• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    非水相介質(zhì)酶法轉(zhuǎn)化制備乙酸3-甲硫基丙醇酯工藝

    2012-10-28 01:46:14張佳嬋王成濤尹麗麗孫寶國
    食品科學(xué) 2012年8期
    關(guān)鍵詞:丙醇無溶劑硫基

    張佳嬋,王成濤*,趙 磊,尹麗麗,孫寶國

    (北京工商大學(xué) 食品添加劑與配料北京高校工程研究中心,北京市食品風(fēng)味化學(xué)重點實驗室,北京 100048)

    非水相介質(zhì)酶法轉(zhuǎn)化制備乙酸3-甲硫基丙醇酯工藝

    張佳嬋,王成濤*,趙 磊,尹麗麗,孫寶國

    (北京工商大學(xué) 食品添加劑與配料北京高校工程研究中心,北京市食品風(fēng)味化學(xué)重點實驗室,北京 100048)

    研究脂肪酶催化合成天然乙酸3-甲硫基丙醇酯的關(guān)鍵因素及條件。結(jié)果表明:固定化脂肪酶Novozym 435是無溶劑體系和正己烷體系中最佳催化劑,加酶量、分子篩用量、乙酸加入次數(shù)、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間等因素對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成有重要影響。在無溶劑體系體系,加有1.06g 3-甲硫基丙醇、0.6g乙酸的反應(yīng)中正交試驗設(shè)計優(yōu)化的條件為:加酶量50mg、分子篩加入量2g、反應(yīng)溫度42℃、反應(yīng)總時間30h,乙酸分3次加入,間隔時間為2h,搖床轉(zhuǎn)速為150r/min,乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率達(dá)42.4%。

    3-甲硫基丙醇;乙酸3-甲硫基丙醇酯;脂肪酶Novozym 435;非水相轉(zhuǎn)化;無溶劑體系

    3-甲硫基丙醇、乙酸-3-甲硫基丙醇酯(ethyl-3-methyl-thiopropionate,EMTP)、甲酸3-甲硫基丙醇酯(methyl-3-methylthio- propionate,MMTP)天然存在于多種水果、酒中,是3種重要的含硫香料[1-2],是美國食用香料與提取物制造者協(xié)會公布的安全香料,其FEMA編號分別為3415、3883、2720。EMTP和MMTP具有濃烈的菠蘿香氣,是調(diào)配菠蘿、柑橘、辣根、番茄、洋蔥、豬肉、牛肉、雞肉、巧克力等多種果味香精、肉味香精和酒用香精的常用香料[3],在烘烤食品、果醬、飲料、糖果、飲料、醫(yī)藥、日化等工業(yè)廣闊應(yīng)用[3]。

    目前含硫類香料主要通過化學(xué)合成生產(chǎn),如乙酸3-甲硫基丙醇酯生產(chǎn)以乙酸鈉(或?qū)妆交撬?為催化劑,3-甲硫基丙醇與乙酸酐或酰氯進(jìn)行酯化反應(yīng)制得[4],或以甲醇鈉為催化劑,苯為溶劑,通過甲硫醇與丙烯酸乙酯反應(yīng)制備[5]。盡管化學(xué)合成法成本廉價,但存在諸如原料毒性高、合成過程污染大、有毒副產(chǎn)物難于完全去除等弊端[6-7]。

    脂肪酶(Lipase,EC 3.1.1.3.)是一類特殊的酯鍵水解酶,脂肪酶不僅能催化甘油脂肪酸酯水解,還能催化酯類物質(zhì)的合成。近年非水介質(zhì)中脂肪酶催化合成生物柴油、酯類成為酶工程的重要研究熱點和綠色化學(xué)主要技術(shù)之一[6,8]。非水相體系酶催化反應(yīng)具有反應(yīng)條件溫和、增加有機底物的溶解性,改變反應(yīng)的平衡方向,提高反應(yīng)的立體選擇性,抑制水參與的副反應(yīng),易于消除底物和產(chǎn)物的抑制作用等。生物轉(zhuǎn)化制備的香料,其構(gòu)型、手性單一,有助于香氣品質(zhì)的提高,是近年來天然香料制備的重要發(fā)展方向[9-12]。本實驗以發(fā)酵3-甲硫基丙醇和冰醋酸為主要原料,以脂肪酶為催化劑,研究天然乙酸3-甲硫基丙醇酯的生物轉(zhuǎn)化過程,優(yōu)化其非水相條件,揭示其關(guān)鍵因素、反應(yīng)規(guī)律。

