動(dòng)物毒性變化趨勢(shì)，另一方面利用超高效液相色譜-飛行時(shí)間電噴霧質(zhì)譜技術(shù)(UPLC/Q-TOF MS)分析毒性成分的變化規(guī)律，再結(jié)合主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法判別分析(OPLS-DA)[11-13]，在化學(xué)層面上分析藜蘆與人參在不同配比情況下毒性成分的變化規(guī)律，將毒性效應(yīng)與毒性成分變化進(jìn)行對(duì)應(yīng)性研究[14-15]，希望從中發(fā)現(xiàn)藜蘆與人參配伍相反的規(guī)律及發(fā)揮毒性的物質(zhì)，以期為臨床合理應(yīng)用相關(guān)藥物提供參考。

1 試驗(yàn)部分

1.1試劑和儀器

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料 KM小鼠雌雄各110只，18～22 g，6～8周齡，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供[合格證號(hào)：SCXK-(軍)2007-004]。

藜蘆：購(gòu)自安徽豐原銅陵中藥飲片公司，產(chǎn)自長(zhǎng)春華家；人參：購(gòu)自吉林銀河參業(yè)科技開(kāi)發(fā)有限公司，產(chǎn)自吉林撫松。均經(jīng)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所馬百平教授鑒定，分別為百合科藜蘆屬植物藜蘆VeratrumnigrumLinn.的干燥根和五加科人參屬植物人參PanaxginsengC.A. Mey.的干燥根。

1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器 Acquity UPLC-Synapt MS色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；Mass Lynx V14.1質(zhì)譜工作站：美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；Millipore Simplicity純水儀；Herarus Labofuge 400R冷凍離心機(jī)；電子天平(BS 223S型)：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE52CS型)：上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；電子調(diào)溫電熱套(98-1-B型)：天津市泰斯特儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋：北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品。

1.1.3實(shí)驗(yàn)試劑 乙腈(色譜純)：購(gòu)自Fisher Scientific公司；超純水經(jīng)Millipore純水系統(tǒng)純化；甲酸(HPLC級(jí))[16]。

1.2實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.2.1供試樣品的制備 藜蘆、人參按一定量精確稱重混合，加入700 mL蒸餾水，浸泡1 h后煎煮，微沸1 h提取濾液，3層紗布過(guò)濾。稱量濾液，第二煎加入與第一煎得到的濾液等量的蒸餾水，煎煮1 h后用3層紗布過(guò)濾提取煎液，合并兩次濾液，即為藜蘆人參的合煎液；將上述水煎液置于無(wú)菌容器中待動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)用。

將上述制備的煎液靜置，以13 000 r/min離心10 min，取上清液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾后，于4 ℃保存，待成分分析檢測(cè)。各組的實(shí)驗(yàn)用量分布列于表1。

1.2.2急性毒性實(shí)驗(yàn) KM小鼠適應(yīng)2～3天后，隨機(jī)分成A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K共11組，分別對(duì)應(yīng)藜蘆、人參的配比藥對(duì)10∶1、8∶1、6∶1、4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10，給藥前12 h禁食不禁水，精確稱重后，按照0.4 mL/10 g口服給藥，觀察兩周，并記錄小鼠臨床表現(xiàn)和死亡情況。

表1 各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所用的藜蘆、人參的不同配比

1.2.3物質(zhì)成分分析實(shí)驗(yàn) 采用Waters Acquity BEH C18(100 m×2.1 mm×1.7 μm)色譜柱；柱溫45 ℃，流速0.5 mL/min，進(jìn)樣量5 μL；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液；流動(dòng)相B：0.1%甲酸乙腈溶液；正離子模式，梯度洗脫(0～1.0 min：2%B；1.0～2.0 min：2%～5%B；2.0～5.0 min：5%～20%B；5.0～7.0 min：20%～30%B；7.0～10.0 min：30%～33%B；10.0～13.0 min：33%～36%B；13.0～17.0 min：36%～40%B；17.0～18.0 min：40%～100%B；18.0～19.0 min：100%～2%B；20.0 min：2%B)。

采用電噴霧電離離子源(ESI)，正離子模式檢測(cè)；質(zhì)量掃描范圍：m/z100～1 200；毛細(xì)管電壓3 kV；錐孔電壓30 V；離子源溫度100 ℃；霧化溫度450 ℃；殼氣流速900 L/h；以亮氨酸-腦啡肽進(jìn)行精確質(zhì)量校正([M+H]+556.277 1)。

