大管的化學(xué)成分研究

黃永中，張 偲，黃 升，羅雄明*，王建華*

1重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，重慶400044;2中國科學(xué)院南海海洋研究所，廣州510301

大管Micromelum falcatum(Lour.)Tan.為蕓香科(Rutaceae)小蕓木屬植物，在我國主要分布于海南島、廣東西南部、廣西合浦至東興一帶和云南東南部。在中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中主要用于治療創(chuàng)傷感染、風(fēng)濕、咳嗽、發(fā)熱等。文獻(xiàn)報道其主要化學(xué)成分為香豆素、生物堿和苯丙酸類衍生物等［1-4］。本實(shí)驗(yàn)對大管的化學(xué)成分進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，分離得到12個化合物，包括6個香豆素和6個芳香類化合物。其中化合物1為新的天然產(chǎn)物;除5和6外，其余化合物均首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

NMR譜用Bruker DRX-500MHz核磁共振波譜儀測定，TMS為內(nèi)標(biāo);高效液相色譜儀為半制備型Waters 600(phenomenex OOG-4252-NO，250 mm×10 mm i.d.，5 μm);ESI-MS用島津 API2000 LC/MS/ MS型液相色譜-質(zhì)譜儀聯(lián)用儀測定;凝膠Sephadex LH-20為Pharmacia公司產(chǎn)品;柱層析用硅膠(200～300目)為青島海洋化工廠產(chǎn)品。高效液相用試劑為色譜純，其他所用試劑均為分析純。

大管莖皮于2009年采集于海南省三亞市，材料由中國科學(xué)院南海海洋研究所羅雄明助理研究員鑒定為 Micromelun falcatum(Lour.)Tan.，樣品標(biāo)本(No.DAJIAN020)存放于中國科學(xué)院南海海洋研究所標(biāo)本館。

2 提取和分離

干燥的大管約10 kg，用95%的乙醇浸提3次，每次7 d。提取液減壓濃縮，用水分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。乙酸乙酯部分140 g，首先采用硅膠(200～300目)層析柱，以石油醚-丙酮(9∶1→1∶2)進(jìn)行梯度洗脫，共接收120個流分，經(jīng)TLC檢測，合并成A-J共10個粗組分，其中A組分先過凝膠Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)柱色譜，然后上硅膠柱(200～300目)，氯仿-丙酮(60∶1)洗脫，所得部分再用凝膠Sephadex LH-20(甲醇)進(jìn)一步純化，得化合物5(114.8 mg)和6(26.5 mg);B組分先過凝膠Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)，然后上硅膠柱(200～300目)，氯仿-丙酮(10∶1～2∶1)梯度洗脫，所得部分再過凝膠Sephadex LH-20(甲醇)，然后用HPLC(MeOH/H2O 45∶55)純化，得到化合物1(12.3 mg)、4(12.9 mg)、10(8.8 mg)、11 (6.2 mg);D組分先過凝膠Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)，然后上硅膠柱，氯仿-丙酮(3∶1～1∶1)梯度洗脫，所得部分用HPLC(MeOH/H2O 45∶55)純化，得到化合物9(11.2 mg)。