    1 材料與方法

    1.1 試劑與儀器

    乙酸3-甲硫基丙醇酯 國藥化學(xué)試劑公司;正己烷、叔丁醇、正庚烷、丙酮(均為分析純) 北京化學(xué)試劑公司;Novozym 435、Lipozyme TL 100L 、Greasex 200 MG、Lipopan 50 BG、NovoCor ADL、Lipozyme TL 1M、Lipex 100T 丹麥諾維信公司;3-甲硫基丙醇、乙酸(發(fā)酵法制得) 本課題組制。

    LC-20A型高效液相色譜儀 島津國際貿(mào)易有限公司;HQ45恒溫?fù)u床 中國科學(xué)院武漢科學(xué)儀器廠;DF-101S磁力攪拌器 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司。

    1.2 方法

    1.2.1 液相色譜條件

    ODS-SP色譜柱(4.6mm×150mm),二極管陣列檢測器,流動相:甲醇-水(60:40,V/V),柱溫為室溫,進(jìn)樣量20μL。

    1.2.2 3-甲硫基丙醇、乙酸3-甲硫基丙醇酯的液相色譜測定

    標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:配制系列乙酸3-甲硫基丙醇酯的甲醇溶液,液相色譜儀檢測,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3-甲硫基丙醇和乙酸3-甲硫基丙醇酯在此條件下其保留時間分別為4.1、16.35min。

    標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=3×106x+475726,R2=0.9972(y為峰面積/μV;x為乙酸3-甲硫基丙醇酯質(zhì)量濃度/(mg/mL))。

    樣品處理:取反應(yīng)后的樣品200μL,用甲醇稀釋至10mL,過0.45μm微孔濾膜后進(jìn)液相檢測。

    式中: m為反應(yīng)結(jié)束后生成乙酸3-甲硫基丙醇酯的質(zhì)量;M為理論生成乙酸3-甲硫基丙醇酯的質(zhì)量。

    1.2.3 脂肪酶篩選

    溶劑體系:在25mL具塞三角瓶中加入3-甲硫基丙醇1.06g(0.01mol)、乙酸0.6g(0.01mol)和反應(yīng)溶劑10mL(依次為正己烷、丙酮、正庚烷、叔丁醇),加入同等質(zhì)量的脂肪酶,于45℃、150r/min、密封反應(yīng)6h。所用脂肪酶為NovoCor ADL、Lipozyme TL 100L、Novozyme 435、Greasex 200 MG、Lipopan 50 BG、Lipozyme TL IM、Lipex 100T。液相色譜法測定乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率。

    無溶劑體系:在25mL具塞三角瓶中加入3-甲硫基丙醇1.06g(0.01mol)和乙酸0.6g(0.01mol),加入同等質(zhì)量的脂肪酶,于45℃、150r/min、密封反應(yīng)6h。所用脂肪酶為NovoCor ADL、Lipozyme TL 100L、Novozyme 435、Greasex 200 MG、Lipopan 50 BG、Lipozyme TL IM、Lipex 100T。液相色譜法測定乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率。

    1.2.4 溶劑篩選

    在分別裝有10mL正己烷、10mL丙酮、10mL正庚烷、10mL叔丁醇溶劑以及無溶劑的25mL具塞三角瓶中,加入3-甲硫基丙醇1.06g(0.01mol)、乙酸0.6g(0.01mol)和Novozym 435脂肪酶50mg。在45℃、搖床轉(zhuǎn)速150r/min條件下密封反應(yīng)6h。液相色譜法測定乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率。

    1.2.5 各因素條件對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    在無溶劑體系下、加有1.06g 3-甲硫基丙醇,0.6g乙酸的反應(yīng)容器中,分別考察乙酸加入次數(shù)、反應(yīng)溫度、Novozym 435加酶量、分子篩用量、反應(yīng)時間等因素對乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率的影響,反應(yīng)物用液相色譜法測定。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 脂肪酶的篩選

    以發(fā)酵3-甲硫基丙醇、乙酸為主要原料,選擇Novozym 435、Lipozyme TL等7種酶分別為催化劑,在無溶劑和有機溶劑體系的非水相條件下考察其乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率,其結(jié)果見圖1、2。

