復(fù)方蛹蟲草制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性慢性疲勞綜合征的影響

張潤(rùn)桐 寧 青

江蘇省中醫(yī)藥研究院中藥新型給藥系統(tǒng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210028

慢性疲勞綜合征患者常常存在免疫功能低下，并伴有抑郁癥和焦慮癥。因此，本研究采用強(qiáng)制束縛和電脈沖刺激模擬慢性疲勞模型，觀察自擬經(jīng)驗(yàn)方復(fù)方蛹蟲草制劑對(duì)模型大鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)釋放的調(diào)節(jié)作用以及對(duì)淋巴細(xì)胞凋亡的影響。

1 材料

藥物 復(fù)方蛹蟲草制劑 (YCC)由蛹蟲草、熟地黃、枸杞子、黨參、大棗組成，均購(gòu)自亳州市聯(lián)華醫(yī)藥有限公司。將處方量藥材投料，水煎煮2次，每次1.5小時(shí)，過濾，合并濾液，常壓濃縮，得浸膏，加純化水混勻后灌胃給藥。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和儀器 SPF級(jí)健康雄性SD大鼠，體質(zhì)量180～200g，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。主要儀器：XMTW-4100游泳箱 (北京碩林苑科技有限公司)、電針儀(6805-Ⅲ型，福建省醫(yī)療器械廠生產(chǎn))。

2 方法

2.1 劑量與分組 給藥劑量分別為0.6、1.1、3.4g/kg分為低、中、高3個(gè)劑量組 (相當(dāng)于人體推薦攝入量的5倍、10倍、30倍)。灌胃給藥每天一次，共30d。

2.2 慢性疲勞綜合癥 (CFS)的造模 對(duì)模型組和復(fù)方蛹蟲草高中低劑量組實(shí)施造模。每天電擊，用波寬2ms的電脈沖，1mA電流強(qiáng)度，時(shí)間間隔15s，每天16次電擊。束縛和冷水游泳隔日交替進(jìn)行：將大鼠放進(jìn)自制的行為束縛筒內(nèi)，束縛2h/次;冷水游泳，水溫22℃，時(shí)間5min［1-2］。

2.3 腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的檢測(cè) 各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物末次給藥1h后進(jìn)行強(qiáng)行剌激，立即斷頭處死，迅速取出動(dòng)物全腦，去除小腦后將腦組織稱重。去甲腎上腺素 (NE)，多巴胺 (DA)，5-羥色胺 (5-HT)，5-吲哚乙酸 (5-HIAA)試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供［3-4］。

2.4 淋巴細(xì)胞凋亡率的檢測(cè) 大鼠腹腔麻醉后一次采全血5 ml備用。加入Annexin V-FITC和PI，混勻后冰浴避光放置15 min，隨即進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)早期凋亡、晚期凋亡和凋亡細(xì)胞總數(shù)目［5］。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行方差分析。

3 結(jié)果

3.1 YCC對(duì)CFS大鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響 與正常組比較，模型組腦組織中NE，DA，5-HT含量明顯降低 (P＜0.01)。YCC高劑量組NE，DA，5-HT含量明顯升高 (P＜0.01)。結(jié)果見表1。

3.2 YCC對(duì)CFS大鼠模型外周血淋巴細(xì)胞細(xì)胞凋亡的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組早期凋亡晚期凋亡指數(shù)顯著高于正常組 (P＜0.01);YCC組大鼠早期凋亡晚期凋亡指數(shù)顯著高于模型組 (P＜0.01)。見表2。

表1 YCC對(duì)大鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響 (n=12，±S)

表1 YCC對(duì)大鼠腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響 (n=12，±S)

* 表示與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)

組別 劑量g生藥/(d·kg體重)NE DA 5-HT 322.5 ±41.6 511.2 ±60.5 724.3 ±60.1模型組 - 276.6 ±36.7 372.4 ±46.2 671.3 ±40.8低劑量組 0.6 321.2 ±62.3 456.5 ±78.2 697.2 ±76.2中劑量組 1.1 334.6 ±62.3 487.4 ±79.4 711.4 ±47.2高劑量組 3.4 356.2 ±77.3*500.5 ±69.1*756.2 ±44.8正常組 生理鹽水*

表2 各組大鼠淋巴細(xì)胞凋亡指數(shù)的比較 (n=12，±S)

表2 各組大鼠淋巴細(xì)胞凋亡指數(shù)的比較 (n=12，±S)

* 表示與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)

組別 劑量g生藥/(d·kg體重)早期凋亡指數(shù)晚期凋亡指數(shù) 總凋亡指數(shù)2.44 ±0.23 0.223 ±0.077 2.61 ±0.55模型組 - 4.36 ±1.15 0.421 ±0.163 4.83 ±1.65低劑量組 0.6 3.98 ±1.17 0.367 ±0.115 4.41 ±1.46中劑量組 1.1 3.43 ±1.25 0.325 ±0.114 3.95 ±1.12高劑量組 3.4 2.91 ±0.97*0.298 ±0.124*3.83 ±0.87*正常組 生理鹽水

4 討論

結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)篩選出治療CFS的中藥小復(fù)方——復(fù)方蛹蟲草制劑，該方以蛹蟲草健脾益氣為君藥，黨參更助補(bǔ)氣之用為臣藥，佐以熟地黃等養(yǎng)血和血、寧心安神藥物，用于治療脾氣虛引起的CFS。CFS的造模導(dǎo)致外周血淋巴細(xì)胞凋亡細(xì)胞百分率提高，原來凋亡和新生成淋巴細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡遭到CFS造模過程的破壞。慢性疲勞加速外周血淋巴細(xì)胞凋亡，YCC可以顯著逆轉(zhuǎn)這一破壞，但其對(duì)機(jī)體免疫功能的影響有待于更深入的研究。并且YCC能明顯改善慢性疲勞，提高大鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量;但對(duì)疲勞綜合征確切的病理生理機(jī)制以及臨床參數(shù)相對(duì)穩(wěn)定的理想觀測(cè)指標(biāo)，仍有待于進(jìn)一步的探討與研究。

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