正丁醇萃取物42.0 g溶于水中，過濾，得到水不溶部分10.0 g和水溶解部分30.0 g，后者過D101大孔吸附樹脂，依次用水、20%、40%、60%、95%的乙醇洗脫，得五組餾分。經(jīng)TLC檢測，20%和40%乙醇洗脫得到的餾分斑點(diǎn)較相似，故將其合并進(jìn)行分離純化。水不溶部分10.0 g過硅膠(200～300目)柱分段，依次用石油醚-丙酮(6∶4)、氯仿-丙酮(20∶1)洗脫，所得部分再過凝膠 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1∶1)進(jìn)一步純化，得到化合物3(36.3 mg)和12(12.0 mg);20%和40%部分的浸膏合并過硅膠(200～300目)柱分段，用氯仿-甲醇(8∶2)洗脫，所得部分過凝膠 Sephadex LH-20(氯仿-甲醇1∶1)，再通過HPLC(MeOH/H2O 50∶50)純化，得到化合物2(7.2 mg)、7(11.7 mg)和8(9.7 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:黃色晶體，ESI-MS m/z:257［M+ Na］+，結(jié)合1H NMR譜和ESI-MS數(shù)據(jù)推斷分子式為C12H10O5。1H NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:9.83 (1H，s，5-CHO)，7.92(1H，d，J=9.5 Hz，H-4)，6.83 (1H，s，H-8)，6.36(1H，d，J=9.5Hz，H-3)，3.82 (3H，s，6-OMe)，3.77(3H，s，7-OMe)。13C NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:193.2(5-CHO)，161.6(C-2)，148.4(C-6)，147.2(C-7)，143.9(C-10)，143.5(C-4)，121.6(C-9)，118.8(C-5)，113.7(C-3)，109.1 (C-8)，56.5(6-OMe)，56.2(7-OMe)。根據(jù)HMBC譜信號，從δH9.83(s，5-CHO)與δC118.8(C-5)、121.6(C-9)和148.4(C-6)相關(guān)，表明醛基在C-5上;從δH3.82(s，6-OMe)與δC148.4(C-6)相關(guān)，表明甲氧基在C-6上;從δH6.83(s，H-8)與143.9(C-10)147.2(C-7)和109.1(C-8)相關(guān)，表明氫信號在C-8上;從δH3.77(s，7-OMe)與δC147.2(C-7)相關(guān)，表明C-7上有甲氧基。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［5］，故鑒定化合物1為5-formyl-6，7-dimethoxycoumarin。

化合物2:白色粉末，ESI-MS m/z:377［M+ Na］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為 C16H18O9。UV(CH3OH):λmax(log ε)226.4 (1.70)，288.9(0.75)，337.5(1.00)nm;1H NMR (500 MHz，CD3OD)δ:7.91(1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，7.21(1H，s，H-8)，7.19(1H，s，H-5)，6.32(1H，d，J =9.5 Hz，H-3)，5.08(1H，d，J=7.5 Hz，H-1')，3.94(1H，d，J=2.5 Hz，H-5')，3.92(3H，s，7-OMe)，3.72(1H，m，H-6')，3.55(3H，m，H-2'，3'，6')，3.43(1H，d，J=8.5 Hz，H-4');13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ:163.6(C-2)，151.8(C-7)，150.7 (C-10)，148.3(C-4)，145.7(C-6)，114.6(C-3)，114.6(C-9)，110.8(C-5)，105.3(C-1')，102.1(C-8)，78.4(C-5')，77.9(C-3')，74.8(C-2')，71.3(C-4')，62.5(C-6')，57.1(7-OMe)。根據(jù)HMBC譜信號，從δH7.19(s，H-5)與δC110.8(C-5)、114.6(C-9)和145.7(C-6)相關(guān)，表明氫在C-5上;從δH5.08 (1H，d，J=7.5 Hz，H-1')與δC145.7(C-6)相關(guān)，表明葡萄糖分子連接在C-6上;從δH7.21(s，H-8)與δC151.8(C-7)，102.1(C-8)和150.7(C-10)相關(guān)，表明C-8上有氫;從δH3.92(s，7-OMe)與δC151.8 (C-7)相關(guān)，表明C-7上有甲基。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［6］，故鑒定化合物2為isoscoploletin-β-D-glucoside。

化合物3:黃色晶體，ESI-MS m/z:267［M+ Na］+，分子式為 C14H12O4。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.80(1H，d，J=16.5 Hz，H-1')，7.65(2H，dd，J=3.0，9.5 Hz，H-4，H-5)，6.84(1H，s，H-8)，6.75(1H，d，J=16.5Hz，H-2')，6.30(1H，t，J=3.0，9.5Hz，H-3)，3.97(3H，s，7-OMe)，2.40(3H，s，H-4');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:198.6(C-3')，161.1(C-2)，160.5(C-7)，157.0(C-10)，143.1(C-4)，136.8(C-1')，128.4(C-2')，127.6(C-5)，121.1 (C-6)，114.1(C-3)，112.5(C-9)，99.6(C-8)，56.3 (7-OMe)，27.4(C-4')。根據(jù)HMBC譜信號，從δH2.40(s，H-4')與δC198.6(C-3')和128.4(C-2')相關(guān)，從δH7.80(1H，d，J=16.5 Hz，H-1')與δC127.6 (C-5)，121.1(C-6)，160.5(C-7)，198.6(C-3')和128.4(C-2')相關(guān)，表明丁烯支鏈在C-6上。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［7］，故鑒定化合物3為6-(trans-1-buten-3-only)-7-methoxycoumarin。

