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    脂多糖在慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變中的作用

    2012-09-20 06:42:02李家斌陸籠輝代雪楓丁體龍
    實(shí)用肝臟病雜志 2012年1期
    關(guān)鍵詞:內(nèi)毒素乙型肝炎內(nèi)皮細(xì)胞

    王 莉 李家斌 馬 勇 陸籠輝 代雪楓 丁體龍

    肝內(nèi)血管病變?cè)诼砸倚透窝椎倪M(jìn)程中發(fā)揮著重要的作用[1],但其作用機(jī)制仍需深入探討。臨床上各種急慢性肝炎、重癥肝炎、肝硬化與肝癌患者存在程度不等的腸源性內(nèi)毒素血癥(IETM)[2],可引起反復(fù)與持續(xù)的肝細(xì)胞損傷和相伴隨的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),引起一些致纖維化因子如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)與氧自由基激活和肝臟微循環(huán)紊亂而導(dǎo)致肝纖維化[3]。但目前內(nèi)毒素的發(fā)生與慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變方面的研究不多。本實(shí)驗(yàn)主要通過檢測(cè)慢性乙型肝炎患者血清中內(nèi)毒素主要成分脂多糖(LPS)水平及觀察肝組織Toll樣受體4(TLR4)表達(dá),以探討LPS在慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變中的作用。

    材料與方法

    一、研究對(duì)象 120例患者為解放軍第123醫(yī)院肝病中心2010年4月~2011年6月行肝臟活組織檢查的慢性乙型肝炎住院患者(男性86例,女性34例,平均年齡34歲),診斷符合2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制訂的慢性乙型肝炎防治指南的標(biāo)準(zhǔn)。排除重疊感染HAV、HCV、HDV、HEV者;排除合并脂肪肝、糖尿病、心血管疾病及免疫系統(tǒng)疾病者;排除肝癌者;排除合并呼吸道、泌尿道和消化道感染、自發(fā)性腹膜炎等。肝內(nèi)血管病變級(jí)別判斷標(biāo)準(zhǔn)參見嚴(yán)家春等[4]報(bào)告的方法(表1),經(jīng)病理科醫(yī)師閱片,將120例患者分為肝內(nèi)血管病變1級(jí)組46例、肝內(nèi)血管病變2級(jí)組38例和肝內(nèi)血管病變3級(jí)組36例。另取10例肝組織病理學(xué)檢查大致正常者為對(duì)照組。

    表1 肝內(nèi)血管病變?cè)u(píng)級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

    二、標(biāo)本采集 (1)外周血標(biāo)本:所有研究對(duì)象空腹8h以上,清晨采3ml肘靜脈血,3000r/min離心30min,分離血清,凍存于 -20℃?zhèn)錂z;(2)肝組織標(biāo)本:在B超定位下采用16G肝活檢針抽取2條肝組織,其長(zhǎng)度均≥1.5cm。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片,蘇木素/伊紅染色。

    三、血清LPS檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法測(cè)定,試劑盒購(gòu)自上??婆d生物科技有限公司,嚴(yán)格按說明書操作。

    四、肝組織TLR4表達(dá)檢測(cè) 采用檸檬酸高溫高壓下進(jìn)行抗原修復(fù),兔抗人、大鼠和小鼠TLR4多克隆抗體購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司(1:200)。采用SABC法進(jìn)行免疫組化染色(SABC試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司),DAB顯色,具體步驟參照試劑盒推薦步驟進(jìn)行。空白對(duì)照以PBS替代一抗。顯微鏡下觀察免疫組化染色結(jié)果,采用綜合評(píng)分法[5](由研究者及1名病理醫(yī)師分別閱片和評(píng)分)。陽(yáng)性著色呈棕色細(xì)顆粒狀。凡細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核不著色為0分,淺棕色為1分,棕色為2分,深棕色為3分;在高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)視野,計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比,陽(yáng)性細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例:≤10%為0分,1l%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,≥76%為4分。將上述2項(xiàng)計(jì)分的乘積作為標(biāo)本的最后得分:0分為陰性(-),1~4分為弱陽(yáng)性(+),5~8分為中等陽(yáng)性(++),9~12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

