瑞舒伐他汀鈣對(duì)冠心病患者外周血內(nèi)皮前體細(xì)胞水平的干預(yù)作用

郭文靜，李曉燕，張紅明，韓淑芳，康 玲

1遼寧醫(yī)學(xué)院 濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院研究生培養(yǎng)基地，濟(jì)南 250031；2濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院，濟(jì)南250031；3泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，泰安 271000

機(jī)體在正常生理情況下，外周循環(huán)血中的內(nèi)皮前體細(xì)胞含量較少、數(shù)目趨于穩(wěn)定，在組織缺血、缺氧等刺激下骨髓中的內(nèi)皮前體細(xì)胞被大量動(dòng)員到外周血中，使外周血的內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)目增多，參與內(nèi)皮、血管的再生。在高脂血癥等心血管危險(xiǎn)因素存在時(shí)，會(huì)出現(xiàn)內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)量減少和遷移能力下降，導(dǎo)致血管損傷增強(qiáng)及修復(fù)能力降低[1]，因此外周血內(nèi)皮前體細(xì)胞的變化可能間接反應(yīng)內(nèi)皮細(xì)胞損傷與修復(fù)的情況[2]。他汀類藥物除有調(diào)脂作用外，還有包括減少血管炎癥、減少血小板聚集和血栓形成等非調(diào)脂的心血管保護(hù)作用。本研究旨在觀察他汀類藥物干預(yù)后CD34+/VEGFR-2+EPCs數(shù)量的變化，進(jìn)一步探討他汀類藥物對(duì)延緩冠狀動(dòng)脈粥樣硬化過程中的作用。

材料和方法

1 研究對(duì)象 選取2011年1月-2011年10月在濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院心內(nèi)科住院且經(jīng)冠脈造影確診為冠心病患者112例，男性63例，女性49例。排除標(biāo)準(zhǔn)：先前3個(gè)月內(nèi)發(fā)生過急性心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛、腦血管疾病；美國(guó)紐約心臟病學(xué)會(huì)(NYHA)分級(jí)Ⅲ或Ⅳ級(jí)的心力衰竭；嚴(yán)重肝腎功能損害、各種急慢性感染性疾??；對(duì)造影劑過敏患者；近期有外傷、潰瘍、外科手術(shù)、炎癥、腫瘤；近期服用過干細(xì)胞因子、粒系集落刺激因子、粒系巨噬系集落刺激因子、他汀類調(diào)脂藥物；其他心臟病。

2 分組 對(duì)冠狀動(dòng)脈造影顯示管腔直徑狹窄≥50%的病變支進(jìn)行定量分析，左前降支、回旋支或右冠狀動(dòng)脈1支狹窄者為單支病變；2支狹窄者為雙支病變；3支均狹窄者為三支病變；如左主干病變并累及左前降支或回旋支均為雙支病變，若同時(shí)伴右冠狹窄則為三支病變。所有入選對(duì)象分為單支病變組(37例)、雙支病變組(36例)、三支病變組(39例)，入選對(duì)象除服用冠心病常規(guī)藥物外，均服用瑞舒伐他汀鈣片(商品名：可定，由阿斯利康制藥有限公司提供，劑量：10mg 1/晚)。

3 試劑與儀器 Alexa Fluor 647 anti-human VEGFR-2(CD309)(購(gòu)置Becton dickinson公司)，F(xiàn)ITC antihuman CD34(購(gòu)置Becton dickinson公司)，溶血素，Lysing Solution(購(gòu)置Becton dickinson公司)，流式細(xì)胞分析儀(購(gòu)置Becton dickinson公司)，低速臺(tái)式離心機(jī)(購(gòu)置上海醫(yī)用分析儀器廠公司)。

4 生化指標(biāo)檢測(cè) 總膽固醇(CH)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-CH)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)、空腹血糖(GLU)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)等，入院第2天抽血檢測(cè)。

5 外周血EPCs水平測(cè)定 患者禁食8-10h后，次日清晨于肘靜脈抽取空腹血3ml，新鮮肝素鈉抗凝，采標(biāo)本血后即刻送檢，行直接免疫熒光標(biāo)記法，移液槍取100μl全血，加胞膜抗體(5μl Alexa Fluor 647 anti-human CD309(VEGFR-2)，10μl FITC anti-human CD34)，以同型抗體作對(duì)照，孵育30min，室溫保存，避光；加2ml 1×Lysing Solution，混勻5-10min，室溫保存，避光；1 500r/min離心5min；懸浮細(xì)胞，加1×PBS(含0.5% BSA，0.1%疊氮鈉)洗滌，1 500r/min離心5min；懸浮細(xì)胞，補(bǔ)足0.5ml PBS，并以流式細(xì)胞儀計(jì)算CD34+/VEGFR-2+EPCs在全血中所占百分比。

