三聚氰胺及其類似物國內(nèi)外檢測方法綜述

彭飛進* 徐 幸 楊衛(wèi)花 趙浩軍 張 燕 張 蕾 郭啟新 王 坤

（大理州質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測中心，大理 671000）

三聚氰胺及其類似物國內(nèi)外檢測方法綜述

彭飛進* 徐 幸 楊衛(wèi)花 趙浩軍 張 燕 張 蕾 郭啟新 王 坤

（大理州質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測中心，大理 671000）

介紹了近年來國內(nèi)外三聚氰胺及其類似物的定量和定性檢測方法，主要涉及食品、飼料中同時檢測三聚氰胺及其類似物的國際、國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)方法，國內(nèi)外文獻報道方法和快速篩選分析方法。并介紹了檢測的注意事項。

三聚氰胺；三聚氰胺類似物；定量方法；定性方法

三聚氰胺（英文名Melamine，CAS號108-78-1），是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物，重要的氮雜環(huán)有機化工原料，常用于制造三聚氰胺樹脂，在三聚氰胺制造過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)可能會形成氰尿酸（Cyanuric acid）、三聚氰酸二酰胺 （Ammeline） 和三聚氰酸一酰胺（Ammelide）等類似物。目前三聚氰胺嚴(yán)禁直接用于食品用途，《食品法典》也沒有建議使用。

2007年爆發(fā)的貓和狗寵物食品事件和2008年三鹿奶粉事件都是因違法添加三聚氰胺導(dǎo)致的。三聚氰胺和氰尿酸雖然只有低急性毒性，但有證據(jù)顯示在同時攝入三聚氰胺和氰尿酸后，會導(dǎo)致腎毒性。研究人員試驗了大鼠單獨攝入三聚氰胺或其類似物的任一種、三聚氰胺和氰尿酸的混合物，以及這4種化合物的混合物。單獨攝入的均未對腎產(chǎn)生任何副作用，但混合物則產(chǎn)生了明顯的腎損傷。因此，在食品或飼料中同時檢測三聚氰胺及其類似物非常重要。

三聚氰胺及其類似物的檢測方法，國外已有大量報道，國內(nèi)也有部分文獻報道，但國家標(biāo)準(zhǔn)方法大部分只針對三聚氰胺單一化合物，并不涉及三聚氰胺類似物。關(guān)于三聚氰胺檢測方法的綜述，國內(nèi)也有部分報道，如魯杰等人對不同基質(zhì)中的三聚氰胺檢測原理及各自的優(yōu)缺點進行了概述；孫貴朋等人介紹了三聚氰胺的危害和三聚氰胺國內(nèi)檢測方法；曹程明等人介紹了三聚氰胺毒性和國內(nèi)外法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，并對前處理方法和檢測條件進行探討。但他們并沒有關(guān)注三聚氰胺類似物的檢測方法和三聚氰胺及其類似物的國內(nèi)外文獻報道方法。本文在前人工作的基礎(chǔ)上，將三聚氰胺及其類似物的檢測方法分為現(xiàn)有定量分析方法和快速篩選定性方法，特別整理了大量關(guān)于三聚氰胺及其類似物的國外檢測方法，并詳細(xì)介紹了檢測三聚氰胺及其類似物的注意事項，為檢驗人員開發(fā)三聚氰胺及其類似物檢測方法及制定相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 現(xiàn)有定量分析方法

1.1 食品中同時檢測三聚氰胺及其類似物的方法

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)檢測方法

有關(guān)食品中三聚氰胺及其類似物檢測的中國國家標(biāo)準(zhǔn)有GB/T 22288-2008氣相色譜-質(zhì)譜法測定植物源產(chǎn)品中三聚氰胺、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺和三聚氰酸。