    圖1、2結(jié)果表明,在考察的7種脂肪酶、2種反應(yīng)體系中,固定化Novozym 435催化合成EMTP的產(chǎn)率最高為7%,Lipex 100T有較弱的催化能力,合成產(chǎn)率約為2%,其他脂肪酶的催化產(chǎn)率都很低;有機溶劑對脂肪酶的催化活性有重要影響,實驗4種有機溶劑體系中,正己烷體系EMTP產(chǎn)率為最高,丙酮體系其產(chǎn)率為最低;采用無溶劑反應(yīng)體系Novozym 435催化合成EMTP產(chǎn)率為7%,Lipex 100T在溶劑中未表現(xiàn)出催化活性。本實驗采用無溶劑體系中固定化Novozym 435催化合成EMTP。

    圖1 無溶劑體系中不同脂肪酶對EMTP產(chǎn)率的影響Fig.1 Effect of lipase type on the yield of EMTP in solvent-free system

    圖2 有機溶劑體系中不同脂肪酶對EMTP產(chǎn)率的影響Fig. 2 Effect of lipase type on the yield of EMTP in organic solvent system

    2.2 多種因素條件對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    2.2.1 乙酸加入次數(shù)對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    圖3 乙酸加入次數(shù)對EMTP產(chǎn)率的影響Fig.3 Effect of times of acetic acid addition on the yield of EMTP in solvent-free system

    圖3結(jié)果表明,乙酸1次性加入,產(chǎn)物EMTP的產(chǎn)率很低;而將同等質(zhì)量的乙酸分3~4次均勻加入時EMTP的產(chǎn)率較高,約為8.5%。說明乙酸添加次數(shù)對脂肪酶的催化活性和產(chǎn)物EMTP的產(chǎn)率有重要影響,其原因可能是乙酸影響了反應(yīng)體系pH值及其微環(huán)境,在低pH值環(huán)境下脂肪酶的三維結(jié)構(gòu)會發(fā)生改變,使酶的活性位點被“蓋”起來,導(dǎo)致酶活性降低[11]。

    2.2.2 反應(yīng)溫度對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    圖4 反應(yīng)溫度對EMTP產(chǎn)率的影響Fig.4 Effect of reaction temperature on the yield of EMTP in solvent-free system

    溫度對酶的催化活性及效率有重要影響,一般高溫有利于酶促反應(yīng)速度,但高溫會降低酶的穩(wěn)定性,進(jìn)而降低酶的使用次數(shù)。圖4表明,在反應(yīng)溫度30~50℃范圍內(nèi),反應(yīng)溫度45~50℃時產(chǎn)物EMTP較高,產(chǎn)率為11%左右。

    2.2.3 加酶量對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    圖5 固定化Novozym 435酶用量對EMTP產(chǎn)率影響Fig.5 Effect of Novozym 435 amount on the yield of EMTP in solvent-free system

    圖5顯示,在1.2.5節(jié)條件下無溶劑反應(yīng)體系中固定化Novozym 435加入50mg以上時,產(chǎn)物乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率達(dá)到較高,約為7%,繼續(xù)增加脂肪酶用量其產(chǎn)率提高并不明顯。

    2.2.4 吸水劑分子篩用量對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    已證實分子篩除具有吸水作用外不具有催化反應(yīng)的能力,結(jié)果見圖6。在無脂肪酶存在的情況下,是否添加分子篩對EMTP的產(chǎn)率沒有影響,同時添加脂肪酶與分子篩后,EMTP產(chǎn)率較單純添加脂肪酶的產(chǎn)率高。分子篩的添加量對反應(yīng)效果的影響見圖7,表明隨著分子篩用量的增加,產(chǎn)物EMTP產(chǎn)率逐漸增高,當(dāng)加入分子篩2g 時,其產(chǎn)物EMTP達(dá)到最高,產(chǎn)率約為28.8%。原因可能為,脂肪酶可同時催化酯類水解和酯類合成的可逆反應(yīng),3-甲硫基丙醇、乙酸為底物的酯類合成反應(yīng)是一產(chǎn)生水的可逆反應(yīng),酯化反應(yīng)和水解反應(yīng)是同時進(jìn)行,其方向決定于外界條件、環(huán)境,加入分子篩吸水劑,有利于酯化反應(yīng)的進(jìn)行,提高EMTP的轉(zhuǎn)化率,因此分子篩吸水劑的添加量對非水相條件脂肪酶催化活性及轉(zhuǎn)化率有重要影響。

    研究[13-15]表明,脂肪酶表面水分子是維持其活性的重要因素,非水介質(zhì)并非完全沒有水,一般是指水分含量在0.01%以下的體系。如果完全沒有水,將會導(dǎo)致酶構(gòu)象的劇烈變化甚至失活;酶的催化活性靠著與之緊靠的一層左右的水分子來維持,如果這層水分子能夠被限制在酶表面,其余水分足以用有機溶劑來替代,就不至于使酶催化能力降低或喪失。

