6種栽培品種南瓜提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

李昌勤，盧 引，顧雪竹，顧海鵬，康文藝，*

(1.河南大學(xué)中藥研究所，河南開封 475004;

2.中國(guó)中醫(yī)研究院中藥研究所，北京 100700)

6種栽培品種南瓜提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

李昌勤1，盧 引1，顧雪竹2，顧海鵬1，康文藝1，*

(1.河南大學(xué)中藥研究所，河南開封 475004;

2.中國(guó)中醫(yī)研究院中藥研究所，北京 100700)

目的:對(duì)6種不同栽培品種南瓜(金鉤、甜面、日本、遼寧新民金鉤、超甜蜜本、蜜本)提取物α－葡萄糖苷酶抑制活性進(jìn)行研究。方法:通過建立體外α－葡萄糖苷酶抑制模型，對(duì)南瓜提取物進(jìn)行活性篩選，并對(duì)提取物濃度與抑制活性關(guān)系進(jìn)行研究。結(jié)果:6種栽培品種南瓜不同溶劑提取物均有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，其中，金鉤南瓜石油醚提取物的抑制活性最好(IC50=143.91μg/mL)，活性遠(yuǎn)大于陽性對(duì)照阿卡波糖(IC50=1103.01μg/mL)。不同溶劑提取物顯示石油醚提取物抑制活性均高于乙酸乙酯提取物和甲醇提取物。結(jié)論:6種栽培品種南瓜提取物均有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，但不同品種其抑制活性具有一定的差別。

南瓜，α－葡萄糖苷酶，抑制活性

葫蘆科南瓜屬植物南瓜(Cucurbita moschataDuch.)，又名麥瓜、番南瓜、倭瓜等，為一年生蔓生草本。世界各地均有栽培，尤以亞洲栽培面積最多。味甘，性平，歸肺、脾、胃經(jīng)［1］。其果實(shí)含有糖類，醇類，酸類，苷類，脂類，堿類等化合物［2－3］。南瓜的藥用價(jià)值高，能解毒，保護(hù)肝腎功能，具有抗氧化，降血糖，降血脂，預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病，防治癌癥，保護(hù)視力，能控制體重起到減肥作用，促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)防治便秘，還具有輔助治療前列腺炎等功能［4－9］。α－葡萄糖苷酶抑制劑可競(jìng)爭(zhēng)性抑制小腸內(nèi)α－葡萄糖苷酶的活性，延緩或抑制葡萄糖在腸道的吸收，從而有效降低餐后高血糖。由于此類降糖藥的特點(diǎn)主要是降低餐后血糖而對(duì)降低空腹血糖無作用、安全和不增加胰島素的分泌，且在禁食狀態(tài)下服用該類藥不會(huì)降低血糖，主要用于單用磺脲類或雙胍類餐后血糖控制不理想的患者，或單獨(dú)用于較輕的餐后血糖高者，目前已被廣泛用于糖尿病及其并發(fā)癥的防治，臨床上主要使用阿卡波糖和伏格列波糖等。對(duì)于南瓜降血糖作用的研究國(guó)內(nèi)外早有報(bào)道，研究表明南瓜具有很好的降糖作用，且其起到降糖作用的主要為南瓜多糖，并且具有劑量依賴性，但是在治療糖尿病時(shí)并不能作為主要藥物，而是起到一個(gè)輔助治療作用［10－12］。金暉等［13］對(duì)南瓜降血糖作用機(jī)制進(jìn)行了研究，結(jié)果表明南瓜多糖的降血糖作用不是通過抑制α－葡萄糖苷酶的活性實(shí)現(xiàn)的，而是通過其它途徑實(shí)現(xiàn)的。但是南瓜體內(nèi)降糖作用與其體外抑制α－葡萄糖苷酶究竟有沒有相關(guān)性還需要進(jìn)一步研究。且不同品種南瓜的α－葡萄糖苷酶抑制活性還未見報(bào)道。本文利用體外抑制α－葡萄糖苷酶模型對(duì)6種不同栽培品種南瓜:金鉤南瓜、甜面大南瓜、日本南瓜、超甜蜜本南瓜、蜜本南瓜、遼寧新民金鉤南瓜的α－葡萄糖苷酶抑制活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，為南瓜的研究開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