6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)值變量用-x±s表示，用藥前后數(shù)據(jù)采用配對(duì)t檢驗(yàn)，三組之間采用單因素方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 入選對(duì)象基線資料比較 各組一般資料間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(各組指標(biāo)兩兩比較P>0.05)，見表1。2 干預(yù)前后血脂水平比較 干預(yù)1個(gè)月后，TC、LDL-CH與干預(yù)前相比顯著下降(P<0.001)，TG與干預(yù)前相比亦呈下降趨勢(shì)(P<0.05)，HDL-C變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

3 不同組外周血CD34+/VEGFR-2+EPCs間的關(guān)系在應(yīng)用瑞舒伐他汀鈣干預(yù)前，對(duì)單支、雙支、三支病變組進(jìn)行單因素方差分析，各組均值間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；單支、雙支、三支病變組CD34+/VEGFR-2+EPCs分別為0.121 6±0.019 1、0.085 5±0.011 3、0.043 1±0.012 8，即隨著冠脈病變程度加重，外周血中EPCs數(shù)量逐漸下降。

4 瑞舒伐他汀鈣片對(duì)CD34+/VEGFR-2+EPCs水平的影響 給予瑞舒伐他汀鈣片干預(yù)1月后，三組與用藥前相比，冠心病患者外周血中CD34+/VEGFR-2+EPCs數(shù)量明顯升高(P<0.05)。見表3。

表1 三組患者基線資料Tab 1 Baseline data about patients in 3 groups(-x±s)

表2 瑞舒伐他汀鈣片干預(yù)前后三組的血脂變化Tab 2 Lipid level in 3 groups before and after rosuvastin treatment(-x±s, mmol/L)

表3 瑞舒伐他汀鈣片對(duì)CD34+/VEGFR-2+EPCs水平的影響Tab 3 Effect of rosuvastin on CD34+ and VEGFR-2+marked EPC(-x±s, %)

討 論

血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，發(fā)生慢性炎癥反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致并加速動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展，故內(nèi)皮前體細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞損傷后的修復(fù)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[3-4]，各種心血管危險(xiǎn)因素(如高脂血癥)均可導(dǎo)致內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)量下降[5]。正常情況下，內(nèi)皮的損傷與內(nèi)皮祖細(xì)胞的修復(fù)之間存在著動(dòng)態(tài)平衡，以維持血管內(nèi)膜功能結(jié)構(gòu)的完整。

冠心病患者心肌缺血區(qū)釋放各種炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子，動(dòng)員骨髓內(nèi)皮前體細(xì)胞遷移至外周血，歸巢到病損內(nèi)皮，當(dāng)冠脈病損支數(shù)逐漸增多時(shí)，心肌缺血面積便會(huì)增大，三支病變者內(nèi)皮損傷修復(fù)所需的內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過兩支、單支病變者，外周血中內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)量減少，內(nèi)皮自我修復(fù)能力下降，更加重冠脈粥樣斑塊的形成及進(jìn)展。我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：隨著冠脈病變程度加重，外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)目逐漸降低，其水平與冠狀動(dòng)脈病變支數(shù)呈顯著負(fù)相關(guān)，多支病變患者相對(duì)較單支病變者其內(nèi)皮祖細(xì)胞有下降趨勢(shì)，具體表現(xiàn)為：三支病變組小于兩支病變組、單支病變組，兩支病變組小于單支病變組。外周血中內(nèi)皮前體細(xì)胞含量較多的單支病變組會(huì)比雙支病變組及三支病變組其心源性死亡的發(fā)生率低[6]。

動(dòng)脈粥樣硬化患者均伴有內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)量減少和遷移能力下降，可歸因于心血管危險(xiǎn)因素的聚集導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞修復(fù)能力下降[7]。目前已有多個(gè)證據(jù)表明高脂血癥患者外周血循環(huán)內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)量減少和功能受損，且其數(shù)目與膽固醇、低密度脂蛋白水平呈負(fù)相關(guān)[8]。對(duì)于冠心病患者來說，強(qiáng)化降脂能夠起到穩(wěn)定粥樣斑塊、延緩動(dòng)脈硬化的進(jìn)展[9]，這顯得尤為重要；他汀類藥物除具有調(diào)脂作用外，還可以改善血管內(nèi)皮、保護(hù)心血管，包括減少血管炎癥發(fā)生、減少血小板聚集和血栓形成、抑制體內(nèi)過度的免疫激活、減少免疫反應(yīng)對(duì)機(jī)體的破壞、改善內(nèi)皮功能等；本實(shí)驗(yàn)經(jīng)給予瑞舒伐他汀鈣片10mg 1/晚干預(yù)后，三組的上述指標(biāo)顯著上升，這說明他汀類藥物還可以促進(jìn)骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員，增加外周血中循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量，冠心病患者應(yīng)用瑞舒伐他汀鈣藥物后外周循環(huán)血中的CD34與VEGFR-2共同標(biāo)記的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)目增加，冠心病患者內(nèi)皮前體細(xì)胞數(shù)量均較1個(gè)月前有所升高，從而有效修復(fù)損傷的內(nèi)皮，延緩動(dòng)脈粥樣硬化繼續(xù)發(fā)展，改善冠心病患者的預(yù)后。

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