    圖6 分子篩吸水作用的研究Fig.6 Water-absorbing capacity of molecular sieve

    圖7 分子篩用量對乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率的影響Fig.7 Effect of molecular sieve amount on the yield of EMTP in solvent-free system

    2.2.5 反應(yīng)時間對乙酸3-甲硫基丙醇酯合成反應(yīng)的影響

    單因素試驗顯示固定化Novozym 435酶用量50mg、分子篩2g、45℃、乙酸分3~4次均勻加入是較好的反應(yīng)條件,在此條件下研究無溶劑反應(yīng)體系中反應(yīng)時間對催化反應(yīng)效果的影響,其結(jié)果見圖8,當(dāng)反應(yīng)總時間為30h時產(chǎn)物EMTP產(chǎn)率較高約為37.6%。

    圖8 反應(yīng)時間對乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率的影響Fig.8 Effect of reaction time on the yield of EMTP in solvent-free system

    2.3 正交試驗設(shè)計優(yōu)化乙酸3-甲硫基丙醇酯的轉(zhuǎn)化條件

    根據(jù)單因素試驗結(jié)果,選取對非水相酶法轉(zhuǎn)化EMTP影響較大的4個因素:酶加入量、分子篩加入量、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間,采用L9(34)正交試驗設(shè)計優(yōu)化其轉(zhuǎn)化條件,其結(jié)果見表1。 極差分析無溶劑系統(tǒng)中4種因素對乙酸3-甲硫基丙醇酯轉(zhuǎn)化率影響主次順序為:B>D>A>C,即反應(yīng)時間>分子篩用量>反應(yīng)溫度>加酶量,最優(yōu)水平為:A3B2C2D2,即反應(yīng)溫度42℃、反應(yīng)時間30h、脂肪酶用量50mg、分子篩用量2g。

    表1 乙酸3-甲硫基丙醇酯轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化正交試驗設(shè)計與結(jié)果Table 1 Orthgonal array experimental results and analysis

    2.4 驗證實驗

    在2.3節(jié)最優(yōu)條件下,進(jìn)行3組平行驗證實驗,3組實驗結(jié)果無明顯差異,EMTP產(chǎn)率達(dá)到42.4%,表明正交試驗優(yōu)化的工藝條件可行。

    3 結(jié) 論

    在無溶劑體系中固定化脂肪酶Novozym435為最佳催化劑,酶用量、分子篩用量、乙酸加入次數(shù)、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時間為對EMTP合成反應(yīng)產(chǎn)率和酶活力有重要影響的因素。無溶劑條件下正交試驗設(shè)計優(yōu)化后的條件為3-甲硫基丙醇1.06g(0.01mol)、乙酸0.6g(0.01mol)。體系加酶量50mg、分子篩加入量2g、反應(yīng)溫度42℃,乙酸分3次加入,間隔時間為2h,搖床轉(zhuǎn)速150r/min,反應(yīng)總時間30h,在此條件下其乙酸3-甲硫基丙醇酯產(chǎn)率達(dá)到42.4%。

    [1] 孫寶國. 食品添加劑[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2008: 59-85.

    [2] 孫寶國, 何堅. 香料化學(xué)與工藝學(xué)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2004:1-125.

    [3] 孫寶國. 食用調(diào)香術(shù)[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2003: 50-99.

    [4] 劉玉平, 孫寶國, 鄭福平. 食用香料乙酸3-甲硫基丙醇酯的合成研究[J]. 食品添加劑, 2005, 26(2): 15-160.

    [5] LIU Yuping, CHEN Haitao, YIN Decai, et al. Synthesis and odor evaluation of five new sulfur- containing ester flavor compounds from 4-ethyloctanoic acid[J]. Molecules, 2010, 15(8): 5104-5111.

    [6] BOMMARUS A S, POLIZZI K M. Novel biocatalysts: recent developments[J]. Chemical Engineering Science, 2006, 61(3): 1004-1016.

    [7] MOSCIANO G, FASANO M. Organoleptic characteristics of flavor materials[J], Perfumer & Flavorist, 1995, 20(1): 31-33.

    [8] GOLDBERG K, SCHROER K, LTZ S, et al. Biocatalytic ketonereduction: a powerful tool for the production of chiral alcohols:part Ⅰ: processes with isolated enzymes[J]. Applied Microbiology &Biotechnology, 2007, 76(2): 237-248.

