酒石酸長春瑞濱脂質(zhì)體注射液的安全性及抗腫瘤作用研究

王莉芳，王彩霞，魏 娜，呂晶晶，畢宇鑫，艾天琦，李春雷

(1.河北省制劑工程技術(shù)研究中心，2.石藥集團中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司，河北石家莊 050035)

長春瑞濱通過抑制微管聚合，使細胞分裂停止于有絲分裂中期，從而發(fā)揮抗癌作用［1］。臨床上長春瑞濱是晚期非小細胞肺癌(NSCLC)的一線治療藥物，也用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌、難治性淋巴瘤、卵巢癌及頭頸部腫瘤的治療，主要劑量限制性不良反應(yīng)為較強的神經(jīng)毒性、骨髓抑制、白細胞下降、胃腸道反應(yīng)及外周神經(jīng)毒性［2-3］，這使得患者難以長期堅持用藥，從而限制了藥物療效的發(fā)揮。

將長春瑞濱制成脂質(zhì)體，可以使藥物靶向于病變器官及部位，從而最大程度地避免藥物引起的毒副作用［4］。本文對酒石酸長春瑞濱脂質(zhì)體(NVB-lipo)與酒石酸長春瑞濱游離藥(NVB-free)的毒性和抗腫瘤活性進行了比較研究，為NVB-lipo的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物及細胞 NVB-lipo由石藥集團中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司研制，批號091101;NVB-free(海南通用同盟藥業(yè)有限公司)，批號20090901;環(huán)磷酰胺(縮寫CTX，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號10011921);小鼠 S180、RM-1細胞均由中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細胞資源中心提供。

1.2 方法

1.2.1 小鼠最大耐受劑量毒性比較 設(shè)定最小給藥劑量為20 mg·kg-1，以4/3比率遞增給藥劑量，共設(shè)6個劑量組，每組2只KM♀小鼠(河北省實驗動物中心提供，SPF級，生產(chǎn)許可證號為 SCXK［冀］2008-1-003)。NVB-lipo和 NVB-free靜脈給藥后觀察動物一般狀況及體重變化。在20 d觀察期內(nèi)沒有動物死亡、不可恢復(fù)的毒性反應(yīng)，或者體重較實驗前減輕小于15%的最大給藥劑量為小鼠最大耐受劑量。

1.2.2 對S180實體瘤的抑制作用 抽取S180腹水型荷瘤小鼠腹水，生理鹽水稀釋，接種于KM小鼠前肢腋部皮下組織，接種細胞數(shù)1×106個/只。動物隨機分成8組，NVB-lipo 2.5、5、10 和 20 mg·kg-1劑量組，NVB-free 10 和 20 mg·kg-1劑量組，CTX對照組和空白對照組(5% 葡萄糖注射液)。接種24 h后，CTX組腹腔給藥30 mg·kg-1(隔天1次)，其余各組分別單次靜脈給藥。接種10 d后脫頸椎處死小鼠，剖取瘤塊并稱重。計算腫瘤抑制率:腫瘤抑制率/%=(1-給藥組平均瘤重/空白對照組平均瘤重)×100%。

1.2.3 對小鼠前列腺癌RM-1實體瘤的抑制作用 選取生長良好、體內(nèi)傳代3次以上的RM-1腫瘤組織，剪碎，置于玻璃勻漿器中加入無菌生理鹽水研磨，將瘤細胞懸液接種于7～8周C57♂小鼠(中國解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，7～8周，SPF級，生產(chǎn)許可證號為SCXK［軍］2007-004)前肢腋下皮下組織。接種12 d后，挑選腫瘤體積為100～300 mm3的小鼠，按腫瘤體積分層將動物隨機分為 NVB-lipo 2、5、10 和20 mg·kg-1劑量組，NVB-free 20 和 10 mg·kg-1劑量組及空白5% 葡萄糖注射液給藥組，每組10只，單次靜脈給藥，給藥容積為20 ml·kg-1。監(jiān)測瘤徑及體重，動態(tài)觀察受試藥的抗腫瘤作用。腫瘤體積(tumor volume，TV)計算公式為:V=1/2×a×b2(a和b分別表示腫瘤長和寬)。相對腫瘤體積抑制率/%=(1-TRTV/CRTV)×100%［TRTV:治療組RTV;CRTV:空白對照組RTV，RTV(相對腫瘤體積)=Vt/V0V0為分籠給藥時測量所得腫瘤體積，Vt為每一次測量時的腫瘤體積］。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 實驗結(jié)果采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件分析。

2 結(jié)果

2.1 小鼠最大耐受劑量毒性比較 NVB-lipo和NVB-free對小鼠的最大耐受劑量分別為35.6和26.7 mg·kg-1，表明制成脂質(zhì)體后長春瑞濱毒性明顯降低。