化合物4:黃色晶體，ESI-MS m/z:215［M+ Na］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C10H8O4。1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.86 (1H，d，J=9.0 Hz，H-4)，7.11(1H，s，H-8)，6.78 (1H，s，H-5)，6.21(1H，d，J=9.0 Hz，H-3)，3.92 (3H，s，7-OMe)。13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ: 161.2(C-2)，151.8(C-7)，150.5(C-10)，148.7(C-4)，148.2(C-6)，114.5(C-3)，113.6(C-9)，110.2 (C-5)，102.5(C-8)，56.4(7-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［8］，故鑒定化合物4為異莨菪亭(6-羥基-7-甲氧基香豆素，isoscopoletin)。

化合物5:白色粉末，ESI-MS m/z:399［M+ Na］+，分子式為 C20H24O7。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.56(1H，d，J=9.5Hz，H-4)，7.35(1H，d，J=8.5Hz，H-5)，6.81(1H，d，J=9.0Hz，H-6)，6.16(1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，6.08(1H，m，H-1')，5.58(1H，d，J=5.5 Hz，H-2')，5.26(1H，dd，J= 2.5，3.0 Hz，H-4')，5.20(1H，dd，J=1.5，3.5 Hz，H-4')，4.67(1H，dd，J=2.0 Hz，H-5')，4.56(1H，dd，J=1.5，2.0 Hz，H-5')，3.85(3H，s，7-OMe)，2.14(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'')，2.02(1H，m，H-3'')，0.86(6H，d，J=7.0 Hz，3''-CH3);13C NMR (125 MHz，CDCl3)δ:172.8(C-1'')，161.0(C-7)，160.4(C-2)，153.5(C-10)，147.0(C-3')，143.7(C-4)，129.2(C-5)，114.6(C-8)，113.1(C-3)，113.0 (C-9)，108.8(C-4')，108.0(C-6)，77.2(C-2')，76.7(C-1')，71.2(C-5')，56.1(C-7-OMe)，43.4(C-2'')，25.8(C-3'')，22.2(C-4'')，22.2(C-5'')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［9］，故鑒定化合物5為microfalcatin isovalerate。

化合物6:無色晶體，紫外燈下有藍(lán)色熒光，ESIMS m/z:311［M+Na］+，分子式為 C15H12O6。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.94(1H，d，J=9.5 Hz，H-4)，7.67(1H，s，H-5)，7.08(1H，s，H-6)，6.26 (1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，5.55(1H，d，J=6.5 Hz，H-1')，4.03(1H，d，J=6.5 Hz，H-2')，3.92(3H，s，7-OMe)，1.67(3H，s，H-5');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:172.3(C-4')，160.4(C-2)，159.9(C-7)，156.6(C-10)，142.9(C-4)，127.6(C-5)，120.2 (C-6)，114.2(C-3)，112.4(C-9)，99.8(C-8)，77.3(C-1')，63.5(C-2')，57.3(C-3')，56.5(7-OMe)，11.2(C-5')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［10-12］，故鑒定化合物6為小蕓木寧micromelin。

化合物7：白色針晶，ESI-MS m/z:395［M+ Na］+，分子式為C17H24O9。UV(CH3OH):λmax(log ε)231.1(2.88)，272.3(2.00)，337.5(1.42) nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:6.77(2H，s，H-2，6)，6.56(1H，d，J=15.5Hz，H-7)，6.35(1H，m，H-8)，4.90(1H，s，H-1')，4.24(2H，dd，J=1.0，5.5Hz，H-9)，3.88(6H，s，3-OMe，5-OMe)，3.79 (1H，m，H-6')，3.68(1H，dd，J=5.0，12.0 Hz，H-6')，3.49(1H，m，H-2')，3.43(1H，m，H-3')，3.43 (1H，m，H-4')，3.23(1H，br m，H-5');13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ:154.4(C-3，5)，135.9(C-4)，135.3 (C-1)，131.3(C-7)，130.1(C-8)，105.5(C-2，6)，105.4(C-1')，78.4(C-5')，77.9(C-3')，75.8(C-2')，71.4(C-4')，63.6(C-9)，62.6(C-6')，57.1(3-OMe，5-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［13］，故鑒定化合物7為丁香苷。

