酸漿綠茶體外抗氧化活性研究

劉敏，任石濤，王曉聞

（山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，山西 太谷030801）

酸漿［Physalis al kekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino］，別名紅姑娘、泡泡草等，茄科，酸漿屬，為多年生宿根草本植物［1］。酸漿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，明朝李時珍《本草綱目》中也有記載［2］。酸漿全草含有許多功能性化學(xué)成分，包括甾體類，生物堿類，脂類，礦物質(zhì)，色素類，氨基酸類，糖類及其他成分等［3］。酸漿葉中含有大量的黃酮類物質(zhì)，所以它具有消炎，抗腫瘤，抗糖尿病，抗菌及抗病毒等方面的功能［4］。

酸漿在中國各地均有野生分布，適應(yīng)性強。目前有關(guān)酸漿的研究也不夠深入，尤其是對酸漿葉子的報道較少，而且以其為原料的食品及藥品市場上還不多見。酸漿有待于進一步的開發(fā)利用，是一種非常有發(fā)展前景的經(jīng)濟作物。本實驗將酸漿葉子做成綠茶是發(fā)揮酸漿葉功效的最簡單、最方便、最快捷與最有效的方法，可以被人體更好的利用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料

本試驗采用大同市陽高縣長城鎮(zhèn)提供的8月份酸漿植物的葉子，采用傳統(tǒng)工藝。

1.1.2 主要試劑

試驗中所用試劑均為分析純。

無水甲醇、氯化鐵、氯化鉀、二苯代苦味酰肼自由基（DPPH·）：美國Sig ma公司。

丁基羥基甲苯（BHT）、水楊酸、鄰苯三酚、硫酸亞鐵（FeSO4·7 H2O）、硫代巴比妥酸、鐵氰化鉀（K3Fe（CN）6）、Tris：北京瑞爾欣德科技有限公司；三氯甲烷、三氯乙酸、冰乙酸、30%雙氧水（H2O2）、淀粉。

1.1.3 儀器與設(shè)備

BS224S電子天平、臺式低速離心機（L－550）（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）、756型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）、JDG－0.2真空凍干試驗機、電熱恒溫水浴鍋（北京化玻聯(lián)醫(yī)療器械有限公司）、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）

1.2 方法

1.2.1 酸漿綠茶還原能力的測定

參照魏金濤等人的方法進行測定［6］。

1.2.2 酸漿綠茶對DPPH·自由基清除能力的測定

DPPH·自由基清除能力的方法參考Yamaguchi等［7］報道的方法與于繼賓［8］的方法進行測定。

1.2.3 酸漿綠茶對·OH自由基清除能力的測定

·OH自由基清除能力的方法主要參照陳偉等［9］報道的方法測定。

1.2.4 酸漿綠茶對O2－·自由基清除能力的測定

酸漿綠茶對O2－·自由基清除能力的測定方法參照徐懷德［10］報道的方法。

1.2.5 酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物清除能力的測定

用甲醇將酸漿綠茶粉溶解，配成2 g·L－1溶液，并作一系列的稀釋。將0.5 mL雞蛋黃勻漿液與10%、0.2 mol·L－1的PBS溶液（p H＝7.4）混合后加入不同濃度的樣液0.5 mL混合，再加入0.07 mol·L－1的FeSO4溶液0.05 mL，搖勻，放在37℃下保溫30 min后加入20%的三氯乙酸1.5 mL和等體積0.8%的硫代巴比妥酸，反應(yīng)終止，最終的混合物在100℃的溫度下加熱5 min后在3000 r·min－1的轉(zhuǎn)速下離心10 min，取其上清液，于532 n m處檢測上清夜的吸光度。以不加硫代巴比妥酸的溶液為空白溶液。以BHT作為標(biāo)準(zhǔn)對照，按下式計算各待測樣品對脂質(zhì)過氧化物的清除能力。重復(fù)3次取平均值。

式中：A——樣液與反應(yīng)溶液混合液的吸光值；

A1——樣液與空白溶液混合液的吸光值；

A0——不加樣液的吸光值。

2 結(jié)果與分析

2.1 酸漿綠茶總還原能力的測定

由圖1可看出，酸漿綠茶樣品在低濃度下，A700值較小，隨著濃度的增加，A700值也隨之增大。說明酸漿綠茶在一定濃度下具有還原能力。

圖1 酸漿綠茶的還原能力Fig.1 The reducing power of Physalins green tea

2.2 酸漿綠茶對DPPH·自由基清除能力

由圖2、圖3可看出，酸漿綠茶對DPPH·自由基有一定的清除能力，清除能力隨濃度的增加而增大。溶液濃度達到1 g·L－1時 ，對DPPH·自由基清除率可以達到90.8%。通過回歸方程y＝－28.097x2＋117.96 x＋1.2571，R2＝0.9995及y＝－92146x2＋3414.7 x＋11.623，R2＝0.978得出酸漿綠茶、Vc對DPPH·自由基的半抑制濃度IC50值為0.45 g·L－1、0.060 g·L－1。結(jié)果表明，一定濃度的酸漿綠茶對DPPH·自由基具有較強的清除能力，但沒有Vc的能力強。

圖2 酸漿綠茶清除DPPH·自由基的能力Fig.2 Scavenging activity of physalins green tea on DPPH·radical

