馬錢子幾種炮制品質(zhì)量控制研究

王 靜，鄧富文，蔣艷婷，張誼柱，段釵鳳

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

馬錢子又稱番木鱉（拉丁名Semen strychni），是常用的大毒中藥。其中的主成分士的寧和馬錢子堿是中樞神經(jīng)驚厥劑，能引起中樞和脊椎神經(jīng)的強(qiáng)烈興奮和驚厥。國內(nèi)外學(xué)者研究證明馬錢子堿具有顯著的鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮等作用，藥理和臨床應(yīng)用價值十分突出〔1〕。由于馬錢子堿的箭毒樣作用為一種神經(jīng)毒，會使神經(jīng)節(jié)阻斷，引起呼吸麻痹等〔2〕，具有一定的驚厥作用和明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰作用，因此，在馬錢子及其制劑的質(zhì)量控制中馬錢子堿的含量不應(yīng)忽視。2010版《中國藥典》對馬錢子堿的含量做了明確規(guī)定，要求不得少于0.80%。本文通過對幾種馬錢子炮制品的馬錢子堿的含量測定，意在建立馬錢子堿的紫外分光光度快速分析法及對馬錢子的幾種炮制方法進(jìn)行篩選。

1 儀器和試劑

1.1 儀器 TU-1901雙光束紫外-可見風(fēng)光光度計（北京普析通用儀器有限公司）；梅特勒電子天平AE240（梅特勒儀器有限公司）；DZKW-4電子很穩(wěn)水浴鍋（上?？莆鰧嶒瀮x器廠）；超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器公司）；中藥粉碎機(jī)FY-135（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑 馬錢子堿對照品（成都曼斯特生物科技有限公司，批號：MUST-10072602），氯仿、濃鹽酸和濃氨水均為分析純，馬錢子買自四川廣安康平藥城（經(jīng)大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥教研室楊月娥老師鑒定）。

2 實驗方法和結(jié)果

2.1 對照品溶液的配制 精密稱取馬錢子堿標(biāo)準(zhǔn)品11 mg，用0.1 mol/L的鹽酸（下稱溶劑）溶解并定容于50 mL容量瓶中，搖勻。精密吸取此溶液5 mL置50 mL容量瓶中，用溶劑稀釋并定容，搖勻。得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2 吸收光譜及測定波長的確定 取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL于10 mL容量瓶中用溶劑定容，搖勻。用紫外分光光度計繪制馬錢子堿的吸收光譜見。馬錢子堿的最大吸收峰為262.6 nm。經(jīng)掃描，馬錢子對照品和樣品吸收波長一致。

2.3 樣品溶液的制備 取4份馬錢子各100 g，分別用油炸〔3〕、沙炒〔4〕、甘草炙〔5〕、醋炙〔5〕對馬錢子進(jìn)行炮制，并將其粉碎過20目篩，準(zhǔn)確稱取過篩后的粉末0.5 g于100 mL具塞三角燒瓶中加20 mL氯仿，用氨水調(diào)pH至10，浸泡24 h。過濾，用5 mL氯仿洗滌濾渣，共洗3次，合并濾液。于50℃的水浴揮干氯仿，再加溶液并定容至100 mL容量瓶中，取此溶液2 mL于10 mL容量瓶用溶液定容。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取馬錢子堿的對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL， 加溶劑定容至10 mL容量瓶中，在波長262.6 nm處分別測定其吸收值（ 見表1），計算ΔA值。 以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，對照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明，馬錢子堿的濃度在2.2～13.2 mg/mL測定波長范圍與ΔA值線性關(guān)系良好?；貧w方程為ΔA=927.29C+0.0851（ r=0.9995），見圖1。

