酵母β-葡聚糖對斷奶仔豬腸道菌群的影響

(沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧沈陽110866)

養(yǎng)豬生產(chǎn)中，斷奶是仔豬生長發(fā)育過程中繼出生后的第二個(gè)關(guān)鍵時(shí)期，仔豬斷奶階段由于自身的生長發(fā)育尚未健全，加諸環(huán)境、營養(yǎng)、心理等應(yīng)激因素的影響，仔豬斷奶后一段時(shí)間出現(xiàn)精神狀況不佳、食欲降低、消化不良、飼料利用率降低、生長遲緩甚至減重、免疫力下降、易患腹瀉和水腫等所謂的“仔豬早期斷奶綜合癥”及各種免疫抑制性疾病，嚴(yán)重制約養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。雖然抗生素也能起到抗病促生長的作用，但是其耐藥性及殘留問題已成為使用中的瓶頸。有關(guān)研究表明，從酵母中提取的β-葡聚糖可能是一種很好的天然免疫增強(qiáng)劑。適量添加可降低動物的各種應(yīng)激反應(yīng)，增強(qiáng)疫苗的保護(hù)效果，改善動物的健康狀況，進(jìn)而提高動物的生產(chǎn)性能。段麗娟等（2006）研究表明，酵母β－葡聚糖以飼料添加劑形式小劑量添加，具有促進(jìn)仔豬生長性能的作用。本試驗(yàn)探討了酵母菌的活性成分——β－葡聚糖對斷奶仔豬的腸道菌群的影響，為β－葡聚糖在斷奶仔豬生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用飼料添加劑

酵母β-葡聚糖由湖北安琪酵母有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

將隨機(jī)選取的28日齡體重為(7.51±0.72)kg斷奶三元雜交（杜×長×大）健康仔豬72頭，按體重和性別隨機(jī)分為4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6頭仔豬，4個(gè)處理組在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上,分別添加酵母β-葡聚糖0、0.025%、0.05%、0.1%。預(yù)飼期為3 d，試驗(yàn)期為4周。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)豬由沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)科研種豬場提供,在同一圈內(nèi)飼養(yǎng),自由采食、自由飲水,做好保暖防寒工作,試驗(yàn)期間按豬場常規(guī)免疫操作程序進(jìn)行衛(wèi)生防疫及消毒。

1.4 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

試驗(yàn)用基礎(chǔ)日糧按照NRC（1998）標(biāo)準(zhǔn)配制，由沈陽眾友飼料公司按要求提供配制?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.5 樣品的采集

于試驗(yàn)結(jié)束的當(dāng)天,每重復(fù)隨機(jī)取2頭體重適中的健康仔豬進(jìn)行屠宰,立即剖腹并結(jié)扎所取腸段的兩頭(分別為結(jié)腸、盲腸和直腸)，用酒精棉球消毒結(jié)扎口后,放入已滅菌的塑料袋中,運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室備用。

1.6 腸道菌群的測定

樣品運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后,無菌操作臺內(nèi)無菌稱取各腸段內(nèi)容物0.5 g于滅菌離心管中,加入滅菌稀釋液4.5 ml,配制成 10－1稀釋液,振蕩 3～5 min,500 r/min 離心 20 min,用微量移液槍準(zhǔn)確吸取10－1稀釋液1 ml至盛有9 ml事先滅菌的稀釋液試管中，振蕩1～2 min,制成10－2稀釋液，依次進(jìn)行 10－5～10－8倍比稀釋。

稀釋液配方為：磷酸二氫鈣4.5 g、磷酸氫二鈣6.0 g、L－半胱氨酸鹽酸鹽0.5 g、吐溫－80 0.5 g、瓊脂1.0 g、蒸餾水1 000 ml。配好后加熱溶解,然后121℃、20 min蒸汽滅菌備用。

大腸桿菌:用微量取液器分別取結(jié)腸、盲腸和直腸內(nèi)容物 10－5～10－7稀釋液 0.1 ml涂布接種于麥康凱培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),并編號),置37℃培養(yǎng)箱中有氧培養(yǎng)24 h后,選取粉紅色或紅色、表面光滑、凸起、邊緣整齊不透明、質(zhì)地軟而黏,直徑1.0～3.0 mm的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),依據(jù)菌落形態(tài)、革蘭氏染色及生理生化反應(yīng)試驗(yàn)可鑒定該菌為大腸桿菌。

乳酸桿菌:用微量取液器分別取結(jié)腸、盲腸和直腸內(nèi)容物 10－5～10－8稀釋液 0.1 ml涂布接種于 Rogosa瓊脂培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),并編號),置37℃培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48 h后,選取乳白色、稍偏黃、表面光滑、凸起、邊緣整齊不透明、質(zhì)地軟、直徑0.6～2.7 mm的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),依據(jù)菌落形態(tài)、革蘭氏染色及生理生化反應(yīng)試驗(yàn)可鑒定該菌為乳酸桿菌。