2.2 對S180實體瘤的抑制作用 NVB-lipo單次以2.5、5、10和20 mg·kg-1靜脈注射，可劑量相關(guān)性的明顯抑制小鼠S180實體瘤的生長，抑瘤率為 27.7% ～73.0%。NVB-free 10和20 mg·kg-1劑量組與空白組相比對 S180腫瘤無治療作用(P＞0.05)，NVB-lipo 10和20 mg·kg-1與等劑量的NVB-free相比可以明顯抑制S180實體瘤的生長(P＜0.01)。2.3 對小鼠前列腺癌RM-1實體瘤的抑制作用 與空白組相比，NVB-lipo各劑量組和NVB-free 20 mg·kg-1劑量組可明顯抑制RM-1腫瘤生長;NVB-lipo 20 mg·kg-1與等劑量的NVB-free相比療效更強。NVB-lipo 5、10和20 mg·kg-1劑量組在給藥后第12天對小鼠前列腺癌RM-1實體瘤的相對腫瘤體積抑制率分別為45.9%、49.7%和74.4%，而NVB-free 20 mg·kg-1劑量組的相對腫瘤體積抑制率為38.3%。說明酒石酸長春瑞濱制成脂質(zhì)體后可以明顯改善長春瑞濱對小鼠前列腺癌RM-1實體瘤的治療效果，且抑瘤維持時間明顯優(yōu)于長春瑞濱。

Tab 1Effect of NVB-lipo on tumor volume(Relative tumor inhibition rate)of RM-1(±s，n=10)

Tab 1Effect of NVB-lipo on tumor volume(Relative tumor inhibition rate)of RM-1(±s，n=10)

*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs control;△P＜0.05，△△P＜0.01 vs NVB-free of the same dose.Data in()indicate inhibite rate(%)

-1-1 Control 0 372.0±126.0 378.0±119.4 373.6±95.4 372.6±Time/d NVB-lipo/mg·kg NVB-free/mg·kg 20 10 5 220 10 90.1 374.5±108.2 372.6±90.1 371.3±91.1 2 632.2±503.2(25.9)851.2±481.8 4 906.3±410.3*(33.5)624.4±306.0(28.0)714.4±229.8(16.6)682.2±401.9(20.1)499.0±394.5*(41.9)728.0±300.2(14.8)1360.0±622.9 6 896.6±387.7＊＊(59.0)938.9±496.6*(32.2)1017.5±284.7(25.6)902.7±443.9*(33.9)839.9±308.9*(38.8)1056.2±444.4(22.6)2182.8±949.9 8 1234.6±584.0＊＊(65.0)1311.1±700.7＊＊(41.0)1332.0±528.6＊＊(39.4)1482.5±602.3*(32.3)1323.2±614.9＊＊(39.9)1506.7±662.0*(31.2)3522.0±1674.1 10 1644.8±969.5＊＊△(72.0)1629.7±762.4＊＊△(54.6)1605.5±601.7＊＊(54.7)2602.1±1222.3(26.4)1933.9±1035.4＊＊(45.6)2641.6±1123.8(25.3)5867.2±2260.0 12 2411.2±1337.0＊＊△△(74.4)3026.5±1416.7＊＊△(49.3)3131.0±1249.5＊＊(47.0)4631.9±2298.0(21.3)3419.3±1736.8＊＊(42.2)4786.0±1804.0(18.7)4812.0±2293.2＊＊(49.7)5115.0±1995.7＊＊(45.9)7235.3±3635.3(23.3)5844.6±2582.5＊＊(38.3)7070.9±2636.8(25.0)9394.9±3273.5

3 討論

脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物的載體，可以減少藥物在正常組織的分布，增加藥物在腫瘤組織的蓄積，從而降低藥物毒性、改善藥物的治療指數(shù)，但并不是所有的脂質(zhì)體處方均可以改善療效，降低毒性。治療效果的改善依賴于動物模型、靶向效率和釋藥速率的交互作用［5］，因此開發(fā)脂質(zhì)體藥物必須對脂質(zhì)體處方進行認真評估。本研究證明長春瑞濱脂質(zhì)體和游離藥對小鼠的最大耐受劑量分別為35.6和26.7 mg·kg-1，和游離藥相比，長春瑞濱脂質(zhì)體可明顯抑制小鼠S180和前列腺癌RM-1實體腫瘤的生長。因此，酒石酸長春瑞濱脂質(zhì)體在提高療效的同時也降低了毒性，是一個具有開發(fā)潛力的藥物。

［1］ Okouneva T，Hill B T，Wilson L，Jordan M A.The effects of vinflunine，vinorelbine，and vinblastine on centromere dynamics［J］.Mol Cancer Ther，2003，2(5):427-36.

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［5］ Cui J X，Li C L，Guo W M，et al.Direct comparison of two pegylated liposomal doxorubicin formulations:Is AUC predictive for toxicity and efficacy［J］.J Control Release，2007，118(2):204-15.