表1 樣品測定（n=3）

圖1 馬錢子堿標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 穩(wěn)定性試驗 取2.3項下的溶液，以溶劑為空白，每隔20 min測定1次吸光度，結(jié)果表明在60 min內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定。油炸馬錢子RSD=0.3%（n=4），沙炒馬錢子RSD=0.26%（n=4），甘草炙馬錢子RSD=0.52%（ n=4），醋炙馬錢子RSD=0.26%（ n=4），生馬錢子RSD=0.12%（ n=4）。

2.6 精密度試驗 同一樣品液在262.6 nm波長處連續(xù)測定6次，在262.6 nm處測其吸光度，測得吸光度的RSD=0.058%（ n=6）。

2.7 重復(fù)性試驗 精密稱取油炸馬錢子樣品6份，各約0.5 g，按供試品溶液方法制備，再按2.2項下方法于262.6 nm處測定各樣品的吸光度，其RSD=0.92%，表明該方法的重現(xiàn)性好，結(jié)果可靠。

2.8 加樣回收率的測定 精密稱取過篩后的油炸馬錢子干燥粉末0.25 g三份，分別加入0.24 mg馬錢子堿標(biāo)準(zhǔn)品，按照2.3項下的方法制備樣品液，精密吸取各樣品液2 mL于10 mL容量瓶中定容，搖勻，得樣品液，測定并計算回收率，見表2。

表2 馬錢子堿回收率測定（n=3）

2.9 樣品含量的測定 分別取樣品溶液4份和馬錢子生品1份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定。并計算含量，見表3。

表3 樣品含量測定（n=3）

3 討論

本實驗對馬錢子不同炮制方法炮制前后有效成分（馬錢子堿）的含量分別進(jìn)行測定，采用的炮制方法是傳統(tǒng)的油炸、沙炒、甘草炙、醋炙。在馬錢子進(jìn)行減毒增效、緩和其藥性等方面來篩選出馬錢子的最佳炮制方法。從結(jié)果中可知，不同方法炮制后的馬錢子中的馬錢子堿含量有著顯著的變化，其變化由大到小的排列順序是甘草炙馬錢子、油炸馬錢子、醋炙馬錢子和沙炒馬錢子。因此，在幾種炮制方法中，采用甘草炙法對馬錢子進(jìn)行炮制，效果較好。

此外，若砂炒溫度過高（達(dá)270℃），時間過長（達(dá)4 min），有效成份士的寧含量將大幅下降，嚴(yán)重影響臨床療效，故傳統(tǒng)炮制時應(yīng)嚴(yán)格控制〔6〕。用油炸法和砂炒法炮制馬錢子時溫度要達(dá)到240～250℃〔7〕。馬錢子堿在波長262.6 nm處的吸收峰最大，根據(jù)紫外可見分光光度計的原理來測定馬錢子中馬錢子堿含量的方法是簡便、快速、易行的，適合馬錢子中馬錢子堿的含量測定，以控制馬錢子炮制品的質(zhì)量。

〔1〕徐金華，陳軍，蔡寶昌.馬錢子堿的研究進(jìn)展〔J〕.中國新藥雜志，2009，18（ 3）:213-214.

〔2〕黃喜茹，孫澤東，曹冬，等.馬錢子的質(zhì)量控制方法研究〔J〕.光譜學(xué)與光譜分析，2006，2（ 2）:324-326.

〔3〕崔洪玲，李清.馬錢子的炮制方法探析〔J〕.實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2008，22（ 8）:63.

〔4〕湯淮波，吳萍，胡海，等.改良砂燙法炮制馬錢子的實驗研究〔J〕.中南藥學(xué)，2010，8（ 6）:462-463.

〔5〕李燁，梁華.淺析馬錢子炮制方法〔J〕.中國民族醫(yī)藥雜志，2010（ 4）:31-32.

〔6〕占永良.炮制對馬錢子生物堿含量及毒性的影響分析〔J〕.浙江中醫(yī)雜志，2010，44（ 10）:760-760.

〔7〕龔千峰.中藥炮制學(xué)〔M〕.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2003.