外源Na2 SeO3對紅陽獼猴桃果實品質(zhì)、不同組織硒含量及形態(tài)的影響

劉仁道，黃仁華，*，吳世權(quán)，何仕松

（1.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川綿陽621010; 2.四川蒼溪獼猴桃研究所，四川蒼溪 628400）

外源Na2SeO3對紅陽獼猴桃果實品質(zhì)、不同組織硒含量及形態(tài)的影響

劉仁道1，黃仁華1，*，吳世權(quán)2，何仕松2

（1.西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川綿陽621010; 2.四川蒼溪獼猴桃研究所，四川蒼溪 628400）

通過紅陽獼猴桃不同果實發(fā)育時期噴施不同濃度Na2SeO3溶液，研究了外源硒對其品質(zhì)、不同組織硒含量及硒形態(tài)的影響。結(jié)果表明，外源硒對果實單果重、可滴定酸含量沒有明顯的影響，但顯著地提高了果實可溶性固形物含量;同時，外源硒顯著地提高了果肉、果皮、種子以及葉片總硒和有機硒含量，且高濃度硒處理效果要好于低濃度硒處理，除果皮外噴施時間以5月30日效果最佳。

紅陽獼猴桃，亞硒酸鈉，果實，品質(zhì)，硒形態(tài)

硒是人和動物必須的微量元素，是多種酶的活性成份，可防治人類多種疾?。?］。植物可以從土壤中吸收硒，并通過食物鏈進入人和動物體內(nèi)，影響人和動物機體的代謝和健康［2－4］。研究表明，我國是一個缺硒嚴重的國家，土壤缺硒嚴重影響到可食用植物的硒含量，人群硒日攝入量不足40μg，低于補硒標準［5］。因此，生產(chǎn)中常通過土壤補硒、葉面噴硒、莖部注硒以及種子浸硒等方式來提高作物的硒含量，以實現(xiàn)通過飲食方式達到安全補硒的目的［6－9］。目前，有關(guān)小麥、大豆、蔬菜等對硒的吸收、分布和轉(zhuǎn)化特征已有報道［6，9］。果樹對硒的吸收和分布也有相關(guān)研究，朱麗琴等［10］在葡萄上研究發(fā)現(xiàn)，硒最早累積在根中，之后依次傳入葉、新梢、主蔓和果實;呼世斌等［11］研究表明，施硒能顯著提高蘋果果實含硒量，且花期噴施效果較好。目前，通過葉面噴施和吸收外源硒是提高植物富集硒的有效途徑，但其研究大多限于植物總硒量分析及評估，而對于低硒地區(qū)如何提高硒利用率以及富硒效應(yīng)和硒含量指標及形態(tài)尚缺乏系統(tǒng)深入的研究。對于獼猴桃的富硒研究，目前鮮見報道［12－13］。本研究擬通過對獼猴桃不同生育期葉面噴施亞硒酸鈉，研究提高紅陽獼猴桃各器官硒含量和硒形態(tài)及其轉(zhuǎn)化的途徑，探討獼猴桃對硒的吸收、分布特性以及施硒的最佳使用時期，以期為富硒獼猴桃的生產(chǎn)提供理論依據(jù)，為科學(xué)補硒提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 實驗設(shè)計

實驗于2010年在四川蒼溪縣元壩鎮(zhèn)安全村獼猴桃園進行，以2003年定植的‘紅陽’獼猴桃嫁接植株為實驗材料，株行距1.5m×2.0m，栽培方式為水平棚架，土壤為紫色土，pH6.6，選生長健壯、生長勢和結(jié)果量基本一致的植株，單株小區(qū)，3次重復(fù)。選擇果實發(fā)育的前期、中期和后期對獼猴桃植株進行Na2SeO3處理，處理時間分別為5月30日、6月20日和7月10日，處理方法是對整個植株的葉片和果實進行統(tǒng)一噴施，每次均采用3個不同濃度進行，其濃度分別為80、120、160mg/L。以噴施自來水為對照。

表1 外源硒對紅陽獼猴桃果實品質(zhì)的影響Table 1 The effect of exogenous Se on‘hongyang’kiwifruits qualities

1.2 樣品采集及分析測定

1.2.1 樣品采集 獼猴桃果實和葉片于果實成熟期（9月23日）采摘，每個處理分別采摘30～40個果實，取赤道部位果肉和果皮分別均勻混合，并收集種子。同時，對每個處理采摘20片葉子進行圓片取樣。所有樣品均用液氮速凍后帶回實驗室，并貯存于－80℃冰箱中備用。