液質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)采用Waters公司提供的Marker Lynx 4.1軟件進(jìn)行峰提取、峰對(duì)齊及歸一化等處理，利用PCA和OPLS-DA找出各組之間化合物指紋圖譜的差異，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，對(duì)潛在的化學(xué)標(biāo)記物進(jìn)行快速鑒定。

2 結(jié)果與討論

2.1實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1急性毒性實(shí)驗(yàn) 固定藜蘆用量為2.566 g/kg，按藜蘆、人參10∶1～1∶10水煎液進(jìn)行小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果列于表2。

表2 藜蘆、人參不同配比動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.2物質(zhì)成分分析實(shí)驗(yàn) 將上述10∶1～1∶10水煎液進(jìn)行動(dòng)物毒性實(shí)驗(yàn)同時(shí)，對(duì)應(yīng)地進(jìn)行各組水煎液的物質(zhì)成分分析，經(jīng)過(guò)MassLynx4.1分析軟件，結(jié)合主成分分析及正交偏最小二乘法判別對(duì)差異成分進(jìn)行了鑒定，將差異成分在總離子流圖中做出標(biāo)記，示于圖1。為了更清晰的表明毒性成分與毒性趨勢(shì)的相關(guān)性，將兩種藥物A～K組合煎液在正離子模式下檢測(cè)得到的差異成分化合物示于圖2，用正交偏最小二乘法得到的差異成分鑒別結(jié)果示于圖3。其中化合物5和6尚不能準(zhǔn)確區(qū)分，化合物7未能鑒定。動(dòng)物死亡趨勢(shì)圖示于圖4。主要的差異物質(zhì)離子流提取及質(zhì)譜圖示于圖5。

實(shí)驗(yàn)分析中涉及到的化合物經(jīng)過(guò)MHDB數(shù)據(jù)庫(kù)的檢索以及參考相關(guān)文獻(xiàn)得到[17-19]。將各組總分析成分列于表3，A組與K組分析成分單獨(dú)列于表4。

注：A.10∶1; B.8∶1; C.6∶1, D.4∶1; E.2∶1; F.1∶1; G.1∶2; H.1∶4; I.1∶6; J.1∶8; K.1∶10圖1 藜蘆人參不同配比正離子模式總離子流圖Fig.1 The total ion chromatogram of veratrum nigrum and ginseng with different ratio

圖2 藜蘆人參合煎液A～K組正離子模式下差異成分化合物Fig.2 Selected ion intensity trend plots analyzed using Marker lynx 4.1 software

圖3 人參藜蘆合煎液A～K組正離子 圖4 藜蘆人參不同配比動(dòng)物死亡趨勢(shì)圖模式下正交偏最小二乘法差異成分鑒別 Fig.4 The chart of death tendency from A to K Fig.3 OPLS-DA/Scores plot from A to K of ginseng and veratrum nigrum obtained using Pareto scaling with mean centering

圖5 藜蘆人參不同配比的主要差異物質(zhì)正離子模式離子流圖Fig.5 The ion chromatogram of main toxicity component from veratrum nigrum and ginseng with different ratio

峰號(hào)保留時(shí)間/min化合物名稱分子式[M+H]+/(m/z)測(cè)得分子質(zhì)量/u理論分子質(zhì)量/u質(zhì)量偏差/10-614．72VerdineC27H41O5N460．3056460．30631．5226．02VeratrosineC33H49O7N572．3593572．35871．04836．49VeratrumalkamineC36H51O10N658．3597658．35910．91146．65RubjervineC27H43O2N414．3359414．3372-3．156．80GermidineC34H53O10N636．3753636．37480．78667．16GermidineC34H53O10N636．3746636．3748-0．31477．42Unknown-472．3421--87．46VeratramineC27H39O2N410．3048410．30592．6897．633?VeratroylgermineC36H53O11N676．3691676．3697-0．887108．273?AngeloylzygadenineC32H49O8N576．3531576．3536-0．868

表4 A組與K組人參藜蘆合煎液的正離子模式下的分子離子峰鑒別

2.1.3A組與K組分析結(jié)果 為了進(jìn)一步挖掘毒性成分的變化，選取藜蘆與人參配伍比例差異最大的兩組，也是毒性效應(yīng)差別最為明顯的A組和K組進(jìn)行分析，試圖進(jìn)一步探究毒性成分與毒性趨勢(shì)的相關(guān)性。其中物質(zhì)成分差異圖示于圖6～8，各配伍組對(duì)應(yīng)的動(dòng)物毒性趨勢(shì)圖示于圖9。

