抗瘤免疫力提升律AX與腫瘤治療的相關(guān)性研究*

張啟明 于愛平 曲愛兵

國(guó)內(nèi)外的理論和實(shí)踐都證明，手術(shù)、化療、放療、中醫(yī)、干細(xì)胞移植等外源療法在治療腫瘤中不可避免地要損傷部分正常細(xì)胞，同時(shí)還殘留腫瘤的微小殘留病變(Minimal residual disease，MRD)；一直以來在臨床上也缺少治療腫瘤治療的基本理論和經(jīng)驗(yàn)。因此，筆者對(duì)昆明鼠做了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，獲得了特異性抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)提升律AX，并對(duì)其在臨床中的應(yīng)用情況進(jìn)行了總結(jié)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)——提出抗瘤免疫力提升律AX

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 昆明鼠18～22 g，來源：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)二院動(dòng)物室。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有遼寧省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證書，遼實(shí)字520號(hào)(95)。S180細(xì)胞株。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 用S180活瘤細(xì)胞腹腔免疫，每?jī)芍芤淮?。?duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行分組，4～11只鼠為一組。每組免疫劑量逐次提升，或幾何級(jí)數(shù)免疫劑量提升。上百組分組海選。觀察小白鼠癌性腹水生長(zhǎng)情況及生存、死亡情況，篩選出全組鼠存活組，依據(jù)全存活組最高提升活瘤細(xì)胞數(shù)，畫出散點(diǎn)曲線圖，用生物數(shù)學(xué)單變量曲線回歸法，曲線直線化[1]。取曲線上各點(diǎn)的對(duì)數(shù)，畫散點(diǎn)圖，近似直線。由最高劑量點(diǎn)(數(shù)量最大，誤差最小)，向0點(diǎn)引一直線?？梢姼鲗?shí)驗(yàn)點(diǎn)的對(duì)數(shù)點(diǎn)，均在直線上下，距直線很近。證明直線上各點(diǎn)為實(shí)驗(yàn)點(diǎn)對(duì)數(shù)的平均點(diǎn)。以此去實(shí)驗(yàn)誤差，取直線上各點(diǎn)的對(duì)應(yīng)指數(shù)點(diǎn)，繪成指數(shù)曲線。即抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)提升方程AX曲線。

1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.3.1 抗瘤免疫力提升實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果 活瘤細(xì)胞腹腔免疫力提升是有一定規(guī)律的。活瘤細(xì)胞腹腔免疫高劑量組實(shí)驗(yàn)鼠全組存活，免疫力提升，各小組的最高提升值，相互間近似幾何級(jí)數(shù)提升。最高點(diǎn)達(dá)280 000個(gè)/只。為除去實(shí)驗(yàn)誤差，取各實(shí)驗(yàn)點(diǎn)數(shù)值的對(duì)數(shù)，再實(shí)驗(yàn)曲線直線化(實(shí)驗(yàn)的最高點(diǎn)，數(shù)值最大，誤差最小)，由最高點(diǎn)的對(duì)數(shù)點(diǎn)向座標(biāo)0點(diǎn)引一直線，可見實(shí)驗(yàn)對(duì)數(shù)點(diǎn)在直線兩側(cè)很近，證明抗瘤免疫力提升曲線確為幾何級(jí)數(shù)。取對(duì)數(shù)直線上各點(diǎn)的相應(yīng)指數(shù)點(diǎn)，可連成圓滑的指數(shù)曲線，此即為高劑量組抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)曲線(AX=6X)。詳見表1，圖1、圖2。低劑量系列組，各不同免疫力提升階段的終點(diǎn)活瘤細(xì)胞數(shù)最高值為530個(gè)/只，與高劑量系列組方法相同，取指數(shù)點(diǎn)的對(duì)數(shù)。由最高點(diǎn)向座標(biāo)0點(diǎn)引直線，曲線直線化，去實(shí)驗(yàn)誤差，可見實(shí)驗(yàn)的對(duì)數(shù)點(diǎn)，在對(duì)數(shù)直線兩側(cè)很近。取對(duì)數(shù)直線上各點(diǎn)的指數(shù)點(diǎn)，連成圓滑的指數(shù)曲線，即低劑量系列組的抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)提升曲線。AX=3.5X。實(shí)驗(yàn)證明低劑量系列組與高劑量系列組同樣，均為幾何級(jí)數(shù)提升。其提升速度與終點(diǎn)數(shù)值，決定于初始劑量A和提升次數(shù)X。詳見表2、圖3和圖4。

