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    通便玉蓉丸治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥的實(shí)驗(yàn)研究*

    2012-09-06 10:56:46閆曙光周永學(xué)成都中醫(yī)藥大學(xué)成都610075
    陜西中醫(yī) 2012年1期
    關(guān)鍵詞:東寶酒精性小劑量

    閆曙光 周永學(xué) 惠 毅 成都中醫(yī)藥大學(xué)(成都 610075)

    脂肪肝是由多種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積和脂肪變性為特征的病理狀態(tài)。近年來(lái)脂肪肝的發(fā)病主要與肥胖的高發(fā)密切相關(guān),肥胖與脂肪肝的關(guān)系比飲酒與脂肪肝的關(guān)系更為密切[1]。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)肥胖導(dǎo)致的脂肪肝60%都是由營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩引起的[2]。目前對(duì)非酒精性脂肪肝的治療以合理飲食和增加體力運(yùn)動(dòng)為主的生活方式的干預(yù)較為有效,但依從性不夠。臨床上尚缺乏較滿意的抗脂肪肝藥,已報(bào)道的考來(lái)烯胺、煙酸肌醇酯、苯扎貝特、吉非羅齊等藥物雖然可以從不同環(huán)節(jié)抑制脂肪肝,但不良反應(yīng)多、療程長(zhǎng),故臨床應(yīng)用受到限制。我們?cè)谂R床應(yīng)用通便玉蓉丸治療便秘的同時(shí),發(fā)現(xiàn)該藥治療非酒精性脂肪肝以及高脂血癥療效顯著,為了進(jìn)一步驗(yàn)證其治療作用,我們對(duì)該藥治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。

    1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠66只,體重80~120g清潔級(jí),由西安交大醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物的飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)在陜西中醫(yī)學(xué)院清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。

    1.2 儀器 低溫冰箱:日本三洋公司;低溫4℃離心機(jī):上海第三儀器廠;LD-10001型電子天平:沈陽(yáng)龍騰電子稱(chēng)量?jī)x器有限公司;721分光光度計(jì):上海第三儀器廠;奧林巴斯顯微鏡(Imager A1Zeiss)。OET-200半自動(dòng)生化分析儀:北京尚精光電技術(shù)有限公司。

    1.3 藥物 通便玉蓉丸:陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠制備,批號(hào):20101001,通便玉蓉丸每克含生藥1.977g,用時(shí)將藥粉與蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。東寶肝泰:通化東寶藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn),批號(hào):100114,用時(shí)將藥片研磨后用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液。

    1.4 試劑和試劑盒 游離脂肪酸(FFA)、超氧化物歧化酶(SOD)蛋白測(cè)定試劑盒購(gòu)于南京建成生物醫(yī)學(xué)工程研究所;總膽固醇(TC)試劑盒:上海榮盛生物技術(shù)有限公司;甘油三脂(TG)試劑盒:溫州津瑪生物科技有限公司;膽固醇:湖南祁東縣同信生化廠;10%水合氯醛:陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑研究中心。

    2 方 法 2.1 動(dòng)物模型的建立和給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,隨機(jī)分為正常組、模型組、東寶肝泰組、通便玉蓉丸大、中、小劑量組,每組10只。正常組普通飼料喂養(yǎng),余高脂飼料喂養(yǎng),配方根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[3]進(jìn)行改進(jìn)(普通飼料77%、膽固醇1%、豬油20%、花生5%、奶粉5%、白糖2%),喂養(yǎng)16周后,每組隨機(jī)抽取1只,取肝臟,可見(jiàn)大鼠肝臟體積增大,呈淡黃色,觸之有油膩感。鏡下見(jiàn)肝細(xì)胞腫大變圓,胞漿疏松,內(nèi)含大的脂肪滴,將細(xì)胞核擠壓向胞膜,確定造模成功(見(jiàn)圖2)。開(kāi)始灌胃給藥,正常組:生理鹽水10mL/kg/d,模型組:生理鹽水10mL/kg/d,大劑量組:通便玉蓉丸混懸液3.67g/kg/d,中劑量組:1.83g/kg/d,小劑量組:0.915g/kg/d,東寶肝泰組:東寶肝泰混懸液0.45g/kg/d,給藥30d。給藥期間除正常對(duì)照組外,其余各組繼續(xù)給予高脂飲食,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

