金剛藤分散片中薯蕷皂苷元HPLC法測定研究

劉衛(wèi)東 王建成 付慶霞

金剛藤具有清熱解毒、消腫散結(jié)之功效，藥效學(xué)與臨床實(shí)驗(yàn)顯示，金剛藤在治療婦科炎癥及腫瘤方面有著明顯的療效，而且還具有降低血糖、鎮(zhèn)痛的藥理作用［1］。分散片與一般片劑相比，崩解時間短，分散狀態(tài)佳，臨床應(yīng)用顯效快速。《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第9冊中收載的“金剛藤糖漿”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)。為了有效控制金剛藤分散片的質(zhì)量，筆者參考金剛藤(菝葜)及薯蕷皂苷元含量測定研究的相關(guān)資料［2］，建立了薯蕷皂苷元的含量測定項(xiàng)，采用高效液相色譜法測定成品制劑中薯蕷皂苷元的含量，并進(jìn)行了相應(yīng)的方法學(xué)研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，陰性無干擾，能很好地控制藥品的質(zhì)量。

1 材料與方法

1.1 材料 高效液相色譜儀(SPD－10Avp檢測器，LC－10ATvp溶劑輸送泵，島津公司)，ANASTAR色譜工作站;Discovery C 18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);薯蕷皂苷元對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:1539－200001);金剛藤分散片自制(批號:070118、070119、070120);乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑為分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈－水(90∶10)為流動相;流速為1 ml/min;柱溫為35℃;檢測波長為203 nm。理論板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。圖譜見圖1、圖2、圖3。

圖1 對照品溶液

1.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加乙腈制成每1 ml含0.2 mg的溶液，即得。

圖2 供試品溶液

圖3 陰性對照溶液

1.2.3 供試品溶液的制備 參考《中國藥典》2010年版一部中菠葵原藥材的含量測定方法［3］，并根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果，將供試品溶液的制備方法定為:取金剛藤分散片10片，精密稱定，研細(xì)，取約2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醇適量，加熱回流至提取液近無色，揮去溶劑，加水50 ml與鹽酸10 ml，再加石油醚50 ml，水浴回流水解3 h，冷卻，用石油醚(60℃ ～90℃)振搖提取5次，每次40 ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)右译娉暼芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.4 線性關(guān)系考察 精密稱取薯蕷皂苷元對照品20.0 mg，置50 ml量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各 1 ml、3 ml、5 ml、7 ml、9 ml置 10 ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻;分別精密吸取上述溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖。以薯蕷皂苷元的峰面積(A)為縱坐標(biāo)(Y)，以薯蕷皂苷元溶液的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(X)，按最小二乘法進(jìn)行線性回歸;回歸方程:Y=5513.7 X+21862，r=0.9996。

1.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的金剛藤分散片樣品(批號:070119，含量:1.56 mg/片)10 片，研細(xì)，混勻，取約1 g，精密稱定，平行5份，精密加入濃度為0.312 mg/ml的對照品溶液10 ml，按供試品溶液的制備方法制備，作為樣品溶液，分別精密吸取上述樣品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。

1.2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸薯蕷皂苷元對照品溶液(0.218 mg/ml)20 μl，注入液相色譜儀，重復(fù)測定 5 次，RSD為1.06%，表明儀器精密度良好。

1.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(批號:070119)金剛藤分散片樣品，按供試品溶液的制備方法制備，平行6份，分別測定，RSD為1.09%，結(jié)果表明分析方法重復(fù)性良好。

1.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取金剛藤分散片供試品溶液20 μl，注入液相色譜儀，在 0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h 分別進(jìn)樣，RSD為1.03%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.9 樣品測定 精密稱取薯蕷皂苷元對照品適量，加乙腈制成每1 ml含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液;取本品10片，精密稱定，研細(xì)，取粉末約2 g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醇適量，加熱回流至提取液近無色，揮去溶劑，加水50 ml與鹽酸10 ml，再加石油醚50 ml，水浴回流水解3 h，冷卻，用石油醚(60℃ ～90℃)振搖提取5次，每次40 ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)右译娉暼芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 ml量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀。

根據(jù)上述試驗(yàn)結(jié)果及穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，考慮到原藥材的來源，以及制劑生產(chǎn)、貯藏等因素，暫定本品每片含金剛藤以薯蕷皂苷元(C27H42O3)計(jì)，不得少于1.3 mg。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察試驗(yàn)結(jié)果表明，薯蕷皂苷元在40～360 μg/ml濃度范圍內(nèi)，濃度與其峰面積線性關(guān)系良好。

2.2 加樣回收率試驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果表明，金剛藤分散片含量測定的加樣回收率良好。見表1。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明分析方法重復(fù)性良好。

2.4 樣品含量測定結(jié)果 見表2。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

本研究首次建立了測定金剛藤分散片有效成分薯蕷皂苷元的HPLC的方法，色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈一水(90∶10)為流動相;流速為1 ml/min;柱溫為35℃;檢測波長為203 nm。理論板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。對該方法進(jìn)行了干擾試驗(yàn)、回收率試驗(yàn)、藥液穩(wěn)定性、重現(xiàn)性與精密度等研究，表明所建HPLC方法測定金剛藤分散片中的薯蕷皂苷元準(zhǔn)確快速，為金剛藤分散片的進(jìn)一步開發(fā)研究奠定了基礎(chǔ)。

［1］鄧家剛，陳壯．金剛藤活性成分與藥效學(xué)及臨床應(yīng)用研究［J］．河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，20(3):23 －24．

［2］蔣美紅，高中洪，楊祥良．RP－HPLC測定金剛藤中薯蕷皂苷元的含量［J］．中國藥學(xué)雜志，2005，40(4):299 －301．

［3］呂翼，呂金清，裴學(xué)軍．藥用金剛藤名實(shí)考證［J］．河北中醫(yī)雜志，2002，24(5):47 －48．