表1 高免疫劑量組抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)提升數(shù)據(jù)表

圖1 昆明鼠S180活瘤細(xì)胞免疫力幾何級(jí)數(shù)提升值對(duì)數(shù)直線(高系列劑量組)

圖2 高劑量系列組抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)提升曲線(AX)

表2 低免疫劑量系列組抗瘤免疫力幾何級(jí)數(shù)提升數(shù)值表

圖3 低劑量系列組抗瘤免疫力幾何數(shù)數(shù)提升值對(duì)數(shù)直線

圖4 低劑量系列組抗瘤免疫力幾體級(jí)數(shù)提升曲線(AX)

1.3.2 免疫臨界值實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果 昆明鼠S180活瘤細(xì)胞腹腔接種3～5個(gè)/只可以全活。說明18～22 g小白鼠腹腔可以消滅5個(gè)以下的活瘤細(xì)胞，不生腹水，不死亡，不是有一個(gè)活瘤細(xì)胞就長(zhǎng)一個(gè)腫瘤。這是非特異性免疫作用。5個(gè)瘤細(xì)胞是小白鼠非特異性免疫與特異性免疫的交界點(diǎn)，稱為“免疫臨界值”。詳見表3。

表3 免疫臨界值實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表

1.3.3 抗瘤免疫力提升律AX的起點(diǎn)A為免疫臨界值ICV(Immuniti Critical Value)的范圍。抗瘤免疫力提升的高度和速度，決定于初始點(diǎn)A的大小。A在ICV范圍內(nèi)是安全的，但A又可以有一定程度的動(dòng)搖。

1.3.4 抗瘤免疫力提升律AX的終點(diǎn) 抗瘤免疫力提升是有頂點(diǎn)的，昆明鼠S180活瘤細(xì)胞腹腔免疫提升頂點(diǎn)約在500 000～600 000個(gè)活瘤細(xì)胞/只。

1.3.5 死瘤苗的抗瘤免疫力提升律BAX動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必須用活瘤細(xì)胞，才能顯露出抗瘤免疫力殺滅活瘤細(xì)胞的數(shù)量。但人體治療必須用死瘤苗，以保證臨床治療的安全。死瘤苗可能比活瘤苗提高劑量，以提高療效。故可在抗瘤免疫力提升律AX前加一系數(shù)B，為BAX。

1.3.6 死瘤苗腹腔三次增強(qiáng)免疫，可消除小白鼠皮膚小瘤。昆明鼠脅部皮下接種S180活瘤細(xì)胞110 000個(gè)/只，可生皮膚小瘤。該鼠用死瘤細(xì)胞腹腔免疫。其增強(qiáng)幾何級(jí)數(shù)免疫提升律BAX=1.67×30X。即第一次腹腔死瘤細(xì)胞免疫50個(gè)/只；第二次死瘤細(xì)胞腹腔免疫1500個(gè)/只；第三次45 000個(gè)/只死瘤細(xì)胞腹腔免疫后，可將含11萬活瘤細(xì)胞的皮膚小瘤消除。

2 抗瘤免疫力提升律AX的臨床應(yīng)用

2.1 自體死瘤苗的制備 研究動(dòng)物機(jī)體免疫力能殺滅活瘤細(xì)胞的數(shù)量，必須用活瘤細(xì)胞。但是人體臨床應(yīng)用，必須用死瘤細(xì)胞，以保證人體應(yīng)用安全。