2.2討論

人參與藜蘆作為中藥十八反中的重要藥對(duì)，要想真正弄清其在體內(nèi)代謝及發(fā)揮藥效的有效成分，必須研究其物質(zhì)成分與毒性的關(guān)聯(lián)性。

在小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)中，固定藜蘆用量，當(dāng)人參劑量較低時(shí)，小鼠死亡率較高，隨著人參劑量增大，小鼠死亡率呈下降趨勢(shì)。說(shuō)明人參與藜蘆配伍時(shí)人參比例較小時(shí)毒性增大，隨著人參比例增加毒性下降。提示配伍禁忌不是絕對(duì)的，與二者用量有密切關(guān)系，人參用量大時(shí)，可能還會(huì)有減毒作用產(chǎn)生。

在物質(zhì)成分分析實(shí)驗(yàn)中[20]，分析了從A組(藜蘆：人參=10∶1)到K組(藜蘆：人參=1∶10)的物質(zhì)成分變化，其中藜蘆酰棋盤花胺、3-當(dāng)歸酰棋盤花胺、紅介芬胺、計(jì)米亭堿、藜蘆堿和3-藜蘆?；?jì)明堿等隨著人參比例增大含量下降，與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合，也說(shuō)明這些成分在藥物發(fā)揮毒性效應(yīng)中起到重要作用。然后選取了配伍比例相差最大的A組和K組進(jìn)行分析，這兩組也是毒性效應(yīng)差別最大的兩組。結(jié)果顯示，A組中藜蘆新堿、計(jì)米亭堿、藜蘆胺和3-當(dāng)歸酰棋盤花胺的含量明顯高于K組。

圖6 藜蘆人參合煎液A組與K組正離子模式下正交偏最小二乘法差異成分鑒別Fig.6 OPLS-DA/Scores plot between A and K of ginseng and veratrum nigrum obtained using Pareto scaling with mean centering

圖7 藜蘆人參合煎液A組與K組正離子模式下正交偏最小二乘法差異成分的S曲線Fig.7 OPLS-DA/S-Plot between A and K ginseng and veratrum nigrum obtained using Pareto scaling with mean centering

圖8 藜蘆人參合煎液A組與K組正離子模式下差異成分化合物Fig.8 Selected ion intensity trend plots analyzed using Marker lynx 4.1 software

圖9 藜蘆人參合煎液A組與K組動(dòng)物死亡趨勢(shì) Fig.9 The chart of death tendency between A and K

綜合考慮兩部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果：藜蘆中含有的毒性生物堿很多，與人參配伍后，部分生物堿的含量在人參加入量較小時(shí)增大明顯，隨著人參加入量增大含量下降。反應(yīng)在動(dòng)物急性毒性實(shí)驗(yàn)上，即人參量小死亡率高，人參量大死亡率下降。因此在臨床上，中藥的劑量與毒性之間存在一定的關(guān)聯(lián)性，同時(shí)毒性成分的變化可能是影響到動(dòng)物死亡率變化的重要因素，這為進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)檢測(cè)提供了線索。

[1] 王宇光,高 月. 中藥十八反藥理毒理研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003,9(3):60-63.

[2] 龔 雪,王 建,王 瓊,等.“諸參”叛藜蘆的實(shí)驗(yàn)研究概述[J]. 山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2007,31(6):523-525.

[3] 王 斌,李慧梁,湯 建,等. 藜蘆的黃酮類化學(xué)成分研究[J]. 藥學(xué)服務(wù)與研究,2007,7(5):347-349.

[4] 張 旭,宋鳳瑞,王隸書(shū),等. 人參與藜蘆配伍化學(xué)成分變化的HPLC-ESI-MS與ESI-MS研究[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào),2007,65 (9):829-833.

[5] 聶利月,湯 建,李慧梁,等. 興安藜蘆乙酸乙酯部位化學(xué)成分的研究[J] .中國(guó)藥學(xué)雜志,2008,43(13):971-973.

[6] KAUFMAN A, BUTCHER P, MADEN K, et al.

Ultra-performance liquid chromatography coupled to time of fight mass spectrometry (UPLC-TOF): A novel tool for multiresidue screening of veterinary drugs in urine Kathryn [J].maden Analytica Chimica Acta, 2007, 586:13-21.