    [9] WOODLEY J M. New opportunities for biocatalysis:makingpharmaceutical processes greener[J]. Trends in Biotechnology,2008, 26(6): 321-327.

    [10] PHILIPPE P, OLIVER D. Methionine catabolism in Saccharomyces cerevisiae[J]. FEMS Yeast Research, 2006, 6(1): 48-56.

    [11] YADAV G D, TRIVEDI A H. Kinetic modeling of immobilized-lipase catalyzed transesterificatin of n-octanol with vinyl acetate in nonaqueous media[J]. Enzyme and Microbiology Technology. 2003, 32(7): 783-789.[12] ETSCHMANN M M W, KTTER P, HAUF J. Production of the aroma chemicals 3-(methylthio)-1-propanol and 3-(methylthio)-propylacetate with yeasts[J]. Applied Microbiology & Biotechnology,2008, 80(4): 579-587.

    [13] 張東浩. 脂肪酶催化吡哆醇區(qū)域選擇性酯化及其酶學(xué)特性研究[D].天津: 天津大學(xué), 2007.

    [14] 張娜, 劉均洪. 酶在接近無水有機介質(zhì)中的生物催化特性[J]. 工業(yè)催化, 2005, 13(7): 48-51.

    [15] CARLQVIST P, SVEDENDAHL M, BRANNEBY C, et al. Exploring the active-site of a rationallyredesigned lipase for catalysis of michaeltype additions[J]. Chembio Chem, 2005, 6(2): 331-336.

    Lipase-Catalyzed Conversion in Non-aqueous Media for the Preparation of Ethyl-3-methyl-thiopropionate

    ZHANG Jia-chan,WANG Cheng-tao*,ZHAO Lei,YIN Li-li,SUN Bao-guo
    (Beijing Higher Institution Engineering Research Center of Food Additives and Ingredients, Beijing Key Laboratory of Flavor Chemistry,Beijing Technology and Business University, Beijing 100048, China)

    Ethyl-3-methyl-thiopropionate (EMTP) is an important kind of spice. The key factors and conditions for biocatalytic synthesis of EMTP in non-aqueous system were studied in the paper. The results indicated that the best catalyst in solvent-free medium or normal hexane was Novozym 435. Catalyst dosage, the amount of molecular sieve addition, the number of acetic acid addition, reaction temperature and reaction time were important factors for EMTP synthesis. The optimal preparation conditions, as determined using orthogonal array design method, were 50 mg of Novozym 435, 2 g of molecular sieve, 42 ℃ of reaction temperature, 30 h of reaction time, three times of acetic acid addition with an interval of 2 h, and 150 r/min of shaking speed. The yield of EMTP reached up to 42.4% in solvent-free medium under the optimal conditions.

    3-(methylthio)-propane;ethyl-3-methyl-thiopropionate;Novozym 435;conversion in non-aqueous media;solvent-free system

    TS202.3

    A

    1002-6630(2012)08-0001-05

    2011-07-28

    國家自然科學(xué)基金面上項目(31071593);北京市教委科技面上項目(KM201110011001);北京市屬高等學(xué)校人才強教計劃項目(PHR201008237)