2.3 酸漿綠茶對·OH自由基的清除能力

由圖4可看出，隨著濃度的增加，酸漿綠茶對Fenton反應(yīng)體系產(chǎn)生的羥自由基的清除力逐漸上升，當(dāng)濃度為2 g·L－1時，清除作用最強，其清除率達到63.8%。實驗數(shù)據(jù)用Excel進行多項式回歸，回 歸 方 程 為 y＝ －5.945x2＋31.157 x＋2 4.9 1 2，R2＝0.9 7 6 5，及y＝－1 5.5 9 1 x2＋71.003 x＋18.941，R2＝0.9963，回歸方程顯著。通過回歸方程得出酸漿綠茶、Vc清除羥自由基的半抑制濃度IC50值0.99 g·L－1、0.22 g·L－1。結(jié)果表明，一定濃度酸漿綠茶也有清除羥自由基的能力，但是作用不強。

圖3 Vc清除DPPH·自由基的能力Fig.3 Scavenging activity of Vc on DPPH·radical

圖4 酸漿綠茶及Vc清除·OH自由基的能力Fig.4 Scavenging activitv of physalins green tea and Vc on hydroxyl radical

2.4 酸漿綠茶對O2－·的清除能力

由圖5可看出，反應(yīng)體系吸光值隨反應(yīng)時間延長而穩(wěn)定增加，在體系反應(yīng)時間內(nèi)，吸光值和反應(yīng)時間線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)達0.9998，說明反應(yīng)體系在前3 min的反應(yīng)時間內(nèi)，穩(wěn)定積累有色中間產(chǎn)物，鄰苯三酚自氧化速率穩(wěn)定，根據(jù)線性方程y＝0.0342x＋0.1146可知，鄰苯三酚自氧化速率V0為0.0342。

由圖6可看出，當(dāng)樣品濃度為2 g·L－1時，其清除率為4.3%，說明酸漿綠茶對O2－·自由基的清除效果不佳。y＝0.1714x2－0.4626x＋2.192，R2＝0.9448，回歸方程顯著。由方程計算得出酸漿綠茶對清除超氧陰離子自由基的IC50值分別為15.43 g·L－1。試驗結(jié)果表明，一定濃度的酸漿綠茶的可清除超氧陰離子自由基，但是作用較弱。

圖5 鄰苯三酚自氧化速率的測定Fig.5 Linearity correlation bet ween reaction time and adsorbancy of reaction system

圖6 酸漿綠茶清除超氧陰離子自由基的能力Fig.6 Scavenging activitv of physalins green tea on superoxide anion radical at different concentrations

2.5 酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物的抑制作用

由圖7可看出，隨著濃度的增加，酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物的清除力逐漸上升，當(dāng)濃度為2 g·L－1時，清除作用最強，其清除率達到67.9%。實驗數(shù)據(jù)用Excel進行多項式回歸，回歸方程顯著。通過回歸方程得出酸漿綠茶清除脂質(zhì)過氧化物的半抑制濃度IC50值，為0.83 g·L－1。結(jié)果表明，一定濃度的酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物有較強的清除作用。

3 結(jié)論與討論

還原力是表示抗氧化物質(zhì)能夠提供電子能力強弱的重要指標(biāo)，隨著溶液的吸光度增大，還原能力增強，其抗氧化性亦增強［11～13］。二苯代苦味酰肼自由基（DPPH·）是一種較穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，如果受試物能夠清除它，便可以評價此受試物的抗氧化能力［14～17］。O2－ ·和·OH 等活性氧自由基誘導(dǎo)的氧化損傷一直被認為是引起衰老、細胞損傷、死亡和組織傷害、細胞癌變的原因之一［18］?！H是最強活性自由基，也是毒性最大的自由基。它可與活細胞中任何分子發(fā)生反應(yīng)造成損害，并導(dǎo)致遺傳突變、膜損傷、酶失活、線粒體氧化磷酸化作用等一系列變化［19］。超氧陰離子在人體內(nèi)存在的一定數(shù)量，不發(fā)生化學(xué)變化對人體無害，但是一旦與羥基結(jié)合生成的產(chǎn)物就會對細胞DNA造成損害，從而破壞了人類機體功能。脂質(zhì)過氧化過程中發(fā)生的ROS氧化生物膜的過程，期間可能生成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物如丙二醛（Malonaldehyde，MDA）和4－羥基壬烯酸（4－h(huán)ydroxynonenal，HNE），從而改變細胞膜的流動性和通透，最終使細胞結(jié)構(gòu)和功能得到改變。

試驗結(jié)果表明酸漿綠茶具有一定的還原力；對DPPH·自由基、·OH自由基、O2－·自由基具有一定的清除能力，對脂質(zhì)過氧化物有抑制作用，其IC50值分別為0.45 g·L－1、0.99 g·L－1、15.43 g·L－1、0.83 g·L－1；對DPPH·自由基的清除能力較強，但對O2－·自由基的清除能力較弱。酸漿綠茶之所以有以上抗氧化作用可能由于所含的黃酮有關(guān)［20］，酸漿綠茶的提取物有待于進一步的研究。

圖7 酸漿綠茶對脂質(zhì)過氧化物清除能力Fig.7 Scavenging Activity of physalins green tea on the POV

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