反相高效液相色譜法測定柴遠解郁片中梔子苷的含量

趙霞 仲崇琳 楊美林

反相高效液相色譜法測定柴遠解郁片中梔子苷的含量

趙霞 仲崇琳 楊美林

目的建立以反相高效液相色譜法測定柴遠解郁片中梔子含量的方法。方法以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑;以乙腈-水(15∶85)為流動相;檢測波長為238nm;流速1.0 ml/min。理論板數(shù)以梔子苷峰計算應(yīng)不低于2500。結(jié)果梔子濃度線性范圍為0.1248 μg～0.6240 μg。平均回收率為99.27，RSD=0.41%(n=5)。結(jié)論本法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于柴遠解郁片的質(zhì)量控制。

柴遠解郁片;梔子;反相高效液相色譜法

柴遠解郁片是我院在研的六類新藥，該制劑由柴胡、遠志、梔子、巴戟天、五味子、石菖蒲、酸棗仁、茯苓、牡丹皮和半夏藥材組成，具有舒肝解郁和安神定志，用于治療抑郁癥(肝郁氣滯型)。梔子是柴遠解郁片中主要成分之一，在新藥研制過程中，參照2010年版中國藥典梔子項下含量測定方法，筆者建立了以反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定其中梔子含量的方法。作為控制本品質(zhì)量的方法之一。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10ATvp高效液相色譜儀，十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱(Diamonsil C18(250 4.6 mm;5 μm)色譜柱(迪馬公司);SPD-10AVP檢測器，N2010色譜數(shù)據(jù)工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所)，梔子苷對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(供含量測定用)，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為重蒸餾水。柴遠解郁片由我院試制中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑;以乙腈-水(15∶85)為流動相;檢測波長為238 nm;流速1.0 ml/min;柱溫:室溫。理論板數(shù)以梔子苷峰計算應(yīng)不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml含31.2 μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過四號篩)約0.2 g，同時另取本品粉末測定水分(中國藥典2010年版附錄Ⅸ H第二法)，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性溶液的制備 依照柴遠解郁片工藝，去上述藥材除去梔子，按照工藝要求及原理，制備一批藥品，作為陰性供試品。

2.5 干擾試驗 取不含梔子的陰性對照液、供試品、對照品各20 μl，注入高效液相色譜儀，依法測定，結(jié)果陰性對照液的色譜圖在梔子苷色譜峰相應(yīng)的保留時間處無干擾峰出現(xiàn)，結(jié)果見圖 1，2。

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml中含梔子苷31.2 μg的溶液，作為對照品溶液。分別精密吸取 4、8、12、16、20 μl，注入高效液相色譜儀，按上述條件測定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，梔子苷的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程:Y=30243.21+1337910.18X r=0.9997，線性范圍:0.1248 μg ～0.6240 μg。

圖1 溶劑峰、梔子苷對照品、樣品液及陰性液高效液相色譜圖

圖2 溶劑峰、梔子苷對照品、樣品液及陰性液高效液相色譜圖

2.7 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液，按正文中的含量測定方法測定，重復(fù)進樣5次，5次測定峰面積分值的RSD為0.17%，結(jié)果表明，含量測定方法精密度符合要求。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批號的樣品(批號:20110801)依法獨立按正文含量測定方法測定，平均值為1.52(mg/g)，RSD 1.0%，結(jié)果表明，含量測定方法重現(xiàn)性符合要求。

2.9 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液(批號:20110801)，按正文中的含量測定方法測定，分別于0、6、12、18、24 h進樣一次，測定峰面積，結(jié)果供試品溶液色譜峰面積積分值在24 h內(nèi)基本無變化，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 加樣回收率試驗 精密量取已知梔子苷含量的樣品五份(含量1.52 mg/粒)，精密加入一定量的梔子苷對照品溶液，依法按正文含量測定方法測定，計算回收率，平均回收率99.27%，RSD0.41%。

2.11 樣品含量測定 取三批樣品，依法按正文含量測定方法測定其含量，根據(jù)測定結(jié)果，本品每g中含梔子苷平均值為1.50 mg，考慮到在今后實際生產(chǎn)中應(yīng)有一定損耗，故限定樣品中梔子含量以梔子苷(C17H24O10)計不得低于1.0 mg/g(n=5)。

3 討論

本試驗乙腈-水(15∶85)為流動相，組分簡單，柱平衡時間短，基線平直，試驗后色譜柱易清洗。本試驗線性關(guān)系良好，線形范圍寬，穩(wěn)定性好，回收率在99.27%，方法可行。因中藥成分復(fù)雜，多難分離，然用本文所述方法則提取完全，未引入其他雜質(zhì)，組分分離較佳，理論板數(shù)定為2500。

136000 四平，吉林省神經(jīng)精神病醫(yī)院(趙霞);吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院(仲崇琳 楊美林)

梔子苷為梔子活性成分，本文采用以十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱的反相高效液相法對其定量，操作簡單，可作為該藥材的質(zhì)量控制法。

表1 回收率試驗結(jié)果

編號 取樣量(g)樣品已知含量(mg)對照品加入量(mg)測得總量(mg)回收率(%)平均值(%)RSD(%)1 0.2551 0.97 1.04 2.00 99.71 2 0.2671 1.01 0.98 1.98 98.97 3 0.2673 1.01 0.97 1.97 99.17 99.27 0.41 4 0.2550 0.97 1.01 1.97 99.68 5 0.2802 1.06 0.94 1.99 98.83