    五、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料以表示,多組計(jì)量資料間比較采用單因素方差分析。兩組等級(jí)資料之間的比較采用秩和檢驗(yàn),多組等級(jí)資料間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。采用Spearman和Kendall's tau-b相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.01為差異有顯著性意義。

    結(jié)果

    一、不同肝內(nèi)血管病變級(jí)別的慢性乙型肝炎患者血清LPS水平比較 單因素方差分析顯示肝內(nèi)血管病變1級(jí)組血清LPS水平與對(duì)照組比較無顯著性差異(P>0.05);肝內(nèi)血管病變2級(jí)組和3級(jí)組血清LPS水平與對(duì)照組比較均有顯著性差異(P<0.01)。血清LPS水平依次為肝內(nèi)血管病變3級(jí)>2級(jí)>1級(jí),提示慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變?cè)街?,血清LPS升高越明顯。Spearman相關(guān)分析顯示血清LPS水平與肝內(nèi)血管病變程度呈正相關(guān)(r=0.892,P<0.01,表2)。

    表2 各組血清LPS水平()比較

    表2 各組血清LPS水平()比較

    與對(duì)照組比較,①P=0.993;與肝內(nèi)血管病變1級(jí)組比較,②P<0.01;與肝內(nèi)血管病變2級(jí)組比較,③P<0.01

    例數(shù) LPS(ng/ml)對(duì)照組 10 0.30±0.13肝內(nèi)血管病變1級(jí) 46 0.32±0.14①肝內(nèi)血管病變2級(jí) 38 0.71±0.14②肝內(nèi)血管病變3級(jí) 36 1.10±0.15③

    二、不同肝內(nèi)血管病變級(jí)別的慢性乙型肝炎患者肝組織TLR4表達(dá)的比較 見表3。TLR4在對(duì)照組肝組織基本無表達(dá)(圖1)。肝內(nèi)血管病變1級(jí)組TLR4陽(yáng)性表達(dá)與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。肝內(nèi)血管病變2級(jí)組、3級(jí)組TLR4陽(yáng)性表達(dá)與對(duì)照組比較則有顯著性差異(P<0.01)。TLR4陽(yáng)性表達(dá)在不同肝內(nèi)血管病變級(jí)別組組間比較有顯著性差異(x2=92.7,P<0.01)。TLR4在肝組織內(nèi)大部分呈彌漫性表達(dá),以肝細(xì)胞表達(dá)為主(圖2),部分血管內(nèi)皮細(xì)胞(圖3)、Kupffer細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞也有表達(dá)。匯管區(qū)基本無表達(dá),在壞死區(qū)域的肝細(xì)胞漿內(nèi)TLR4陽(yáng)性表達(dá)明顯增強(qiáng)(圖4)。TLR4主要表達(dá)在胞膜上及部分胞漿內(nèi),細(xì)胞核無表達(dá)。Kendall's tau-b等級(jí)相關(guān)分析提示:肝組織TLR4陽(yáng)性表達(dá)與肝內(nèi)血管病變分級(jí)呈正相關(guān)(r=0.728,P<0.01)。

    表3 慢性乙型肝炎患者肝組織TLR4的表達(dá)

    圖1 對(duì)照組肝組織陰性表達(dá)(SABC,×100)

    圖2 TLR4在肝內(nèi)血管病變3級(jí)肝組織胞膜及胞漿陽(yáng)性表達(dá)(SABC,×100)

    三、血清LPS水平與肝組織TLR4陽(yáng)性表達(dá)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)分析顯示血清LPS水平與肝組織TLR4陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.895,P<0.01)。

    討論

    內(nèi)毒素血癥在慢性肝病時(shí)較常見[6]。以往關(guān)于內(nèi)毒素血癥在慢性肝病炎癥、纖維化方面研究較多,但內(nèi)毒素在慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變中的作用研究較少。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,除肝內(nèi)血管病變1級(jí)組以外,肝內(nèi)血管病變2級(jí)組和3級(jí)組血清LPS水平與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.01),且血清LPS水平依次為慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變3級(jí)>2級(jí)>1級(jí),從而進(jìn)一步證實(shí)慢性乙型肝炎患者存在不同程度的內(nèi)毒素血癥,尤以肝內(nèi)血管病變3級(jí)慢性乙型肝炎最嚴(yán)重。