    張佳嬋(1987—),女,碩士研究生,研究方向為食品生物技術(shù)。E-mail:xiaochan8787@163.com

    *通信作者:王成濤(1969—),男,教授,博士,研究方向為食品生物技術(shù)。E-mail:wct5566@163.com

    猜你喜歡
    丙醇無溶劑硫基
    手性磷酰胺類化合物不對稱催化合成α-芳基丙醇類化合物
    分子催化(2022年1期)2022-11-02 07:10:30
    微生物合成3-甲硫基丙醇的研究現(xiàn)狀
    中國釀造(2022年1期)2022-02-07 13:09:30
    食品中3-氯丙醇酯的研究現(xiàn)狀
    棕櫚油還能吃嗎
    食品與生活(2017年5期)2017-05-27 20:28:38
    低溫轉(zhuǎn)化噴漿造粒硫基復(fù)合肥(15-15-15)裝置工藝設(shè)計
    SO42-/TiO2-SnO2固體超強酸無溶劑催化合成季戊四醇硬脂酸酯
    新型離子液體的合成及其在Heck反應(yīng)合成烯丙醇類化合物中的應(yīng)用
    淡水艙無溶劑環(huán)氧施工工藝研究
    2015中國國際合成革展覽會刮起“無溶劑合成革”風(fēng)暴
    西部皮革(2015年15期)2015-02-28 18:14:36
    鋱-2-甲硫基煙酸摻雜配合物的合成及熒光性質(zhì)研究
    男女午夜视频在线观看| 亚洲黑人精品在线| 亚洲人成伊人成综合网2020| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 午夜福利成人在线免费观看| 激情在线观看视频在线高清| 亚洲真实伦在线观看| 变态另类丝袜制服| a级毛片在线看网站| 久久草成人影院| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 精品国产乱码久久久久久男人| 久久香蕉激情| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲成人久久性| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲五月天丁香| 色av中文字幕| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜福利欧美成人| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美一级毛片孕妇| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 美女免费视频网站| 18禁美女被吸乳视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 精品一区二区三区四区五区乱码| 成人精品一区二区免费| av天堂在线播放| av有码第一页| 免费在线观看亚洲国产| 日本熟妇午夜| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 熟女电影av网| 天堂动漫精品| 无人区码免费观看不卡| 一本大道久久a久久精品| 欧美日本亚洲视频在线播放| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 色综合婷婷激情| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 很黄的视频免费| 久久久久久久久中文| 亚洲国产中文字幕在线视频| 麻豆成人av在线观看| 亚洲片人在线观看| 久久性视频一级片| 黄色a级毛片大全视频| 欧美成人午夜精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产精品一区二区精品视频观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产日本99.免费观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 日韩成人在线观看一区二区三区| 亚洲国产精品成人综合色| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 神马国产精品三级电影在线观看 | 91国产中文字幕| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品九九99| 日韩有码中文字幕| 国产熟女xx| 亚洲自拍偷在线| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| h日本视频在线播放| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产精品久久视频播放| 亚洲在线自拍视频| 国产男靠女视频免费网站| 欧美性感艳星| 亚洲第一电影网av| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲18禁久久av| 1024手机看黄色片| 欧美日本视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 99九九线精品视频在线观看视频| 免费看日本二区| 国产成人freesex在线 | 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 成人三级黄色视频| 亚洲精品国产av成人精品 | 99九九线精品视频在线观看视频| 精品久久久久久成人av| 永久网站在线| 哪里可以看免费的av片| 欧美丝袜亚洲另类| 白带黄色成豆腐渣| 色吧在线观看| 久久人人爽人人片av| 久久久久免费精品人妻一区二区| 精品一区二区免费观看| 国产美女午夜福利| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲熟妇熟女久久| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日本视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说 | 亚洲精品一区av在线观看| 深爱激情五月婷婷| 欧美国产日韩亚洲一区| 熟女电影av网| 18禁在线播放成人免费| 直男gayav资源| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美精品国产亚洲| 夜夜夜夜夜久久久久| 搡老熟女国产l中国老女人| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久国产乱子免费精品| 久久国内精品自在自线图片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 一个人观看的视频www高清免费观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产成人精品久久久久久| 欧美一区二区国产精品久久精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 三级经典国产精品| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美区成人在线视频| 精品久久久久久久久av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 精品福利观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产精品伦人一区二区| av福利片在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 久久草成人影院| 国产高清不卡午夜福利| 中国国产av一级| 男人狂女人下面高潮的视频| 全区人妻精品视频| 国产一区二区在线av高清观看| 三级毛片av免费| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 99riav亚洲国产免费| 欧美一级a爱片免费观看看| 嫩草影视91久久| 日韩欧美免费精品| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩三级伦理在线观看| 美女高潮的动态| 看十八女毛片水多多多| 国产av不卡久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99久久九九国产精品国产免费| 日韩欧美三级三区| 久久人人爽人人片av| av在线亚洲专区| 成人国产麻豆网| 99在线视频只有这里精品首页| 伦精品一区二区三区| 精品一区二区免费观看| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲经典国产精华液单| or卡值多少钱| 国产高清三级在线| 亚洲自拍偷在线| 最后的刺客免费高清国语| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 搡老岳熟女国产| 97热精品久久久久久| 日韩一区二区视频免费看| 美女免费视频网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 久久久久国产网址| 