化合物 8：白色晶體，ESI-MS m/z:365［M+ Na］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為 C16H22O8。UV(CH3OH):λmax(log ε)214.7 (1.45)，257.0(1.20)nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.20(1H，d，J=14.0 Hz，H-5)，7.08 (1H，d，J=8.5 Hz，H-2)，6.96(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6)，6.56(1H，d，J=16.0 Hz，H-7)，6.30(1H，m，H-8)，4.90(1H，s，H-1')，4.23(2H，dd，J=1.5，6.0 Hz，H-9)，3.88(1H，m，H-6')，3.87(3H，s，3-OMe)，3.70(1H，m，H-6')，3.50(2H，m，H-2'，5')，3.43(2H，m，H-3'，4');13C NMR(125 MHz，CD3OD) δ:150.9(C-4)，147.7(C-3)，133.7(C-1)，131.3(C-7)，128.9(C-8)，120.8(C-6)，118.0(C-5)，111.4 (C-2)，102.8(C-1')，78.3(C-3')，77.9(C-5')，75.0 (C-2')，71.4(C-4')，63.7(C-9)，62.6(C-6')，56.8 (3-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［14］，故鑒定化合物8為coniferin。

化合物9：褐色針狀晶體，ESI-MS m/z:337［M+ Na］+，分子式為C14H18O8。UV(CH3OH):λmax(log ε)230.0(2.60)，286.5(0.90)nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.78(1H，t，J=1.0，7.5，8.0 Hz，H-7)，7.55(1H，t，J=7.0，7.5 Hz，H-6)，7.41(1H，d，J =8.5 Hz，H-4)，7.14(1H，t，J=7.5，15.0 Hz，H-5)，4.90(1H，d，J=7.5 Hz，H-1')，3.93(1H，m，H-6')，3.91(3H，s，1-OMe)，3.74(1H，m，H-6')，3.54(1H，m，H-2')，3.52(1H，m，H-3')，3.50(1H，m，H-4')，3.44(1H，m，H-5');13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ: 168.6(C-1)，158.8(C-3)，135.2(C-5)，132.1(C-7)，123.7(C-6)，122.4(C-2)，119.1(C-4)，104.1 (C-1')，78.5(C-5')，77.6(C-3')，75.0(C-2')，71.3 (C-4')，62.6(C-6')，52.9(1-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［15］，故鑒定化合物9為methyl 2-O-β-D-glucopyranosylbenzoate。

化合物10：褐色油狀物，ESI-MS m/z:217［M+ Na］+，結(jié)合1H NMR譜和ESI-MS數(shù)據(jù)推斷分子式為 C10H10O4。UV(CH3OH):λmax(log ε)215.9 (0.85)，319.7(0.90)nm;1H NMR(500 MHz，CD3OD)δ:7.59(1H，d，J=15.5 Hz，H-1')，7.19 (1H，d，J=1.5Hz，H-3)，7.07(1H，dd，J=1.5，1.5 Hz，H-6)，6.82(1H，d，J=8.0 Hz，H-4)，6.34(1H，d，J=16.0 Hz，H-2')，3.92(3H，s，5-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［16］，故鑒定化合物10為2-hydroxy-5-methoxy-trans-cinnamic acid。

化合物11：白色粉末，ESI-MS m/z:205［M+ Na］+，結(jié)合1H NMR譜和ESI-MS數(shù)據(jù)推斷分子式為C9H10O4。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:9.82(1H，s，H-7)，7.15(2H，s，H-2，6)，6.09(1H，s，2-OH)，3.97(6H，s，3-OMe，5-OMe)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［17］，故鑒定化合物11為3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲醛。

化合物12：褐色晶體，ESI-MS m/z:151［M+ H］+，結(jié)合1H NMR和13C NMR譜數(shù)據(jù)推斷分子式為C10H14O。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ:7.15(1H，dd，J=1.5，1.5 Hz，H-6)，7.06(1H，ddd，J=6.5，1.5 Hz，H-5)，6.91(1H，t，J=8.0，15.5 Hz，H-4)，6.75(1H，d，J=8.0 Hz，H-3)，2.96(1H，m，H-1')，1.64(2H，m，H-2')，1.24(3H，d，J=7.0 Hz，H-4')，0.87(3H，t，J=7.5，15.0 Hz，H-3');13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ:153.0(C-2)，133.2(C-1)，127.1(C-4)，126.6(C-6)，120.9(C-5)，115.3(C-3)，33.9(C-1')，29.8(C-2')，20.5(C-4')，12.2(C-3')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照基本一致［18］，故鑒定化合物12為鄰仲丁基苯酚。

1 Kong YC，But PPH，Ng KH，et al.Micromelum:a key genus in the chemosystematics of the clauseneae.Biochem Syst Ecol，1988，16:485-489.