    慢性乙型肝炎患者內(nèi)毒素血癥的原因可能為:(1)慢性肝炎時(shí)由于肝壞死、細(xì)胞崩解碎片以及循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)等使肝巨噬細(xì)胞(即Kupffer細(xì)胞)功能遭到封閉,同時(shí)又由于血清纖維連接蛋白的缺乏,Kupffer細(xì)胞吞噬功能受到抑制,從而導(dǎo)致腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生[7]。(2)研究還發(fā)現(xiàn)[8]慢性肝炎肝內(nèi)血管炎癥、增生與肝組織病理學(xué)呈正相關(guān),有可能互為因果關(guān)系。因此肝內(nèi)血管病變較重時(shí)肝組織病理學(xué)改變亦較嚴(yán)重,甚至已到達(dá)肝硬化。肝硬化患者腸腔內(nèi)微生態(tài)環(huán)境遭到破壞,腸道菌群嚴(yán)重紊亂,腸蠕動(dòng)減慢、延遲、微絨毛損害降低了腸道清除內(nèi)毒素的能力;此外,內(nèi)毒素主要經(jīng)肝臟解毒,而肝硬化肝功能受損、門體循環(huán)短路和/或內(nèi)毒素經(jīng)腹腔淋巴系統(tǒng)由胸導(dǎo)管進(jìn)入體循環(huán),逃逸肝臟中的Kupffer細(xì)胞對(duì)它的吞噬與清除[9]。(3)肝硬化時(shí)外周血中內(nèi)毒素滅活功能減弱,且患者內(nèi)毒素結(jié)合能力顯著下降,進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)毒素對(duì)患者的毒性作用增加[10]。

    TLR4是LPS的受體或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子,在介導(dǎo)LPS的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中具有重要作用[11]。機(jī)體多種細(xì)胞如單核細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞表面均能表達(dá)TLR4[12]。體外研究[13]發(fā)現(xiàn)LPS能明顯上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞TLR4表達(dá),并呈一定的劑量依賴性。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,慢性乙型肝炎肝組織TLR4表達(dá)與血清LPS水平呈正相關(guān),血清高LPS水平患者肝組織TLR4表達(dá)更強(qiáng),故認(rèn)為L(zhǎng)PS主要是通過上調(diào)TLR4參與了慢性乙型病毒性肝炎發(fā)病過程的免疫反應(yīng)、肝細(xì)胞及肝內(nèi)血管損傷,與以往的急性肝損傷研究[14]一致。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示,TLR4在正常肝組織中基本不表達(dá)或僅有輕度表達(dá),在肝內(nèi)血管病變1、2、3級(jí)慢性乙型肝炎肝組織TLR4的陽(yáng)性表達(dá)明顯增加,而且TLR4陽(yáng)性表達(dá)與肝內(nèi)血管病變級(jí)別呈正相關(guān),提示TLR4在慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變中發(fā)揮著重要作用。TLR4除表達(dá)于肝細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞外,還可表達(dá)于Kupffer細(xì)胞,提示LPS不僅可以直接損傷肝細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞,還能激活Kupffer細(xì)胞而損傷肝組織。

    LPS損傷肝內(nèi)血管內(nèi)皮的機(jī)制可能為:LPS直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞可迅速引起細(xì)胞骨架蛋白的解聚和重組,細(xì)胞與細(xì)胞間和細(xì)胞與基底膜間的粘附連接松解,細(xì)胞間縫隙形成,微血管通透性升高,血漿外滲和血流淤滯[15]。內(nèi)毒素?fù)p傷血管內(nèi)皮后還可促進(jìn)血液凝固,導(dǎo)致肝微循環(huán)障礙而致肝組織缺血、缺氧,肝組織缺血、缺氧又引發(fā)大量氧自由基的形成,造成肝組織的脂質(zhì)過氧化損傷,如此導(dǎo)致惡性循環(huán),不斷加重肝損傷[16]。LPS還可激活單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞,通過一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)誘導(dǎo)庫(kù)普弗細(xì)胞釋放多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì),如TNF-α、NO、脂質(zhì)介質(zhì)、自由基、內(nèi)皮素等,其中TNF-α發(fā)揮著關(guān)鍵與核心作用,是其他細(xì)胞激活的始動(dòng)因子,可與LPS共同作用于肝臟血管內(nèi)皮細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞[17]。