丰满乱子伦码专区| 久久久a久久爽久久v久久| 一本久久中文字幕| 97超碰精品成人国产| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产亚洲精品久久久com| 尾随美女入室| 国产男人的电影天堂91| 中文字幕免费在线视频6| 国产午夜福利久久久久久| 免费大片18禁| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 在现免费观看毛片| 特级一级黄色大片| 国产一区二区激情短视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产极品精品免费视频能看的| 中国国产av一级| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲精品在线观看二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| av免费在线看不卡| 人妻久久中文字幕网| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲七黄色美女视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲美女黄片视频| 午夜精品在线福利| 婷婷精品国产亚洲av| 九色成人免费人妻av| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲第一区二区三区不卡| 深爱激情五月婷婷| 看片在线看免费视频| avwww免费| 国产人妻一区二区三区在| 日本熟妇午夜| 最近视频中文字幕2019在线8| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 91久久精品电影网| 毛片一级片免费看久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 高清日韩中文字幕在线| 国产中年淑女户外野战色| 国产视频一区二区在线看| 免费看美女性在线毛片视频| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲av.av天堂| 国产日本99.免费观看| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲精品国产成人久久av| 级片在线观看| av国产免费在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 在线a可以看的网站| 超碰av人人做人人爽久久| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 村上凉子中文字幕在线| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美区成人在线视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 天堂网av新在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩强制内射视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 精品无人区乱码1区二区| 日本黄色视频三级网站网址| videossex国产| 91狼人影院| 亚洲18禁久久av| 国产91av在线免费观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 99久国产av精品| 亚洲成人久久性| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 黄色配什么色好看| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产精品不卡视频一区二区| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久精品国产自在天天线| 热99re8久久精品国产| 九九在线视频观看精品| 久久午夜福利片| 国产伦在线观看视频一区| 长腿黑丝高跟| 国产成人a区在线观看| 最新中文字幕久久久久| 国产视频内射| 波多野结衣高清无吗| 亚洲av免费高清在线观看| 国语自产精品视频在线第100页| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲在线观看片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 高清毛片免费看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 熟女人妻精品中文字幕| 国产免费一级a男人的天堂| 在线观看午夜福利视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 免费观看精品视频网站| 波多野结衣高清作品| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲成人中文字幕在线播放| 一级av片app| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲最大成人手机在线| 99视频精品全部免费 在线| 91久久精品国产一区二区成人| 看十八女毛片水多多多| 99久久无色码亚洲精品果冻| 免费无遮挡裸体视频| 午夜亚洲福利在线播放| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲精品国产成人久久av| 青春草视频在线免费观看| 久久久久久久久大av| 国产精品久久电影中文字幕| 少妇丰满av| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久国产乱子免费精品| 中出人妻视频一区二区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一级av片app| av中文乱码字幕在线| av女优亚洲男人天堂| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 男女边吃奶边做爰视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 色综合亚洲欧美另类图片| 91精品国产九色| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 美女 人体艺术 gogo| 欧美三级亚洲精品| 久久九九热精品免费| 插逼视频在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产亚洲91精品色在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 丰满人妻一区二区三区视频av| 日本三级黄在线观看| 国产 一区精品| aaaaa片日本免费| 国产三级中文精品| 国产中年淑女户外野战色| 久久热精品热| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 日韩亚洲欧美综合| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日韩亚洲欧美综合| 一区二区三区高清视频在线| 国产成人aa在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 麻豆成人午夜福利视频| 国产乱人视频| 国产日本99.免费观看| 波多野结衣高清无吗| 51国产日韩欧美| 中文字幕av成人在线电影| 能在线免费观看的黄片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产视频内射| 美女大奶头视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久人人精品亚洲av| 夜夜夜夜夜久久久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美中文日本在线观看视频| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲不卡免费看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 成年av动漫网址| 男人舔女人下体高潮全视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 热99在线观看视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 成人国产麻豆网| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 高清日韩中文字幕在线| 国内精品久久久久精免费| 天堂动漫精品| 日韩一区二区视频免费看| 国产一区二区激情短视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久精品影院6| 99热精品在线国产| or卡值多少钱| 伊人久久精品亚洲午夜| 色播亚洲综合网| 少妇高潮的动态图| 