維藥小檗葉中小檗堿的HPLC測定法

新疆農業(yè)大學食品科學與藥學學院（830052）張小梅

新疆伊犁哈薩克自治州食品藥品檢驗所（835000）庫瓦尼西?帕孜力江

維藥小檗葉為小檗科植物落葉灌木黑果小檗(Berberis heteropoda Schrenk.)、紅果小檗（Berberis nummularia Bge）和伊犁小檗（Berberis iliensis M.Po）的干燥葉。其中含有小檗堿、有機酸、維生素C等多種成分。鹽酸小檗堿被認為是小檗的藥效成分之一。維吾爾民族常用于治療口舌生瘡、干裂、咽喉炎、肺結核等疾病。本實驗參照文獻方法，建立了HPLC法用于測定小檗葉中的主要成分小檗堿，為小檗葉質量標準的制定提供一定的參考和依據(jù)。通過方法學考察發(fā)現(xiàn)該法簡便、穩(wěn)定、可靠，可對本品進行質量控制。

1 儀器和試藥

日本島津公司全自動液相色譜儀（SPD－20A紫外檢測器，CBM－20A系統(tǒng)控制器，LC-20 AT四元單泵，SIL-20A自動進樣器）；Mettler XS205型十萬分之一，XS204型萬分之一分析天平；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。鹽酸小檗堿對照品購于中國藥品生物制品檢定所（批號：110713-200609），水（艾柯超純水），乙腈（色譜純），其余試劑均為分析純。小檗葉采于新疆伊犁河谷（批號：20110501，20110527，20110616，20111022）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Shimadzu C18色譜柱（250 mm×4.6 mm）；流動相：乙腈0.1%磷酸（50:50）（每100 ml加十二烷基硫酸鈉0.1g）；檢測波長：265 nm；體積流量：1.0 ml/min；進樣量：10 μl；柱溫：30℃；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿對照品計算不低于6000。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品10mg，加流動相制成每1ml含4μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備 將干燥小檗葉粉碎（過三號篩），精密稱取2g置50ml量瓶中，加流動相約49ml，搖勻，超聲提取40分鐘，放冷，加流動相至刻度，搖勻，用0.45μm微孔過濾器過濾，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 精密稱取105℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品適量，用流動相溶解定容后分別稀釋成含鹽酸小檗堿1.00，2.00，4.00，6.00，10.00，16.00 μg/ml標準溶液，各進樣10 μl，按色譜條件測定，以對照品溶液的進樣濃度（X）對峰面積積分值（Y）回歸得直線方程：y=41828.59x+3359.72，r=0.9999。表明鹽酸小檗堿在1.00～16.00μg /ml范圍呈良好的線性關系。

附表 不同季節(jié)小檗葉粉樣品中小檗堿的含量

2.4.2 精密度試驗 分別精密吸取對照品溶液10 μl，重復進樣5次，鹽酸小檗堿峰面積積分值的RSD為0.2%，表明儀器進樣精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液分別在4小時，8小時，16小時，24小時，48小時，72小時進樣10 μl，測定鹽酸小檗堿峰面積，計算得鹽酸小檗堿的平均質量分數(shù)為0.046 mg/g，RSD為0.78%，表明供試品溶液在制備72h后基本穩(wěn)定。

2.4.4 重現(xiàn)性試驗 取同一樣品6份，平行制備供試品溶液，分別進行測定,計算得鹽酸小檗堿的平均質量分數(shù)為0.048 mg/g，RSD為0.43%。

2.4.5 加樣回收率 精密稱取供試品2g，共6份，分別精密加入0.1 mg/ml鹽酸小檗堿對照品溶液1 ml，制備供試品溶液，進行測定，計算得平均回收率為98.37%，RSD為0.79%。

2.4.6 樣品測定 分別稱取不同季節(jié)采收的小檗葉粉，制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣分析，外標法計算樣品中小檗堿的含量，結果見附表。

3 討論

從樣品測定結果看出，花前期，花期的小檗葉中小檗堿含量較高，果期次之，秋后的小檗葉質量差[1]。