國外政府部門發(fā)布的食品中三聚氰胺及其類似物檢測方法有：①2007年5月至2008年10月，美國FDA先后推出用Hilic柱測定鯰魚中三聚氰胺的LC/MS/MS方法（LIB No.4396）；LC-MS/MS法測定嬰幼兒配方食品中三聚氰胺和氰尿酸的方法（LIB No.4421）；食品中三聚氰胺和氰尿酸的LC-MS/MS臨時測定方法（版本1.0）（LIB No.4422）；三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和氰尿酸的GC/MS篩選方法（LIB No.4423）。②2008年加拿大食品檢查局發(fā)布了采用HPLC-MS/MS測定嬰幼兒配方奶粉、奶粉、牛奶、酸奶及酸奶飲料中三聚氰胺和氰尿酸的方法。

1.1.2 文獻報道方法

有關(guān)食品中三聚氰胺檢測方法的國外文獻較多，從1987年至今已有多篇文獻報道，食品種類主要為嬰幼兒配方奶粉、牛奶、鯰魚和牛肉等，主要涉及高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜DAD檢測法和高效液相色譜UV檢測方法等。

1.2 飼料中同時檢測三聚氰胺及其類似物的方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)檢測方法

飼料中三聚氰胺檢測方法與食品中三聚氰胺采用的方法基本相似，因為他們中的基質(zhì)和提取方法都相對簡單，大致均采用高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（LC-MS/MS） 和酶聯(lián)免疫法等。

自美國發(fā)生寵物食品三聚氰胺事件后，美國食品藥品管理局（FDA）陸續(xù)推出系列測定三聚氰胺及其類似物的方法，并不斷調(diào)整完善。以下為FDA推出的方法：①2007年4月，推出的用HPLC-UV測定麥麩和潮濕的寵物食品中三聚氰胺的測定方法，檢出限100 mg/kg。此法是將凈化樣品經(jīng)C8色譜柱分離后，流動相為乙腈，緩沖液為體積濃度比15∶85的10 mmol/L檸檬酸和10 mmol/L辛烷磺酸鈉溶液，調(diào)節(jié)pH至3.0，檢測波長240 nm，用紫外檢測器進行檢測和定量。②2008年5月，推出麥麩和干寵物食品、濕“切割和肉汁”型的寵物食品GC-MS 篩選三聚氰胺的方法，檢出限報道為10 mg/kg。③2008年10月，發(fā)布了各類基質(zhì)包括食品、寵物食品和動物食品在內(nèi)的三聚氰胺、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸的GC/MS篩選方法（LIB No.4423）。

我國在三聚氰胺事件發(fā)生后，也迅速推出了相關(guān)的方法。2007年農(nóng)業(yè)部推出NY/T1372-2007《飼料中三聚氰胺的測定》，采用HPLC和GC-MS方法檢測三聚氰胺，檢出限分別是2 mg/kg和0.05 mg/kg。

1.2.2 文獻報道方法

文獻報道方面，2008年相繼發(fā)表許多了有關(guān)動物飼料中三聚氰胺及類似物檢測方法的科技論文，主要有高效液相色譜聯(lián)用、高效液相色譜DAD檢測、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用等方法。

2 快速篩選和定性分析

目前關(guān)于三聚氰胺及其類似物的快速篩選和定性方法主要是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、表面增強拉曼散射法（SERS）和飛行質(zhì)譜分析（TOFMS）等。

3 三聚氰胺及其類似物檢測的注意事項

三聚氰胺檢測不論采用何種方法均離不開樣品前處理，前處理中又涉及溶劑的選擇，目前較成熟的檢測方法均結(jié)合儀器分析，如HPLC或GC聯(lián)用各種檢測器MS、MS/MS、DAD和UV等，因此還需考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響，現(xiàn)將溶劑、萃取方式和基質(zhì)效應(yīng)的注意事項介紹如下。