日韩高清综合在线| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲四区av| 三级国产精品欧美在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品夜色国产| 深夜a级毛片| 久久久国产成人精品二区| 午夜福利18| 桃色一区二区三区在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 成人综合一区亚洲| 精品久久久久久久久av| 十八禁国产超污无遮挡网站| 久久这里只有精品中国| 观看免费一级毛片| 国产一区二区激情短视频| 中文字幕av在线有码专区| 日韩强制内射视频| 天天一区二区日本电影三级| 久久午夜福利片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 综合色av麻豆| 国产精品亚洲美女久久久| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲专区国产一区二区| 日本一二三区视频观看| 在线观看av片永久免费下载| 欧美丝袜亚洲另类| 日韩精品有码人妻一区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产一区二区激情短视频| 国产精品人妻久久久久久| 中国国产av一级| 日本熟妇午夜| 一级毛片我不卡| 亚洲一区二区三区色噜噜| 一进一出抽搐动态| 亚洲美女黄片视频| 国产久久久一区二区三区| 在线免费观看的www视频| 联通29元200g的流量卡| 乱人视频在线观看| 看十八女毛片水多多多| 老司机影院成人| 久久精品人妻少妇| 又爽又黄无遮挡网站| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲精品国产成人久久av| 国产免费男女视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久精品夜色国产| 日韩中字成人| 精品久久久久久成人av| 五月玫瑰六月丁香| 欧美日本视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲中文字幕日韩| 最近2019中文字幕mv第一页| av天堂在线播放| 免费看av在线观看网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产亚洲91精品色在线| 精品无人区乱码1区二区| 一区二区三区高清视频在线| 一区二区三区四区激情视频 | 免费一级毛片在线播放高清视频| 少妇的逼好多水| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 真实男女啪啪啪动态图| 美女黄网站色视频| 日韩欧美国产在线观看| 久久这里只有精品中国| av黄色大香蕉| 精品一区二区免费观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产视频内射| 午夜福利在线在线| 久久精品国产亚洲网站| 午夜影院日韩av| 久久久久性生活片| 亚洲成人久久性| 午夜爱爱视频在线播放| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品夜色国产| 欧美最新免费一区二区三区| 国产精品三级大全| 国产综合懂色| 日日撸夜夜添| 亚洲图色成人| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 男女边吃奶边做爰视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产男人的电影天堂91| 青春草视频在线免费观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产精品永久免费网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日韩制服骚丝袜av| 国产色爽女视频免费观看| 欧美精品国产亚洲| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 色视频www国产| 人人妻人人澡欧美一区二区| 麻豆精品久久久久久蜜桃| av天堂在线播放| 夜夜夜夜夜久久久久| 此物有八面人人有两片| 成人性生交大片免费视频hd| 精品一区二区三区人妻视频| 春色校园在线视频观看| 欧美三级亚洲精品| 久久久色成人| 身体一侧抽搐| 麻豆国产av国片精品| ponron亚洲| 国产麻豆成人av免费视频| 嫩草影视91久久| 成年av动漫网址| 国产亚洲91精品色在线| 国产探花极品一区二区| 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美高清性xxxxhd video| 亚洲av免费在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲精品影视一区二区三区av| 午夜福利高清视频| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲熟妇熟女久久| 伦理电影大哥的女人| 欧美色视频一区免费| 国产 一区精品| 淫妇啪啪啪对白视频| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美区成人在线视频| a级毛色黄片| 久久中文看片网| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产高清视频在线播放一区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 哪里可以看免费的av片| 99久久九九国产精品国产免费| 简卡轻食公司| 草草在线视频免费看| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品久久久久久久末码| av天堂在线播放| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 超碰av人人做人人爽久久| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 99久久精品一区二区三区| 免费人成视频x8x8入口观看| 嫩草影视91久久| 级片在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 我要搜黄色片| 我的老师免费观看完整版| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲国产欧美人成| 一级黄色大片毛片| 精品无人区乱码1区二区| 91麻豆精品激情在线观看国产| av在线亚洲专区| 99久国产av精品国产电影| 一级a爱片免费观看的视频| 联通29元200g的流量卡| 国产精品久久久久久av不卡| 日日啪夜夜撸| 久久久久久久亚洲中文字幕| av视频在线观看入口| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av电影不卡..在线观看| 有码 亚洲区| 亚洲专区国产一区二区| 国产亚洲欧美98| 在线免费观看的www视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品人妻熟女av久视频| www日本黄色视频网| 精品国内亚洲2022精品成人| 一个人观看的视频www高清免费观看| 此物有八面人人有两片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 九色成人免费人妻av| 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲人与动物交配视频| 香蕉av资源在线| 国产探花极品一区二区| 国产美女午夜福利| 久久中文看片网| 国内精品一区二区在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 淫秽高清视频在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 国产麻豆成人av免费视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 免费看光身美女| 最近的中文字幕免费完整| 国产私拍福利视频在线观看| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 免费观看的影片在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 免费av观看视频| 午夜福利视频1000在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久久久九九精品影院| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 午夜视频国产福利| 日韩高清综合在线| ponron亚洲| 亚洲不卡免费看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品久久久久久久久亚洲| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品福利在线免费观看| 欧美最黄视频在线播放免费|