    綜上所述,LPS及其受體在慢性乙型肝炎肝內(nèi)血管病變中起著重要的作用,血清LPS水平可作為判斷肝內(nèi)血管病變程度的指標(biāo)之一。深入探討內(nèi)毒素?fù)p傷肝內(nèi)血管內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)制,研究調(diào)節(jié)或干擾TLR4信號(hào)途徑以保護(hù)和修復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞功能,對(duì)于改善慢性乙型肝炎的預(yù)后有著積極的意義。

    [1]嚴(yán)家春,陳文筆,馬勇等.轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子1與乙型肝炎肝血管病變的關(guān)系. 世界華人消化雜志,2001,9(7):751.

    [2]韓德五.腸源性內(nèi)毒素血癥是肝炎、肝病的危險(xiǎn)因素.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2006,37(1):1-4.

    [3]于海霞,邢樺云,韓德五.腸源性內(nèi)毒素血癥與肝星形細(xì)胞在肝纖維化中的作用.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2009,40(1):26-29.

    [4]嚴(yán)家春,劉建虎,馬勇.1052例肝炎肝內(nèi)血管病變的形態(tài)觀察. 中華肝臟病雜志,1995,3(3):155-157.

    [5]郭云蔚,尉秀清,李永偉,等.Toll樣受體4在乙型肝炎組織及細(xì)胞株HepG2/HepG2.2.15內(nèi)的表達(dá)特征.中山大學(xué)學(xué)報(bào),2007,28(3):284-287.

    [6]姚國(guó)相,沈忠義,薛新波,等.CCl4致肝硬變門靜脈高壓大鼠腸黏膜通透性的變化.世界華人消化雜志,2005,13(13):1606-1608.

    [7]段美麗,王彥軍,韓德五.急性肝衰竭時(shí)腸粘膜屏障損傷的研究. 中國(guó)病理生理雜志,1999,15(10):906-908.

    [8]劉健虎,嚴(yán)家春,馬勇.慢性乙型肝炎肝組織內(nèi)血管病變與肝組織病理學(xué)相關(guān)性研究. 東南國(guó)防醫(yī)藥,2003,5(1):7-9.

    [9]鄭瑞丹.肝硬化并發(fā)腸源性內(nèi)毒素血癥與微生態(tài)療法.實(shí)用肝臟病雜志,2005,8(3):174-175.

    [10]范東旭,楊婷,王躍生,等.肝硬化病人血清內(nèi)毒素水平與Child-Pugh 分級(jí)的關(guān)系. 黑龍江醫(yī)學(xué)科學(xué),2005,28(2):30-31.

    [11]龔小衛(wèi),姜勇.TLR4在哺乳動(dòng)物對(duì)脂多糖反應(yīng)中的作用.生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2001,28(3):299~303.

    [12]Kokkinopoulos I,Jordan WJ,Ritter MA.Toll-like receptor mRNA expression patterns in human dendritic cells and monocytes.Mol Immunol,2005,42(8):957-968.

    [13]楊清武,朱佩芳,王正國(guó),等.Toll樣受體4介導(dǎo)內(nèi)毒素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞 NF-κB 的激活. 生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,2002,29(3):407-410.

    [14]姚景宏,賀永文,揭盛華.庫(kù)普弗細(xì)胞對(duì)急性肝衰竭模型鼠Toll樣受體 4 表達(dá)的影響. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(3):345-348.

    [15]楊鏞.內(nèi)毒素-血管內(nèi)皮細(xì)胞病理變化過程中的特征性產(chǎn)物在感染發(fā)病機(jī)制中的作用及其意義.云南醫(yī)藥,2001,22(2):150-154.

    [16]吳達(dá)軍,劉俊.慢性乙型病毒性肝炎患者血漿內(nèi)毒素、白介素-6和白介素-8水平的研究.臨床消化病雜志,2007,19(5):309-311.

    [17]Stark ME,Bauer AJ,Sarr MG,et al.Nitric oxide mediates inhibitory never input in human and canine jejunum.Gastroenterology,1993,104(2):398-409.

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