    2.2 樣本的采集與檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食12h,10%水合氯醛麻醉,心臟采血,4000轉(zhuǎn)/分離心15min清液,檢測(cè)血清TG、TC、FFA含量。取肝臟,稱(chēng)重后計(jì)算肝指數(shù)。肝組織制成10%的組織勻漿,測(cè)勻漿TC、TG、SOD,取部分肝組織4%甲醛固定。做病理切片行病理組織學(xué)檢查。

    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0處理數(shù)據(jù),計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示。

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 3.1 一般情況 各組高脂飲食喂養(yǎng)大鼠10周后反應(yīng)較正常組遲鈍,毛色發(fā)黃,失去光澤,喜扎堆,懶動(dòng)且攝食量逐漸減少。灌胃給藥后通便玉蓉丸大、中、小劑量組在灌胃兩天后均出現(xiàn)不同程度的稀便,其中以大劑量組最為明顯,約3周后稀便逐漸消失,但便質(zhì)軟,含水量增多。

    3.2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠血清膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸的變化 表1顯示:模型組與正常組比較血清甘油三脂、膽固醇和游離脂肪酸濃度升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),符合高脂血癥的發(fā)病特點(diǎn)。各給藥組與模型組比較,通便玉蓉丸大、中劑量組能降低血清TG、TC和FFA水平且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05,通便玉蓉丸小劑量組能降低血清TC、FFA水平且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。通便玉蓉丸大、中劑量組的降血脂作用最強(qiáng)。東寶肝泰對(duì)血清TG、TC和FFA的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    表1 對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠血清膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸含量的影響

    3.3 各組大鼠肝組織勻漿甘油三酯、膽固醇、超氧化物歧化酶的變化 表2表明:模型組大鼠肝臟勻漿TG、TC含量明顯高于正常組,超氧化物歧化酶水平低于正常組,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),符合非酒精性脂肪肝的特點(diǎn)。與模型組比較,通便玉蓉丸大、中劑量以及東寶肝泰均能明顯降低肝組織內(nèi)TG、TC水平且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),通便玉蓉丸小劑量則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。通便玉蓉丸大劑量及東寶肝泰能顯著增加肝組織內(nèi)SOD活性(P<0.05),通便玉蓉丸中、小劑量則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與東寶肝泰組比較,通便玉蓉丸大、中劑量能更有效降低肝內(nèi)TG、TC含量且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。通便玉蓉丸大劑量組升高肝內(nèi)SOD活性的作用于東寶肝泰組相當(dāng)(P>0.05)。

    表2 對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝組織勻漿甘油三脂、膽固醇、超氧化物歧化酶含量的影響

    圖1

    圖2

    圖3

    圖4

    圖5

    圖6

    3.4 各組大鼠給藥前后體重以及肝指數(shù)變化 表3表明,各組大鼠在治療前體重均明顯高于正常組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),符合肥胖特征。灌胃給藥后與模型組相比,通便玉蓉丸大、中劑量體重明顯降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),通便玉蓉丸大、中、小劑量組,東寶肝泰肝指數(shù)明顯降低且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與東寶肝泰組比較,通便玉蓉丸大劑量體重明顯降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);通便玉蓉丸大、中劑量肝指數(shù)降低顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表3 治療前后體重以及肝指數(shù)的變化

    3.5 肝組織病理學(xué)變化 3.5.1 大體形態(tài)觀察:正常組大鼠肝臟顏色鮮紅,質(zhì)地柔軟,富有彈性;模型組大鼠肝臟體積明顯增大,呈黃褐色,觸之有油膩感,邊緣飽滿,質(zhì)地稍韌。

