微波提取蒲公英中黃酮類(lèi)化合物的研究

樊友

（沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)石油化工學(xué)院，遼寧遼陽(yáng)111003）

微波提取蒲公英中黃酮類(lèi)化合物的研究

樊友

（沈陽(yáng)工業(yè)大學(xué)石油化工學(xué)院，遼寧遼陽(yáng)111003）

以蒲公英中黃酮類(lèi)化合物提取量為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)微波輔助提取蒲公英中黃酮類(lèi)化合物工藝進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示：微波輔助提取浸泡時(shí)間短，乙醇用量少，節(jié)省時(shí)間。在微波輔助提取較優(yōu)的條件下，黃酮類(lèi)化合物提取量為12.79 mg/g。同時(shí)，對(duì)提取物有效成分進(jìn)行了定性檢測(cè)，結(jié)果表明，蒲公英提取物確實(shí)為黃酮類(lèi)化合物。

蒲公英；黃酮；微波提取

蒲公英又名黃花地丁，系菊科多年生草本植物，為常用中藥材，其營(yíng)養(yǎng)成分極為豐富［1］。蒲公英中的有效成分含有黃酮類(lèi)化合物。黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)存在于自然界的、具有2－苯基色原酮結(jié)構(gòu)的化合物。天然黃酮類(lèi)化合物多以苷類(lèi)形式存在，黃酮苷一般易溶于極性強(qiáng)的溶劑，如水、乙醇、甲醇等中，難溶于或不溶于有機(jī)溶劑中，如苯、氯仿等。隨著蒲公英黃酮在醫(yī)藥品、保健用品等領(lǐng)域中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛［2］，如何更有效地從蒲公英中提取黃酮類(lèi)化合物加以利用是實(shí)現(xiàn)這些應(yīng)用的前提。通常，黃酮類(lèi)化合物可通過(guò)丙酮法、乙醇法、色譜法、酶法等提取方法加以提取。本文以一定濃度的乙醇為提取劑，再結(jié)合微波方法進(jìn)行研究，采用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了提取條件。

1 原料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

蒲公英購(gòu)于遼寧生生堂有限公司。實(shí)驗(yàn)室所購(gòu)進(jìn)的蒲公英原料因長(zhǎng)期暴露于空氣中，含有一定量的水分，并且剛剛購(gòu)進(jìn)的原料中含有少量顆粒型雜質(zhì)，需要在實(shí)驗(yàn)前將雜質(zhì)除去，以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。對(duì)購(gòu)進(jìn)的原料蒲公英首先除去顆粒型雜質(zhì)，再將其放入干燥箱中干燥34 h，于干燥皿中保存待用，確保樣品干燥。蘆?。ㄉ噭嵵堇笾Z），硝酸鋁，亞硝酸鈉，氫氧化鈉，無(wú)水乙醇，濃鹽酸等皆為分析純（國(guó)藥試劑）。

1.2 試驗(yàn)儀器與設(shè)備

UV－2600型紫外分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；BT124S型電子分析天平（賽多利斯科學(xué)儀器公司）；101－3型干燥箱（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；GL20G型離心機(jī)；自改裝的格蘭仕P80D23N1P－G5微波爐（格蘭仕集團(tuán)），微波頻率為2450 MHZ。

1.3 蒲公英黃酮類(lèi)化合物的測(cè)定

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作［3］

取含蘆丁每毫升0.2 mL的對(duì)照品溶液，分別吸取該溶液2、4、6、8、10 mL置于50 mL容量瓶中，加水至12 mL，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的亞硝酸鈉溶液2 mL，搖勻，放置6 min。再加入10%的硝酸鋁溶液2 mL，搖勻，放置6 min后加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)4.3%的氫氧化鈉溶液20 mL，加水稀釋至50 mL，放置15 min后，以蒸餾水為空白參比，掃描溶液的紫外吸收光譜圖。

測(cè)定結(jié)果得蘆丁濃度C（g/L）與吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下：A＝0.04695C－0.0557，相關(guān)系數(shù)R2為0.99945。結(jié)果如圖1所示。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

（2）蒲公英黃酮類(lèi)化合物的提取及測(cè)定

實(shí)驗(yàn)過(guò)程分為浸泡，微波抽提，靜止分層，離心分離和測(cè)定。稱(chēng)取一定量的蒲公英，浸泡一段時(shí)間后，放入微波爐內(nèi)，調(diào)整微波功率和作用時(shí)間，用微波法抽提。然后靜止一段時(shí)間至室溫，將液體用離心機(jī)分離，分離后將固體放入烘箱內(nèi)烘干，將液體測(cè)量體積和吸光度。按（1）方法測(cè)紫外光譜，根據(jù)下式計(jì)算黃酮提取量。

