HPLC法測(cè)定蒙藥毛浩日查干顆粒劑二苯乙烯苷含量

孟克巴牙爾 韓圖雅

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020;2.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院蒙醫(yī)學(xué)院2009級(jí)碩士研究生，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010059)

本品主要由手掌參、黃精、玉竹、何首烏、廣棗5味藥材組成。具有補(bǔ)腎壯陽、滋補(bǔ)強(qiáng)身，用于腎寒、腎虛、精血不足、筋骨酸痛、年邁體虛等。收載衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙成分冊(cè)［1］。

1 儀器、試劑及樣品

1100型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilentg公司制造);NC－2000色譜工作站(大連中北公司);TG332A型1/10萬光電天平(湘儀制造);AS2060B型超聲清洗儀(上?？茖W(xué)儀器公司制造)。

甲醇、乙腈:色譜純，由美國(guó) Tedai公司生產(chǎn);磷酸、乙醇為分析純;水為三蒸水。二苯乙烯苷由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。毛浩日查干－5顆粒劑由內(nèi)蒙古復(fù)旦蒙耀科技有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 耐用性試驗(yàn)及色譜條件:Agilent XDB－C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非羅門 Kromasil C18柱(200 × 4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈 － 水(24:86)、甲醇 － 水(20:60);流速:1mL·min－1;測(cè)定波長(zhǎng)320nm;柱溫30℃。以上條件均可基線分離樣品中二苯乙烯苷，分離度大于1.2。試驗(yàn)采用用Kromasil C18柱;流動(dòng)相為乙腈－甲醇－水(40:10:150)［2］。

2.2 測(cè)定溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取二苯乙烯苷對(duì)照品適量0.75mg，置10mL量瓶?jī)?nèi)，加甲醇溶解，配制成濃度為0.075mg·mL－1的溶液(棕色量瓶?jī)?nèi)保存)。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品(粉碎，研細(xì)，過100目篩)100mg，精密稱重，置50mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜止，用0.45μm濾膜濾過，即的。

2.2.3 專屬性試驗(yàn):依照樣品制備方法制備不含何首烏的毛浩日查干－5顆粒劑陰性制劑，依照色譜條件測(cè)定，陰性對(duì)照品在二苯乙烯苷保留時(shí)間內(nèi)無干擾峰出現(xiàn)，表明其它藥材對(duì)二苯乙烯苷的測(cè)定無干擾。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)品

圖2 樣品

2.3 線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液1mL置10mL量瓶?jī)?nèi)為A溶液，精密量取A溶液1mL同法稀釋10倍為B溶液。吸取 B 溶液 2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，作回歸分析?；貧w方程:Y=Y=11149927χ －20038，r=0.9999。二苯乙烯苷在 0.0075 ～0.12μ范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定二苯乙烯苷峰面積平均為1256732±8972，二苯乙烯苷峰面積的RSD為0.71%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液10μL，分別于樣品制備后第0、2、4、8h測(cè)定二苯乙烯苷峰面積，二苯乙烯苷峰面積的RSD為0.72%。樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取同批次樣品，按2.2項(xiàng)下的方法制備樣品 5 份。測(cè)定結(jié)果平均 0.65 mg·g－1，RSD 為1.7%

2.7 回收率試驗(yàn):取已知二苯乙烯苷含量的毛浩日查干－5顆粒劑，置10mL容量瓶?jī)?nèi)，分別精密加入二苯乙烯苷對(duì)照品溶液(0.075mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液轉(zhuǎn)入置50mL具塞錐形瓶中，按供試品方法制備，提取，過濾。按色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，平均回收率為99.26%;RSD=1.8%。

表1 毛浩日查干－5顆粒劑二苯乙烯苷回收率測(cè)定

2.8 樣品測(cè)定:分別吸取對(duì)照品溶液與樣品溶液10μL，依上述色譜條件測(cè)定5批樣品二苯乙烯苷含量，測(cè)定結(jié)果分別為 0.65、0.56、0.74、0.48、0.83 mg·g－1，二苯乙烯苷平均含量分別為0.65mg·g－1(n=3)，樣品中二苯乙烯苷含量在 0.48 ～0.83mg·g－1之間，批次之間含量差異較大。

3 討論

本試驗(yàn)對(duì)樣品溶液制備方法進(jìn)行系統(tǒng)性研究。分別考察超聲、回流、浸泡提取方法，超聲處理方法操作簡(jiǎn)便、省時(shí)，更可取。對(duì)乙醇、甲醇、乙腈提取溶劑考察，三者對(duì)二苯乙烯苷溶出率并無明顯差異;本文采用甲醇提取。提取時(shí)間測(cè)定，樣品超聲處理30min后二苯乙烯苷含量不再增加。

對(duì)流動(dòng)相考察表明，乙腈－水(24:86)、甲醇－水(20:60)均可基線分離樣品中二苯乙烯苷，分離度大于1.2，但分離度變異較大。采用乙腈－甲醇－水(40:10:150)分離效果更為理想。色譜柱適用性研究表明，Agilent XDB－C8柱 (150 ×4.6 mm，5μm)、非羅門 Kromasil C18柱(200 ×4.6 mm，5μm)均可適用本試驗(yàn)測(cè)定，本文采用非羅門Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)。測(cè)定結(jié)果表明，5批樣品中二苯乙烯苷含量差異較大，可能與顆粒劑制備有關(guān)。采用HPLC法測(cè)定毛浩日查干－5顆粒劑指標(biāo)性成分，可作為該藥質(zhì)量控制的方法之一。該方法重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、可靠。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)蒙藥分冊(cè)［S］.1998，127

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.一部.中國(guó)醫(yī)藥出版社，2010，164