3.1 萃取溶劑和萃取方式選擇

樣品前處理會根據(jù)檢測方法不同而有所差別，但主要是利用液相萃取方法提取，然后通過固相萃?。⊿PE）凈化，有時為防止樣品中其他雜質(zhì)干擾樣品檢測會進一步凈化，如利用GC-MS法測定還需凈化后進行衍生化。萃取的目的是最大限度地把三聚氰胺從基質(zhì)體系中提出來，凈化的目的主要是為了把一些雜質(zhì)最大限度地排除。

因三聚氰胺及其類似物是極性小分子，所以一般采用極性溶劑萃取，酸性溶液有甲酸水溶液、乙酸水溶液、鹽酸溶液、pH值為5的磷酸緩沖液、三氯乙酸水溶液等；堿性溶液有二乙胺水溶液，有機溶劑有甲醇、乙腈、丙烯腈等。

三聚氰胺-氰尿酸結(jié)合物不像純的三聚氰胺和氰尿酸可以在很多溶劑中都能溶解，但樣品中如果存在三聚氰胺-氰尿酸結(jié)合物就必須選擇合適的萃取溶劑。Puschne等人發(fā)現(xiàn)二甲胺/丙烯腈/水體系是三聚氰胺-氰尿酸結(jié)合物很好的萃取溶劑?？傊鶕?jù)分析物的性質(zhì)不同選擇合適的萃取溶劑。

除去離心、過濾，固相萃取是萃取后最常用的凈化措施，固相萃取（SPE）被日趨認(rèn)為是一種非常有效的樣品處理技術(shù)。使用固相萃取法能避免液－液萃取所帶來的許多問題，比如，不完全的相分離，較低的定量分析回收率，昂貴易碎的玻璃器皿和大量的有機廢液。與液－液萃取相比，固相萃取更有效，容易達到定量萃取、快速和自動化，同時也減少了溶劑用量和工作時間。過去幾年里，混合模式的固定相吸附劑使用頻率已超過純的離子交換樹脂的使用，陽離子交換/反相（如Waters Oasis MCX and Phenomenex Strata X-C） 被用于三聚氰胺分析，Smoker等人報道氰尿酸用陰離子交換混合模式分離（如 Waters Oasis MAX）（LIB No.4422）。

3.2 基質(zhì)效應(yīng)

三聚氰胺檢測分析中影響最大的是基質(zhì)效應(yīng)，特別是采用靈敏度更高的LC-MS/MS分析時，基質(zhì)效應(yīng)的影響更明顯。

LC-MS/MS中的基質(zhì)效應(yīng)由分析物的共流出組分影響電噴霧接口的離子化效率所致，表現(xiàn)為離子增強或抑制作用。在三聚氰胺檢測中基質(zhì)效應(yīng)會影響樣品檢測的回收率及質(zhì)譜分析時的離子化程度。許多基質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)，例如Nochetto等人發(fā)現(xiàn)在谷蛋白和面粉中氰尿酸離子化被分別抑制了大約70%和50%。同時在嬰幼兒配方奶粉、魚、豬肉和蝦等也發(fā)現(xiàn)較強的基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)也存在GC-MS檢測分析中。

基質(zhì)效應(yīng)是客觀存在的，基質(zhì)效應(yīng)的消除和降低可通過改進樣品前處理方法，良好的色譜分離、采用內(nèi)標(biāo)或基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)等。

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Review of international and domestic determination methods about melamine and analogues

PENG Fei-jin*XU XingYANG Wei-huaZHAO Hao-jun ZHANG Yan ZHANG LeiGUO Qi-xinWANG-Kun
（Daliqualityand technicalsupervision comprehensiveinspection centre，Dali 671000，China）

Recent international and domestic quantitative and qualitative determination methods of melamine and its analogues were introduced.The international and domestic standard methods，reported methods，rapid screening analysis methods and precautions about these methods were described.

melamine；mlamine analogues；quantitative method；qualitative method

TS207.5+1

A

1673-6004（2012）03-0013-03

* 彭飛進，女，1982年出生，2008年畢業(yè)于中南大學(xué)生物化工專業(yè)，助理工程師

2012-07-25