腫瘤患者自體死瘤苗制備方法如下，設(shè)立空氣濾過的百級(jí)無菌生物制劑室。無菌條件下，取患者手術(shù)摘除的自體腫瘤標(biāo)本。于超凈工作臺(tái)中，剪成1 mm3小塊。在100目不銹鋼網(wǎng)上，用注射針管芯研磨。80目不銹鋼網(wǎng)過濾。濾液離心。沉渣即腫瘤單細(xì)胞。于0.0125%戊二醛液中過夜，滅活。滅活的腫瘤細(xì)胞離心沉渣，在生理鹽水中浸泡過夜，除戊二醛。腫瘤細(xì)胞離心沉渣，在新生理鹽水中，按劑量分裝安瓶。放冰箱中備用。

2.2 人體“自體治療性腫瘤疫苗”的臨床應(yīng)用 筆者1985年開始承擔(dān)遼寧省科委重點(diǎn)課題，研制“自體腫瘤疫苗”，當(dāng)時(shí)是常規(guī)皮膚免疫接種，未做幾何級(jí)數(shù)免疫力提升。應(yīng)用臨床1000余例。獲省衛(wèi)生廳批準(zhǔn)文號(hào)“遼衛(wèi)藥制字(93)BO21-05號(hào)”及省財(cái)政廳特批的瘤苗發(fā)票。隨訪七年，總結(jié)310例結(jié)腸癌手術(shù)后接種自體死瘤苗療效。五年生存率比單純手術(shù)提高46%。若幾何級(jí)數(shù)免疫力提升，療效可能更好。

2.3 非實(shí)體瘤-血癌(白血病)抗瘤免疫力提升的臨床應(yīng)用 筆者1972-1980年擔(dān)任中國(guó)醫(yī)科大學(xué)一院白血病研究組長(zhǎng)，發(fā)現(xiàn)“低白細(xì)胞振蕩律療法”。建國(guó)后26年該院遵照白細(xì)胞的正常值4000～10 000/mm3，治療時(shí)白細(xì)胞不能低于4000/mm3，統(tǒng)計(jì)106例平均生存期只36.1 d。除1例生存兩年外，其余全部死亡?！暗桶准?xì)胞振蕩律療法”將大部白細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞的白血病患者的白細(xì)胞降至500～1500/mm3，極大降低白血病細(xì)胞對(duì)骨髓的免疫抑制?！敖夥帕恕惫撬璧恼Ｔ錾芰?，骨髓正常細(xì)胞迅速增生，血象正常白細(xì)胞超常升高。增生曲線呈“振蕩律”波型，先高后低，逐漸波動(dòng)降至正常。此療法用當(dāng)時(shí)華北制藥廠生產(chǎn)的正定霉素為主，治療白血病，完全緩解率+部分緩解率為81%。許多患者生存3年；部分患者，病情得到控制長(zhǎng)期生存，生存期最長(zhǎng)者達(dá)37年，至今仍健在。某患者從事農(nóng)業(yè)重體力勞動(dòng)，不用藥，多次血象復(fù)查均正常，考慮可能是屬“治愈”。

2.4 人體“腹腔免疫”有待進(jìn)一步臨床研究 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，皮膚免疫不如“腹腔免疫”。但人體沒有做過“腹腔免疫“臨床研究。為突破腫瘤治療難題，在保證安全前提下，有必要進(jìn)行該項(xiàng)研究。選擇能避開腫瘤免疫抑制的部位，進(jìn)行免疫，對(duì)治療腫瘤，有舉足輕重的作用。20 g的昆明鼠腹腔死瘤苗3次增強(qiáng)免疫，可消除皮膚接種11萬個(gè)活瘤細(xì)胞的小瘤，動(dòng)物和人體按體重?fù)Q算，人體是小鼠體重的3000倍，小鼠的小瘤相當(dāng)于人體的含3億3千萬瘤細(xì)胞的大瘤，說明人體可能消除比11萬個(gè)活瘤細(xì)胞大的瘤子。人體的MRD是100 000個(gè)瘤細(xì)胞以下，能消除110 000個(gè)瘤細(xì)胞的瘤子就能消除MRD，這就有可能更好地治療腫瘤。