1.2.2 常規(guī)指標分析 果實單果鮮重采用稱重法（重復(fù)5次），果肉可溶性固形物含量、VC含量以及可滴定酸含量分別采用李合生編著《植物生理生化實驗原理和技術(shù)》中的手持測糖儀法（重復(fù)5次）、2，6－二氯靛酚滴定法（重復(fù)3次）和氫氧化鈉中和滴定法（重復(fù)3次）［14］。

1.2.3 樣品的消化 稱取植株樣品5.000g，置于消煮管中，加入混合酸（HNO3∶HClO4=4∶1）10m L，浸泡過夜。次日，將消煮管置于消化爐上，逐漸升溫，60℃消化2h，100℃消化1h后，加混合酸5m L升溫到170℃消化2h，至溶液顏色變?yōu)闊o色并冒白煙后冷卻，加入1∶1 HCl 5m L，100℃繼續(xù)加熱至無色并冒白煙，冷卻，定容至25m L用于測定。

1.2.4 樣品總硒含量測定 樣品總硒含量采用熒光光度法進行測定［15］，其所有操作步驟均在暗室中進行。具體步驟如下:取經(jīng)消化的樣品10m L于50m L試管中，依次加入0.2mol/m L的EDTA和0.1mol/m L鹽酸羥胺各2m L，混合均勻后放置5～10m in，隨后加入1mg/m L DAN鹽酸溶液5m L，混勻后置沸水浴中煮5m in，取出冷卻后加環(huán)己烷6m L，振蕩數(shù)分鐘后，移入分液漏斗，分層后將環(huán)己烷收集于離心管中離心2min，取出環(huán)己烷于熒光光度計激發(fā)峰366nm、發(fā)射峰520nm處測定苤硒腦熒光強度;硒標準曲線的制作步驟與樣品測定相同。總硒標準曲線如圖1。

1.2.5 樣品硒有機化程度分析 采用持續(xù)透析法［7，16］，將 5.000g 樣 品 凍 干 后 裝 入 透 析 袋（0.8～1.2ku）中，4℃超純水中透析4d，每隔12h換一次水，測定透析后樣品中的硒含量為有機硒含量。

圖1 標準曲線Fig.1 Standard curve

1.3 數(shù)據(jù)分析

以上測定均重復(fù)3次，實驗數(shù)據(jù)采用SAS軟件（8.1版本）ANOVA過程做差異顯著性檢驗，并用LSD法作多重比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 外源硒對紅陽獼猴桃果實品質(zhì)的影響

噴施外源Na2SeO3對紅陽獼猴桃果實單果重、可滴定酸含量沒有明顯的影響，但顯著地提高了果實中可溶性固形物含量（除5月30日80mg/L Na2SeO3處理外），7月10日噴施160mg/L Na2SeO3效果最好，可溶性固形物含量達到19.17%（表1）。另外，噴施160mg/L Na2SeO3能顯著增加果實VC含量。

2.2 外源硒對紅陽獼猴桃果肉硒含量及組分的影響

噴施不同濃度的Na2SeO3均能顯著提高果肉總硒和有機硒的含量，且果肉總硒和有機硒含量隨Na2SeO3噴施濃度的增加而增加（表2）;另外，不同時期處理效果差異較大，6月20日處理對果肉總硒和有機硒含量的影響最小，但能較大幅度的提高有機硒的相對含量，而 7月 10日噴施 160mg/L Na2SeO3果肉總硒含量增加最大。果肉中的硒主要以有機硒形式存在，結(jié)果表明有機硒含量為總硒量的67.01～86.99%。

2.3 外源硒對紅陽獼猴桃果皮硒含量及組分的影響

果皮中的硒，主要以有機硒形態(tài)存在，有機硒相對含量達到80.56%～85.91%（表3）。6月20日和7月10日噴施處理均顯著地提高了果皮總硒和有機硒含量，7月10日噴施160mg/L Na2SeO3增加值分別為18.46μg/kg和14.88μg/kg，但有機硒相對含量較低。5月30日噴施160mg/L Na2SeO3的有機硒相對含量最大，為85.91%。

表2 外源硒對紅陽獼猴桃果肉總硒及有機硒含量的影響Table 2 The effect of exogenous Se on the content of total Se and organic Se in‘hongyang’kiwifruits pulp

表3 外源硒對紅陽獼猴桃果皮總硒及有機硒含量的影響Table 3 The effect of exogenous Se on the content of total Se and organic Se in‘hongyang’kiwifruits peel

