某縣204例乙型肝炎病毒基因型及其臨床相關(guān)性分析

某縣204例乙型肝炎病毒基因型及其臨床相關(guān)性分析

目的了解重慶墊江縣地區(qū)乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布及其與臨床的相關(guān)性。方法選取墊江縣HBVDNA陽(yáng)性的HBV感染者204例，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和直接測(cè)序法檢測(cè)HBV基因型并分析其與臨床的相關(guān)性。結(jié)果204例 HBV－DNA陽(yáng)性血清標(biāo)本中，測(cè)序成功為146例。其中B型98例（67.12%），C型47例（32.19%），D型1例（0.69%），C基因型丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）指標(biāo)高于B基因型（P＜0.05）；C基因型患肝硬化和肝細(xì)胞癌的比例高于B基因型（P＜0.05）。結(jié)論B型為本地區(qū)的優(yōu)勢(shì)基因型，并且C型HBV感染者易引起肝臟的嚴(yán)重?fù)p傷。

肝炎病毒，乙型；基因型；臨床相關(guān)性

HBV感染呈全球性分布，各地區(qū)不同程度的流行性與生活習(xí)慣、經(jīng)濟(jì)條件、人種等因素有關(guān)外，與病毒本身的生物學(xué)特點(diǎn)更加密切相關(guān)［1］。從1988年開(kāi)始，根據(jù)HBV全基因序列異質(zhì)性大于等于8%的界限，對(duì)HBV核苷酸進(jìn)行序列分析，HBV被分為8個(gè)基因型：即 A、B、C、D、E、F、G和 H［2］。HBV基因型呈地域分布，不同基因型在致病性、對(duì)藥物的敏感性及基因變異等方面均有差異［3］。現(xiàn)將墊江縣204例乙型肝炎病毒基因型及其臨床相關(guān)性分析報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取重慶市墊江縣人民醫(yī)院門(mén)診及住院的HBV－DNA陽(yáng)性的HBV感染者204例，其中，慢性乙型肝炎183例，肝硬化15例，肝細(xì)胞癌6例；疾病的診斷依據(jù)參照2000年全國(guó)肝炎會(huì)議擬訂方案。所有標(biāo)本經(jīng)乙型肝炎5項(xiàng)檢測(cè)，其中115例表面抗原、e抗原、核心抗體為陽(yáng)性，85例表面抗原、e抗體、核心抗體為陽(yáng)性，3例表面抗原、e抗原為陽(yáng)性，僅1例表面抗原陽(yáng)性。標(biāo)本（血清）保存于－80℃冰箱。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 微量樣品基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）、2×Pfu PCR Master Mix、1 000bp DNALadder購(gòu)自德國(guó)Qiagen公司；HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒、HBVDNA熒光定量PCR試劑盒購(gòu)自廣州達(dá)安有限公司，瓊脂糖購(gòu)自美國(guó)Gibco公司，引物由TaKaRa有限公司合成。PCR擴(kuò)增儀為北京生物有限公司產(chǎn)品，HC－3018R型高速冷凍離心機(jī)為科大創(chuàng)新公司產(chǎn)品，凝膠圖像分析系統(tǒng)DocGel2000為美國(guó)BioRad公司產(chǎn)品，熒光定量PCR儀為美國(guó)ABI公司產(chǎn)品。

1.2.2 HBV S基因擴(kuò)增和測(cè)序 按照Qiagen微量樣品基因組DNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)處理標(biāo)本，獲得模板DNA。PCR擴(kuò)增 HBV S基因：正義鏈：5′－GCG GGG TTT TTC TTG TT GA－3′反義鏈：5′－GGG ACT CAA GAT GTT GTA CAG－3′，引物由TaKaRa有限公司合成。PCR反應(yīng)體系（總量25μL）：2×Taq PCR Master Mix 13μL；模板DNA 3μL；正義鏈引物（10μmol／L）1μL；反義鏈引物（10μmol／L）1μL；雙蒸水7μL。PCR反應(yīng)條件：95℃10min；95℃30s；52℃45s；72℃90 s；72℃10min；35個(gè)循環(huán)。將204份PCR擴(kuò)增產(chǎn)物（25μL）送北京華大基因公司測(cè)序。將測(cè)得基因序列與Gen Bank進(jìn)行同源性比較，以確定HBV基因型。

1.2.3 HBV－DNA、肝 功 能 及 乙 型 肝 炎 標(biāo) 志 檢 測(cè) 運(yùn) 用ABI7300熒光定量PCR儀檢測(cè)HBV－DNA；采用AU2700全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）；應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè) HBsAg、抗－HBs、HbeAg、抗－Hbe、抗－HBc等乙型肝炎標(biāo)志物，按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

測(cè)序成功146例，其中，慢性乙型肝炎125例，肝硬化15例，肝細(xì)胞癌6例；B型98例（67.12%），C型47例（32.19%），D型1例（0.69%）；B型男66例，女32例，年齡（33±16.5）歲；C型男32例，女15例，年齡（35±13.6）歲；D型男0例，女1例，年齡22歲。HBV基因型與患者血清學(xué)標(biāo)志物及HBVDNA載量的關(guān)系、患者臨床表現(xiàn)及預(yù)后的關(guān)系及不同HBV基因型與病情比較見(jiàn)表1～3。