3 抗瘤免疫力提升律AX的臨床意義

從理論和實(shí)踐都證明，有可能消除腫瘤MRD，腫瘤MRD是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡的根本原因。消除腫瘤MRD，是突破腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡的關(guān)鍵一步，是腫瘤斬草除根的一步?？沽雒庖吡μ嵘葾X是內(nèi)因方法，無免疫抑制，是能迅速極大幅度地提高特異性抗瘤免疫力抗腫瘤除“根”的實(shí)驗(yàn)理論模型，為腫瘤治療提供了不復(fù)發(fā)、不轉(zhuǎn)移、不死亡的可行性方案。小白鼠腹腔免疫可殺滅280 000個(gè)活瘤細(xì)胞。換算為人體，將可消除含100 000個(gè)瘤細(xì)胞的MRD 8400次。小白鼠死瘤苗腹腔增強(qiáng)免疫，可消除110 000個(gè)活瘤細(xì)胞的小皮膚瘤。換算為人體，將可消除100 000萬個(gè)活瘤細(xì)胞的MRD 3000次。結(jié)果證明，以抗瘤免疫幾何級(jí)數(shù)提升律AX為指導(dǎo)，提升腫瘤患者的抗瘤免疫力，在手術(shù)、化療、放療等大幅度消除大部腫瘤后，可以消除殘留的MRD，進(jìn)而有可能控制腫瘤。

4 結(jié)語

腫瘤治療“臨床治愈”與“細(xì)胞學(xué)治愈”的區(qū)別：腫瘤治療的“臨床治愈”是臨床治療結(jié)果，以目前的臨床檢查手段，以查不到瘤塊為準(zhǔn)。臨床能查到的最小瘤塊是0.5 cm以上，腫瘤MRD的總體體積是0.1 mm3，血液檢查也很難發(fā)現(xiàn)瘤細(xì)胞，故臨床檢查發(fā)現(xiàn)不了MRD，可臨床診斷為“治愈”，而告訴患者沒有瘤細(xì)胞了，是不準(zhǔn)確的?！凹?xì)胞學(xué)的腫瘤治愈”是指消除了腫瘤MRD，達(dá)到腫瘤不復(fù)發(fā)、不轉(zhuǎn)移、不死亡，是真正的“根治”。

腫瘤臨床治療緩解后要繼續(xù)治療：目前，國(guó)內(nèi)外腫瘤治療緩解后，為減少患者思想負(fù)擔(dān)，長(zhǎng)時(shí)間不繼續(xù)治療，讓患者保持樂觀的狀態(tài)，不想治療。一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)患者全身轉(zhuǎn)移，已無“治愈”可能。這與許多醫(yī)生認(rèn)為腫瘤無“治愈”可能，只能“帶瘤生存”有關(guān)。腫瘤臨床治療緩解后，應(yīng)不失時(shí)機(jī)地繼續(xù)治療，最后用自體瘤苗消除MRD，才有可能“治愈”腫瘤。

本研究中，筆者通過昆明鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提出了免疫力提升律AX，并以其為指導(dǎo)應(yīng)用于臨床，發(fā)現(xiàn)其結(jié)合外源療法能較好地控制腫瘤，并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，提出腫瘤除“根”的實(shí)驗(yàn)理論模型，為腫瘤治療提出了“細(xì)胞學(xué)治愈”的可行性方案。腫瘤患者或患瘤動(dòng)物瘤苗主動(dòng)免疫，消瘤可能成功，選擇遠(yuǎn)離腫瘤的免疫部位很重要。有的專家認(rèn)為，動(dòng)物過繼免疫消瘤可能成功，主動(dòng)免疫消瘤不能成功[2]，這樣就否定了腫瘤患者瘤苗主動(dòng)免疫得到控制的可能性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，若免疫部位距離腫瘤很近，接種的瘤苗被腫瘤免疫抑制，則不會(huì)成功。

[1]楊樹勤.衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1987:108-110.

[2]Parviz M.Successful adoptive immunotherapy with vaccine-sensitized T cells，despite no effect with vaccinathion alone in a weakly immunogenic tumor model[J].Cancer Immuol Immunother，2003，52(1):739-750.