2 Kamperdick C，Phuong NM，Sung TV，et al.Coumarins and dihydrocinnamic acid derivatives from Micromelum falcatum.Phytochemistry，1999，52:1671-1676.

3 Luo XM，Qi SH，Yin H，et al.Micromelosides A-D，four new coumarins from the stem bark of Micromelum falcatum.Magn Reson chem，2009，47:1110-1114.

4 Luo XM，Qi SH，Yin H，et al.Alkaloids from the stem bark of Micromelum falcatum.Chem Pharm Bull，2009，57:600-602.5 Ishii H，Ishikawa T，Wada H，et al.Synthetic studies on naturally occurring coumarins.II.Synthesis of 6，7-dimethoxy-and 7，8-dimethoxy-5-［(E)-3-oxo-1-butenyl］coumarins.Chem Pharm Bull，1992，40:2614-2619.

6 Lin S(林生)，Xiao YQ(肖永慶)，Zhang QW(張啟偉)，et al.Studies on chemical constituents in bud of Artemisia scoparia(Ⅲ).China J Chin Mater Med(中國中藥雜志)，2004，29:429-431.

7 Talapatra SK，Mukhopadhay SK，Talapatre B.Minor coumarins of Boenninghausenia albiflora.Phytochemistry，1975，14: 836-837.

8 Wang Q(王瓊)，Zhang CF(張朝鳳)，Zhang M(張勉)，et al.Study on chemical constituents in roots and rhizomes of Ligularia duciformsⅡ.China J Chin Mater Med(中國中藥雜志)，2008，33:1018-1020.

9 Ito C，Otsuka T，Ruangrungsi N，et al.Chemical constituents of Micromelum minutum.Isolation and structural elucidation of new coumarins.Chem Pharm Bull，2000，48:334-338.

10 Lamberto JA，Price JR，Redcliff AH.Micromelin，a new coumarin from Micromelum minutum(Forst.F.)seem(Family: Rutaceae).Aust J Chem，1967，20:973-979.

11 Geran RI，Greenberg NH，Macdonald MM，et al.Protocol for screening chemical agents and natural products against animal tumors and other biological systems.Cancer Chemother Rep，1972，3:1-103.

12 Cassady JM，Ojima N，Chang CJ，et al.An investigation of the antitumor activity of Micromelum integerrimum(Rutaceae).J Nat Prod，1979，42:274-278.

13 Kitajima J，Ishikawa T，Tanaka Y，et al.Water-soluble constituents of fennel.V.glycosides of aromatic compounds.Chem Pharm Bull，1998，46:1587-1590.

14 Han MH，Yang XW，Zhang M，et al.Phytochemical study of the rhizome of Pinellia ternate and quantification of phenylpropanoids in commercial pinellia tuber by RP-LC.Chromatographia，2006，64:647-653.

15 Ushiyama M，F(xiàn)uruya T.Glycosylation of phenolic compounds by root culture of Panax ginseng.Phytochemistry，1989，28: 3009-3013.

16 Vorovskii VV，Dubinin NS，Dranik LI，et al.Phenolic compounds in the above ground parts of Calligonum leucocladum;Nek.Probl.Farm.Nauki Prakt.，Mater.S'ezda Farm.Kaz.，1975，231-232.

17 Zhou HY(周惠燕)，Zhang H(章輝)，Li SM(李士敏).Chemical constituents from leaves of Phyllostachys pubescensⅠ.Chin J Chin Mater Med(中國中藥雜志)，2005，30: 1933-1934.

18 Tang ZL(唐子龍)，Xu DL(許棟梁)，Liu HW(劉漢文)，et al.Synthesis and bioactivity studies on optically active fenobucarb.J Cent China Nor Univ，Nat Sci(華中師范大學(xué)學(xué)報自然科學(xué)版)，2009，43:593-597.