表4 外源硒對紅陽獼猴桃種子總硒及有機硒含量的影響Table 4 The effect of exogenous Se on the content of total Se and organic Se in‘hongyang’kiwifruits seed

2.4 外源硒對紅陽獼猴桃種子總硒和有機硒含量的影響

5月30日噴施處理對種子硒含量的影響最大，其次為6月20日和7月10日（表4）。另外，種子總硒和有機硒含量隨Na2SeO3噴施濃度的增加而增加。5月30日噴施160mg/L Na2SeO3種子總硒、有機硒及有機硒相對含量均最大，分別為66.70、54.26μg/kg和81.35%。

2.5 外源硒對紅陽獼猴桃葉片硒含量及組分的影響

與種子相似，早期處理對葉片硒含量的影響大于后期，但在同一時間內(nèi)處理效果并沒有隨處理濃度的增加而增加，其最佳效果出現(xiàn)在 120mg/L Na2SeO3處理上（表5）。另外，6月20日160mg/L Na2SeO3處理有機硒相對含量最大，為84.77%;而7月10日160mg/L Na2SeO3處理有機硒相對含量最小，為74.98%。

表5 外源硒對紅陽獼猴桃葉片總硒及有機硒含量的影響Table 5 The effect of exogenous Se on the content of total Se and organic Se in‘hongyang’kiwifruits leaf

3 結(jié)論與討論

植物富硒的方法很多，主要有土壤施硒、硒拌種、葉面噴施、硒培養(yǎng)液培養(yǎng)以及莖部注射硒等［17］。其中，葉面噴施硒溶液的方法具有操作簡單、效果好的特點，被人們廣泛接受和使用［18］。本實驗在紅陽獼猴桃果實不同發(fā)育階段采用葉面噴施Na2SeO3的方法均取得了很好的效果，葉面噴施硒溶液可以顯著提高果肉、果皮、種子以及葉片等器官組織中總硒和有機硒含量。本研究結(jié)果表明，獼猴桃通過葉片吸收硒后，經(jīng)過植物體內(nèi)運轉(zhuǎn)主要分布在葉片和種子中（在所測試的組織器官中），對總硒含量影響最為顯著的是5月30日120mg/L Na2SeO3處理，葉片和種子總硒含量分別達72.37、67.78μg/kg，相當于對照的6.75和5.89倍。

硒在植物體內(nèi)能以多種化合物的形式存在，按照硒的化學(xué)形態(tài)可分為無機態(tài)和有機態(tài)，大量研究表明植物中的硒主要以有機態(tài)存在，有利于動物吸收利用［19］。本實驗采用葉面噴施和吸收無機硒，在體內(nèi)進行生物轉(zhuǎn)化有機硒的方法增加了獼猴桃果實營養(yǎng)價值。其中，果皮中有機硒相對含量較高，所有供試樣品均超過80%，其原因可能是果皮直接接觸了Na2SeO3，優(yōu)先于其它組織器官進行生物轉(zhuǎn)化。種子有機硒的絕對含量最大，其原因可能是種子是貯藏蛋白質(zhì)的主要場所，而蛋白硒是植物組織中有機硒的主要形式，故種子中有機硒絕對含量較大，但本實驗并未涉及有機硒具體成分的研究，有待進一步的深入研究。

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Effect of exogenous sodium selenite on fruit quality，selenium contents and selenium form s in different tissues of‘hongyang’kiw i

LIU Ren－dao1，HUANG Ren－h(huán)ua1，*，WU Shi－quan2，HE Shi－song2
（1.College of Life Science and Engineering，Southwest University of Science and Technology，Mianyang 621010，China; 2.The Kiwifruit Institute of Cangxi Country，Cangxi628400，China）

Effec t of sp raying d ifferent concentrations of Na2SeO3solution during the fruit developm ent stages of‘hongyang’kiw ion fruitquality，selenium contents and selenium form s in d ifferent tissues were stud ied.The results showed that sing le fruit weight and titration acid content in fruits were not obviously affected by selenium，while solub le solids content in fruit was increased significantly.At the same time，both contents of total selenium and organic selenium in pulp，peel，seed and leafwere efficiently increased by the exogenous selenite.Furthermore，the treated effec ts w ith higher selenium concentrations were better than those w ith lower selenium concentrations in the study.Moreover，in add ition to peel，the best spaying date was found on May 30th.

‘hongyang’kiw i;Na2SeO3;fruit;quality;selenium form s

TS255.3

A

1002－0306（2012）15－0353－04

2011－12－05 *通訊聯(lián)系人

劉仁道（1964－），男，教授，研究方向:植物有效成分的開發(fā)與利用。