[7] 王 斌. 藜蘆的化學(xué)成分研究[D]. 上海:第二軍醫(yī)大學(xué), 2007.

[8] 聞偉鋒. 烏蘇里藜蘆化學(xué)成分研究[D].大連:大連理工大學(xué),2006.

[9] 周雪峰. 烏蘇里藜蘆化學(xué)成分分離與鑒定[D].大連:大連理工大學(xué),2010.

[10] 呂軼峰. 狹葉藜蘆的化學(xué)成分研究及部分生物堿的生物轉(zhuǎn)化[D].沈陽(yáng):沈陽(yáng)藥科大學(xué),2008.

[11] LI S L, SONG J Z, QIAO C F, et al. A novel strategy to rapidly explore potential chemical markers for the discrimination between raw and processedRadixRehmanniaeby UHPLC-TOFMS with multivariate statistical analysis[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2009， 51(4): 812-823.

[12] 梁愛(ài)葵,于 艷,楊洪武,等.藜蘆與人參三七洋參配伍后藜蘆定的含量變化研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2012,39(5):908-909.

[13] TETTEY-AMLALO R N O, KANFER I. Rapid UPLC-MS/MS method for the determination of ketoprofen in human dermal microdialysis samples[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis， 2009,50:580-586.

[14] 宿樹(shù)蘭, 段金鰲, 李文林,等. 基于物質(zhì)基礎(chǔ)探討中藥“十八反”配伍致毒/增毒機(jī)制[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(1):123-129.

[15] 王辰允, 葉 璇, 王宇光,等. 人參與藜蘆合用對(duì)CYP1A酶活性的影響[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(2):104-106.

[16] 王宇光 ,王 超, 梁乾德,等.十八反中藜蘆與人參配伍化學(xué)成分變化的UPLC/Q-TOF MS研究[J] .中國(guó)科學(xué),2011,41(10): 925-932.

[17] YUE H, PI Z F, SONG F R, et al. Studies on the aconitine- type alkaloids in the roots ofAconitumCarmichaeliDebxby HPLC/ESIMS/MSn[J]. Talanta, 2009, 77: 1 800-1 807.

[18] ZHENG X T, SHI P Y, CHENG Y Y, et al. Rapid analysis of a Chinese herbal prescription by liquid chromatography-time-of fight tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2008, 1 206: 140-146.

[19] 孟憲生,康廷國(guó), 葉挺祥,等. 中藥細(xì)辛與藜蘆配伍化學(xué)成分變化的UPLC/Q-TOF MS研究[J].中華中醫(yī)藥雜志, 2010,28(4):754-759.

[20] 楊瑞杰,李緒文,張培旭,等.離子液體均勻提取-高效液相色譜法測(cè)定參附注射液中4中單酯型烏頭堿的含量[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào),2011,32(12):2 752-2 756.

UPLC/Q-TOF-MSBasedtheDiversityofToxiferousCompositionoftheToxicityofAnimalsandinDifferentCombinationofVeratrumNigrumandGinseng

YANG Liang1,2, WANG Yu-guang2, LIANG Qian-de2, LIU Hao-sheng1, MA Zeng-chun2, XIAO Cheng-rong2, TAN Hong-ling2, TANG Xiang-lin2, ZHANG Bo-li3, GAO Yue2

(1.GraduateSchoolofAnHuiMedicalUniversity,Hefei230032，China; 2.InstituteofRadiationandIrradiationMedical,AcademyofMilitaryMedicalSciences,Beijing100850,China; 3.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,Tianjin300193,China)

In order to study toxicity changes in different matching between the herbal ginseng and veratrum nigrum of eighteen incompatible medication in traditional medicine, the acute toxicity of mice treated with veratrum nigrum-ginseng combination of the eighteen incompatibal (Shi Ba Fan) was explored. UPLC/TOF-MS with Principal Components Analysis (PCA) were used to analyze the same samples used in acute toxic experiment. The results showed that death rate of mice was decreased in the rise of compatibility of ginseng with fixed dose of veratrum nigrum, toxicity alkaloid series such as veratrosine, veratrum alkamine, 3-angeloylzygadenine, germidine, veretramine, rubijervine were also increased. Therefore, above alkaloid series may be key factors contributed to the poisoning effect of ginseng combined with veratrum nigrum.

veratrum nigrum; ginseng; acute toxicity; UPLC/Q-TOF-MS

O 657.63

A

1004-2997(2012)05-0257-08