    3.5.2 肝臟組織HE染色觀察:正常大鼠肝細(xì)胞無(wú)脂肪變性,肝索排列整齊,肝竇清晰(圖1);模型組肝細(xì)胞發(fā)生程度不等脂肪變性,肝細(xì)胞腫大變圓,胞漿疏松,內(nèi)含大的脂肪滴,將細(xì)胞核擠壓向胞膜,肝索排列混亂,肝竇受壓變形(圖2);通便玉蓉丸大劑量組(圖3),中劑量組(圖4)肝臟未見(jiàn)脂變細(xì)胞,可見(jiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。通便玉蓉丸小劑量組(圖5)以及東寶肝泰組(圖6)可見(jiàn)大量脂變肝細(xì)胞以及炎細(xì)胞。

    4 討 論 通便玉蓉丸是周永學(xué)教授臨床治療腎虛精虧型便秘常用方,由肉蓯蓉、當(dāng)歸、芒硝等中藥組成,具有滋補(bǔ)腎精,軟堅(jiān)散結(jié),滋陰潤(rùn)腸、運(yùn)下通便的功效。目前對(duì)非酒精性脂肪肝的中醫(yī)藥治療以從肝脾論治為主[4-6],通便玉蓉丸則體現(xiàn)了從腎論治非酒精性脂肪肝的思想。通便玉蓉丸所治的非酒精性脂肪肝及高脂血癥患者多表現(xiàn)為腎精虧虛,腎精不足則腎陰、腎陽(yáng)的功能不能正常發(fā)揮,腎陰不足,則水不涵木,肝的疏泄功能失常;腎陽(yáng)不足則血液運(yùn)行的原動(dòng)力不足,腎陽(yáng)不能溫煦脾陽(yáng)則脾不能正常運(yùn)化水濕痰濁,進(jìn)而導(dǎo)致脂肪肝以及高脂血癥等脂代謝紊亂性疾病。通便玉蓉丸能滋補(bǔ)腎精,有助于腎陰、腎陽(yáng)功能的發(fā)揮,方中當(dāng)歸活血潤(rùn)腸、芒硝通便瀉下,促進(jìn)了水濕痰濁的轉(zhuǎn)運(yùn),從而起到影響脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運(yùn),對(duì)非酒精性脂肪肝以及高脂血癥起到治療作用。實(shí)驗(yàn)研究證明該藥能降低脂肪肝大鼠肝組織內(nèi)的甘油三脂和膽固醇含量,升高因脂肪肝而降低的組織內(nèi)SOD水平,而起到保護(hù)肝細(xì)胞的作用,SOD在機(jī)體的氧化和抗氧化平衡中起到了極為關(guān)鍵的作用,能清除超氧離子自由基,保護(hù)細(xì)胞免受損傷[7]。通便玉蓉丸能能降低高脂血癥大鼠血清甘油三脂、膽固醇和游離脂肪酸水平,起到治療高脂血癥的作用,且能有效降低肥胖大鼠體重,王歡[8]等通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)該藥能有效降低便秘小鼠的體重的作用。高脂血是動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓、糖尿病等高發(fā)疾病的主要誘發(fā)因素,因此本藥物通過(guò)治療高脂血癥對(duì)該類(lèi)疾病又有一定的預(yù)防作用。本實(shí)驗(yàn)從探索的角度初步驗(yàn)證了通便玉蓉丸對(duì)非酒精性脂肪肝以及高脂血癥的治療作用,其具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

    [1]范建高.非酒精性脂肪性肝病的流行率[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志,2006,9(29):9.

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    [3]張玉峰,陳文惠.非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型造模方法的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2002,12(2):123-125.

    [4]李合國(guó).國(guó)醫(yī)大師李振華教授從脾論治非酒精性脂肪肝經(jīng)驗(yàn)[J].中醫(yī)研究,2011,24(7):62-63.

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