金鉤南瓜種子 青縣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技推廣中心生產(chǎn);甜面大南瓜種子 山西省太谷縣藝農(nóng)種子有限公司生產(chǎn);日本南瓜種子 濟(jì)南綠禾農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司生產(chǎn);超甜蜜本南瓜種子 山西科達(dá)豐種業(yè)有限公司生產(chǎn);蜜本南瓜種子 遼寧省新民市財(cái)源菜籽店生產(chǎn);遼寧新民金鉤南瓜種子 中國(guó)遼寧新民市北方蔬菜種子行生產(chǎn)，于2011年5月播種于河南大學(xué)中藥研究所藥用植物園，2011年9月收獲南瓜果實(shí)，經(jīng)河南大學(xué)中藥研究所李昌勤副教授鑒定為葫蘆科南瓜屬植物南瓜(Cucurbita moschataDuch.)的果實(shí)，標(biāo)本存在于河南大學(xué)中藥研究所; α－葡萄糖苷酶(α－glucosidase，EC3.2.1.20)、4－硝基苯－α－D－吡喃葡萄糖苷(4－N－trophenyl－α－D－glucopyranoside，PNPG，026K1516)、阿 卡 波 糖(Acarbose，Lot16869)、二甲亞砜(DMSO) 美國(guó)Sigma公司;其他試劑均為分析純。

Multiskan MK3酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo Electron公司;LRH－150恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司; DELTA 320型 pH計(jì)、電子天平 美國(guó) Mettler－Toledo公司;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 德國(guó) Heidolph公司; TGL－16高速離心機(jī) 江蘇金壇市中大儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 活性成分的提取 南瓜果實(shí)切片陰干粉碎，各稱取100g，依次用兩倍量石油醚，乙酸乙酯，甲醇索氏回流提取2次，分別為4h和3h，合并提取液，減壓回收提取溶劑，濃縮得南瓜石油醚提取物(CMPE)、乙酸乙酯提取物(CMEA)和甲醇提取物(CMME)。

1.2.2 α－葡萄糖苷酶抑制活性的篩選方法 將南瓜各提取物以DMSO溶解，并存儲(chǔ)于4℃冰箱中。用張麗［14］等建立的96微孔板篩選方法，405nm處檢測(cè)其OD值，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次。同時(shí)做相同體系下的樣品空白組，不加樣品、酶與底物的空白對(duì)照組、不加樣品的陰性對(duì)照組和以阿卡波糖為抑制劑的陽性對(duì)照組。并用Origin軟件求出相應(yīng)的IC50值。酶活性抑制率公式為:酶活性抑制率(%)=(OD樣品陰性－OD樣品空白)/(OD陰性－OD空白)×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 各南瓜提取物得率

由表1結(jié)果可得，各品種南瓜提取得到的浸膏中石油醚和乙酸乙酯提取部位得率較少，相對(duì)而言甲醇提取部位得率較高，這跟南瓜果實(shí)中含有成分的脂溶性有關(guān)。

表1 各品種南瓜提取物得率Table 1 The yield of extracts from six varieties of C.moschata

2.2 南瓜提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性

6種南瓜提取物不同部位的α－葡萄糖苷酶抑制活性見表2。

表2顯示，6種南瓜提取物在初篩濃度均為1500μg/mL時(shí)，金鉤南瓜石油醚提取部分的α－葡萄糖苷酶抑制活性最好(IC50=143.91μg/mL)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于陽性對(duì)照阿卡波糖(IC50=1103.01μg/mL)。6種南瓜不同溶劑提取物中，除甜面大南瓜活性均較低外，其余品種南瓜石油醚提取物抑制活性均大于乙酸乙酯和甲醇提取物。