雙歧桿菌:用微量取液器分別取結(jié)腸、盲腸和直腸內(nèi)容物 10－5～10－8稀釋液 0.1 ml涂布接種于雙歧桿菌分離培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù),并編號),置37℃培養(yǎng)箱中厭氧培養(yǎng)48 h后,選取乳白色,表面光滑、凸起、邊緣整齊不透明、質(zhì)地軟,直徑0.7～2.5 mm的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù),依據(jù)菌落形態(tài)特征、革蘭氏染色及生化反應(yīng)特征可鑒定為豬雙歧桿菌。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件中的單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，經(jīng)F檢驗(yàn)差異顯著者再用鄧肯氏（Duncan's）法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果

β－葡聚糖對斷奶仔豬腸道菌群的影響見表2。

表2 β－葡聚糖對斷奶仔豬腸道菌群的影響

從表2可以看出,不同劑量的β－葡聚糖都能有效抑制結(jié)腸、盲腸和直腸中大腸桿菌的增殖,其中0.1%的葡聚糖添加量效果較好。與對照組相比，添加β－葡聚糖對結(jié)腸、盲腸和直腸中雙歧桿菌濃度都有提高趨勢,其中0.025%添加組對盲腸中雙歧桿菌濃度影響差異顯著（P＜0.05）,0.05%添加組對結(jié)腸中雙歧桿菌濃度影響差異顯著（P＜0.05），對直腸中雙歧桿菌濃度的影響也較大，但差異不顯著（P＞0.05）。添加β－葡聚糖對結(jié)腸、盲腸和直腸中乳酸桿菌濃度的影響也呈提高趨勢,但與對照組相比差異不顯著（P＜0.05）。

3 討論與結(jié)論

動物體內(nèi)的正常菌群維持著動物體的健康、生長和發(fā)育。機(jī)體中的有益和有害菌群相互制約、相互依存。如果它們之間的比例發(fā)生改變，動物體內(nèi)的微生態(tài)環(huán)境就會失調(diào)，很可能引起各種疾病，特別當(dāng)一些兼性細(xì)菌菌群異常增殖時(shí)情況更容易發(fā)生。

健康動物體內(nèi)大腸桿菌的濃度相對穩(wěn)定，但隨著日齡、疾病、飼養(yǎng)狀態(tài)及抗生素的使用而變化，破壞了需氧菌與厭氧菌的平衡。當(dāng)發(fā)生疾病時(shí)，尤其在下痢狀況下，大腸桿菌數(shù)值顯著上升，如仔豬下痢，大腸桿菌數(shù)值在空腸中由105.5個(gè)/g上升到106.4個(gè)/g，直腸中由107.0個(gè)/g上升到107.7個(gè)/g，而乳酸桿菌、雙歧桿菌等厭氧菌數(shù)相對下降，表現(xiàn)為菌群比例失調(diào)、消化機(jī)能紊亂（何明清，2004）。本試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量β－葡聚糖在一定程度上抑制結(jié)腸、盲腸和直腸中大腸桿菌的增殖。

雙歧桿菌是動物消化道有益的正常菌群，對動物機(jī)體的生理作用主要表現(xiàn)為：拮抗致病微生物、建立生態(tài)平衡、合成多種維生素、激活機(jī)體的吞噬細(xì)胞、增強(qiáng)機(jī)體的非特異性和特異性免疫反應(yīng)、控制內(nèi)毒素血癥、提高宿主對放射線的耐受性和延緩機(jī)體的衰老，它是維持腸道健康的重要優(yōu)勢菌群。本試驗(yàn)結(jié)果表明,添加一定劑量的β－葡聚糖在一定程度上促進(jìn)了結(jié)腸、盲腸和直腸中雙歧桿菌的增殖。

乳酸桿菌能在腸道內(nèi)正常無害地定植，對動物的生理作用比較明顯，能合成維生素，輔助消化食物，幫助營養(yǎng)吸收，促進(jìn)宿主代謝，抑制腐敗過程，降低宿主血膽固醇，增強(qiáng)宿主對乳酸的耐力。對豬而言，乳酸桿菌在盲腸和直腸定植最多。疾病如腸炎、腹瀉、脫水以及盲目應(yīng)用抗菌藥物時(shí)，會導(dǎo)致乳酸桿菌數(shù)量減少。本試驗(yàn)結(jié)果表明,不同劑量的β－葡聚糖不同程度地提高了盲腸、結(jié)腸和直腸中乳酸桿菌的數(shù)量。

綜合本試驗(yàn),早期斷乳仔豬基礎(chǔ)日糧中添加β－葡聚糖，提高了腸道中乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌群數(shù)量，降低了大腸桿菌的數(shù)量，改善了斷奶后仔豬腸道菌群構(gòu)成。

若干篇，刊略，需者可函索）