式中：C為質(zhì)量濃度（g/L）；V為蒲公英提取液體積（mL）；m為蒲公英原料質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果與討論

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)的考察

單因素實(shí)驗(yàn)分別考察了浸泡時(shí)間、微波輻射時(shí)間、微波功率、固液比對(duì)蒲公英黃酮提取量的影響，結(jié)果如圖2～5所示（提取試劑為30%乙醇溶液）。

圖2 浸泡時(shí)間對(duì)蒲公英黃酮提取量的影響

圖3 微波輻射時(shí)間對(duì)蒲公英黃酮提取量的影響

圖4 微波功率對(duì)蒲公英黃酮提取量的影響

圖5 固液比對(duì)蒲公英黃酮提取量的影響

由圖2看出，隨著浸泡時(shí)間的增加，黃酮的提取量先增加后降低，原因是浸泡時(shí)有黃酮化合物被抽提出來(lái)，但時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，黃酮化合物損失，導(dǎo)致抽提率下降，結(jié)果顯示浸泡時(shí)間有較佳值。圖3顯示，隨著微波輻射時(shí)間的延長(zhǎng)，蒲公英黃酮提取量有所增加，但增加到一定量后，提取率基本達(dá)到了飽和，因此增加的趨勢(shì)減緩。由圖4看出，隨著微波功率的增大，蒲公英黃酮提取量增加，原因可能是在高功率下溫度較高，提取率增加，當(dāng)微波功率達(dá)到1000W時(shí)，黃酮提取量的增加減緩。圖5顯示，隨著固液比的增大，黃酮提取量也增加，固液比增加，提取液與被提取物的有效碰撞率增加，因此提取率增大，當(dāng)達(dá)到1∶30（g：mL）時(shí)，黃酮提取量增加速度減慢。

2.2 正交實(shí)驗(yàn)的考察

在微波提取方法中，蒲公英中黃酮類(lèi)化合物提取率與浸泡時(shí)間、微波功率、固液比、微波作用時(shí)間等因素有關(guān)。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，按微波功率、輻射時(shí)間、浸泡時(shí)間、固液比設(shè)計(jì)正交因素水平表，選擇L9（34）正交表做四因素三水平的正交試驗(yàn)。因素水平見(jiàn)表1，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 正交因素水平表

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

從表2的結(jié)果看出，微波輻射功率是影響蒲公英中黃酮抽提量的最主要因素，微波輻射時(shí)間的影響也是顯著的，浸泡時(shí)間和固液比對(duì)總黃酮抽提量影響比較小，影響大小的順序?yàn)槲⒉üβ剩据椛鋾r(shí)間＞浸泡時(shí)間＞固液比；上述四因素對(duì)黃酮提取量的影響趨勢(shì)與單因素影響一致。較佳的提取條件為A3B3C2D1，即在微波功率1250 w、輻射時(shí)間4 min、浸泡時(shí)間30 min，固液比（g：mL）1∶35為較佳的提取條件，黃酮提取量為12.79 mg/g。

2.3 化學(xué)定性檢測(cè)［3］

鹽酸－鎂還原反應(yīng)可以證明總黃酮的存在。將得到的提取物溶于熱甲醇中，趁熱加鎂粉，再加濃鹽酸后，溶液呈橙黃色，證明有黃酮類(lèi)化合物的存在。

3 結(jié)論

微波條件下，正交試驗(yàn)結(jié)果顯示：微波提取方法較佳操作條件是浸泡時(shí)間30 min、微波功率1250 w、輻射時(shí)間4 min、固液比（g：mL）1∶35、提取劑乙醇濃度30%，在此條件下黃酮提取量為12.79 mg/g。

［1］許丹，侯鳳飛，吳立軍.蒲公英化學(xué)研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2004，12（03）：18－24.

［2］寧堅(jiān)剛，魏永生.蒲公英中黃酮類(lèi)物質(zhì)的提取和含量的測(cè)定［J］.青海大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，22（4）：59－62.

［3］毛跟年，許牡丹.功能食品生理特性與檢測(cè)技術(shù)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：557－558.

10.3969/j.issn.1007-2217.2012.03.005

2012－07-10