表2 南瓜提取物α－葡萄糖苷酶抑制活性Table 2 α－glucosidase inhibitory activity of the different extracts of C.moschata

2.3 提取物濃度對(duì)α-糖苷酶活性的影響

對(duì)活性高于陽性對(duì)照的不同品種不同溶劑提取物的濃度與抑制率關(guān)系進(jìn)行研究(圖1)，圖中顯示6種南瓜不同溶劑提取物的抑制率均與其濃度呈正量效關(guān)系。

圖1中顯示，金鉤南瓜石油醚提取物，日本南瓜石油醚提取物，超甜蜜本石油醚提取物的α－糖苷酶抑制活性較高，在抑制率達(dá)到90%之前，抑制率幾乎是隨濃度的增大而呈線性增加，且此三種提取物的IC50相差不大。但金鉤南瓜和日本南瓜石油醚提取物最大抑制率僅能達(dá)到90%左右，而超甜蜜本石油醚提取物卻能達(dá)到100%。

比較其他6種提取物，金鉤乙酸乙酯提取物，遼寧新民石油醚提取物，遼寧新民乙酸乙酯提取物，蜜本石油醚提取物，蜜本乙酸乙酯提取物，超甜蜜本乙酸乙酯提取物可發(fā)現(xiàn)其抑制率隨濃度變化的趨勢(shì)較一致，均隨濃度的增加其抑制率緩慢增加。

圖1 提取物濃度對(duì)α－葡萄糖苷酶抑制活性的影響Fig.1 The concentration of the different extracts of C.moschata effect on α－glucosidase inhibitory activity

3 結(jié)論

本文采用體外α－葡萄糖苷酶抑制模型對(duì)6種南瓜不同溶劑提取物的α－葡萄糖苷酶抑制活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)6種南瓜不同溶劑提取物均具有一定的α－葡萄糖苷酶抑制活性，在不同溶劑提取物中石油醚提取物的活性均高于乙酸乙酯和甲醇提取物。其中金鉤南瓜石油醚提取物的活性最好(IC50= 143.91μg/mL)，活性遠(yuǎn)大于陽性對(duì)照阿卡波糖(IC50=1103.01μg/mL)。提取物的抑制活性在一定范圍內(nèi)均與濃度呈正相關(guān)性，說明其抑制活性具有劑量依賴性。

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Study on α－glucosidase inhibitory activity of extracts from six varieties ofCucurbita moschataDuch.

LI Chang－qin1，LU Yin1，GU Xue－zhu2，GU Hai－peng1，KANG Wen－yi1，*
(1.Institution of Natural Products，Henan University，Kaifeng 475004，China;
2.Institute of Chinese Materia Medica，Traditional Chinese Medical Research Institute，Beijing 100700，China)

Objective:To study the α－glucosidase inhibitory activity of extracts from six varieties ofCucurbita moschataDuch.(Jingou，Tianmian，Riben，Chaotianmiben，Miben and Liaoningxinminjingou).Methods:By established α－glucosidase inhibitory model in vitro，the activity of extracts fromC.moschatawas screened.The relationship of inhibitory ratio and the extract concentration were also studied.Results:Different extracts from six varieties ofC.moschataall had inhibitory activity of α－glucosidase，among which petroleum ether extract of C.moschata(Jingou)had the highest inhibitor activity of α－glucosidase(IC50=143.91μg/mL)，which was lower than that of Acarbose(IC50=1103.01μg/mL).Among different extracts inhibitor activity of petroleum ether extract was higher than that of ethyl acetate extract and methanol extract.Conclusion:The extracts from six varieties ofC.moschataall had inhibitory activity of α－glucosidase，but different varieties of the inhibition rate had certain difference.

Cucurbita moschataDuch.;α－glucosidase;inhibitory activity

TS255.7

A

1002－0306(2012)21－0093－03

2012－04－06 *通訊聯(lián)系人

李昌勤(1971－)，女，副教授，本科，研究方向:生藥研究和中藥質(zhì)量控制研究。

河南省科技廳重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(112102310310);河南大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃(11NB021)。