表1 B、C基因型HBV－DNA水平及HBeAg陽(yáng)性率比較

表2 B、C型ALT、AST比較

3 討 論

HBV基因型是長(zhǎng)期點(diǎn)突變累積形成的，由于HBV在逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的不對(duì)稱(chēng)轉(zhuǎn)錄和缺乏校對(duì)酶的作用，HBV突變率較高。最近有報(bào)道在越南發(fā)現(xiàn)新的 HBV基因型I［4］，使得HBV基因型增至9個(gè)。隨著進(jìn)一步深入研究，發(fā)現(xiàn)同一種基因型，病毒的序列特點(diǎn)及臨床表現(xiàn)也存在一定的差異，根據(jù)全基因組序列異質(zhì)性大于4%而小于8%的原則，HBV基因型進(jìn)一步可分為不同的基因亞型，如：A基因型可分為A1（Aa）、A2（Ae）、A3（Ac）亞型；B基因型可分為 B1（Bj）、B2（Ba）、B3、B4亞型；C基因型可分為C1、C2、C3、C4亞型等。近年的研究表明，HBV分型在HBV基因型之間存在一定的流行病學(xué)與臨床特征差異［5］。Zeng等［6］研究表明，中國(guó) HBV感染者的基因型主要是B和C型，南方地區(qū)主要以B型為主，北方地區(qū)則以C型較多。本文應(yīng)用HBV S區(qū)基因直接測(cè)序法來(lái)進(jìn)行分型，該方法準(zhǔn)確度高，結(jié)果可靠；檢測(cè)出墊江縣HBV感染者的基因型以B型居多，與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致；但本調(diào)查結(jié)果也顯示，HBV基因型與性別及年齡之間沒(méi)有相關(guān)性。

HBV感染人體后，由于感染者的HBV基因型、年齡、機(jī)體免疫力、及HBV－DNA載量等的不同，他們的臨床表現(xiàn)及預(yù)后也有差異?？杀憩F(xiàn)為：一過(guò)性病毒血癥、急性肝炎、無(wú)癥狀的病毒攜帶狀態(tài)、慢性肝炎、肝衰竭、肝硬化及肝癌。本研究顯示，C型感染者血清ALT、AST水平均高于B型，且基因C型感染者較B型感染者更易發(fā)生肝硬化以及肝細(xì)胞癌；這與鐘崇芳等［7］報(bào)道，基因C型感染者其肝臟炎癥壞死評(píng)分高于基因B型感染者，和基因C型HBV感染者較B型感染者更易發(fā)展為肝硬化和肝癌［8］的報(bào)道一致。提示HBV基因型與疾病的活動(dòng)性可能存在一定關(guān)系。

本調(diào)查對(duì)墊江縣HBV感染者不同基因型的臨床特征分析提示，基因B型和基因C型感染者HBeAg陽(yáng)性率和HBVDNA水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于不同基因型HBV－DNA水平及HBeAg陽(yáng)性率之間關(guān)系的報(bào)道眾說(shuō)紛紜［9－10］。有研究報(bào)道，基因C型較B型的HBV－DNA水平更高；也有報(bào)道稱(chēng)，在HBeAg陽(yáng)性患者中HBV－DNA病毒載量較高的是：基因C型，而HBeAg的陰性患者中基因D型者病毒載量更高［11］。也有報(bào)道稱(chēng)，不同基因型間的HBeAg陽(yáng)性率及HBV－DNA沒(méi)有關(guān)系。因此，不同HBV基因型間 HBeAg陽(yáng)性率和 HBVDNA含量的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

還有研究表明，HBV基因型與抗病毒治療有關(guān)［12］，但由于目前缺乏大量HBV基因型分型與治療關(guān)系的前瞻性研究，國(guó)際上還沒(méi)將HBV基因型分型作為用藥指標(biāo)和治療標(biāo)準(zhǔn)，然而對(duì)基因型的研究卻仍然勢(shì)在必行，希望通過(guò)大家的共同努力能使其成為乙型肝炎病毒個(gè)性化治療的一個(gè)重要指標(biāo)。

通過(guò)本研究了解到墊江縣HBV基因型的分布情況及其與臨床表現(xiàn)及預(yù)后的關(guān)系，有利于指導(dǎo)臨床醫(yī)生選擇合理的治療方案及個(gè)體性指導(dǎo)用藥，為有效控制本縣乙型肝炎病情提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Analysis on 204 cases of hepatitis B virus genotypes in a county and their clinical correlation

MaMingyan1，Liao Liya1，Yu Dengqiong1，Xiong Zhongzheng1，GuoYuanyuan2，Liao Pu2△
（1.Department of Clinical Laboratory，Dianjiang County People′s Hospital，Chongqing408300，China；2.Chongqing Municipal Clinical Laboratory Center，Chongqing400014，China）

ObjectiveTo investigate the distribution of hepatitis B virus（HBV）genotypes in Dianjiang area of Chongqing and their clinical correlation.MethodsSerum samples from 204HBV－DNA positive patients with chronic HBV infection，including 183cases of chronic hepatitis B（CHB），15cases of liver cirrhosis（LC）and 6cases of hepatocellular carcinoma（HCC），were collected and detected for HBV genotypes by PCR and direct sequencing.Their clinical correlation was analyzed.ResultsOf all 204 HBV－DNA positive serum samples，146cases were detected successfully by direct sequencing，including 98cases（67.12%）of genotype B，47cases（32.19% ）of genotype C and only 1cases（0.69%）of genotype D.The value of ALT and AST in genotype C was significantly higher than that in genotype B（P＜0.05）；genotype C was more prevalent in LC and HCC than genotype B（P＜0.05）.ConclusionGenotype B is the superior genotype in this area.Genotype C may induce more serious damage of liver in the patients with chronic HBV infection.

hepatitis B virus；genotype；clinical correlation

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.35.024

A

1671－8348（2012）35－3747－02

△

，Tel：（023）63519127；E－mail：liaopu＠sina.com。

2012－08－13

2012－10－23）

△通訊作者，Tel：13983186966；E－mail：469498331＠qq.com。

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