GSTT1基因型和吸煙狀況與肺癌易感性關系

劉京男，周彩存，樸紅梅，安昌善*

(1.延邊大學附屬醫(yī)院呼吸內科，吉林延吉133000;2.上海市肺科醫(yī)院腫瘤科，上海市 200433)

不同個體對環(huán)境致癌劑的易感性存在明顯差異，這與腫瘤易感基因的結構和功能不同有密切關系。GSTT1基因有調節(jié)遺傳毒性物質的生物學效應，其多態(tài)性會影響人類患癌癥的危險性。GSTT1基因多態(tài)性與肺癌的關系存在差異［1－2］。本研究旨在通過檢測吸煙、非吸煙肺癌患者和正常人GSTT1基因多態(tài)性，探討GSTT1基因多態(tài)性與肺癌遺傳易感性的關系及GSTT1基因多態(tài)性和吸煙在肺癌易感性中的交互作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

肺癌組共100例(鱗癌29例，腺癌40例，腺鱗癌13例，小細胞肺癌18例)，未經放療和/或化療。對照組共135例，為健康人群。肺癌組及對照組均為漢族人，無遺傳性疾病。比較肺癌組和對照組的年齡、性別及吸煙狀況均無顯著性差異(表1)。

1.2 標本采集與保存方法

分別抽取肺癌患者及健康體檢者外周靜脈血3 mL及2 mL置于加有肝素的抗凝試管內，轉入4℃冰箱短期保存?zhèn)溆没蛑苯犹崛NA。

1.3 基因組DNA提取

采用血液基因組DNA提取試劑盒(上海超世生物科技有限公司)提取外周血DNA，取所提取的基因組DNA約5 μL進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.4 GSTT1基因檢測

合成GSTT1和內對照組β-Globin引物(北京賽百盛(SbS)基因技術有限公司合成)，配制PCR反應液。GSTT1基因 PCR反應條件:94℃預變性4 min，94 ℃ 變性30 s，56 ℃ 退火1 min，72 ℃ 延伸30 s，共30個循環(huán)，72℃再延伸7 min。取 PCR擴增產物10 μL在1.5%的瓊脂糖凝膠中進行電泳，經1%溴化乙錠(EB)染色，紫外光下觀測結果，并于凝膠掃描成像系統(tǒng)攝像保存。GSTT1基因產物大小為480 bp，內對照 β-Globin為268 bp，同時出現480 bp及268 bp兩條帶者即為GSTT1功能型基因，用GSTT1(+)表示;只出現268 bp一條帶者為GSTT1缺失型基因，用GSTT1(－)表示(圖1)。

1.5 統(tǒng)計學分析

圖1 GSTT1基因PCR擴增產物電泳圖Fig 1 Electrophresis photographs of PCR emplified products for GSTT1 gene

應用SPSS(12.0)軟件包χ2檢驗比較不同基因型在肺癌組及對照組的頻率分布，分層分析比較基因多態(tài)性與吸煙及肺癌易感性間的關系等，以比值比OR(odds ratio)和95%CI(可信區(qū)間)表示相對危險度。

2 結果

2.1 GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關系

肺癌組GSTT1(－)基因型的分布頻率為57%(57/100)顯著高于對照組的41.5%(56/135)(P＜0.05)?；貧w分析結果GSTT1(－)基因型顯著增加患肺癌的風險性(OR=1.919，95%CI=1.128～3.267，P＜0.05)。

2.2 GSTT1基因多態(tài)性與性別的關系

肺癌組中男性與女性GSTT1(－)基因型的分布頻率分別為59.6%(34/57)和53.5%(23/43)，無差異;對照組中男性與女性GSTT1(－)基因型的分布頻率分別為41.9%(31/74)和41.0%(25/6)，亦無差異。

2.3 GSTT1基因多態(tài)性和吸煙狀況與肺癌易感性的關系

攜帶GSTT1(－)基因型的吸煙者較不吸煙者患肺癌的風險顯著增加(P＜0.05);而攜帶GSTT1(+)基因型的吸煙者較不吸煙者患肺癌的風險無差異(表2)。

表1 肺癌組和對照組的一般資料Table 1 General information of lung cancer group and control

2.4 吸煙狀況和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關系

吸煙者攜帶GSTT1(－)基因型較攜帶GSTT1(+)基因型患肺癌的風險顯著增加;而不吸煙者攜帶GSTT1(－)基因型較攜帶GSTT1(+)基因型無增加患肺癌的風險性(表3)。

2.5 吸煙量和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關系

吸煙量＜400支年的人群中攜帶GSTT1(－)基因型者較攜帶GSTT1(+)基因型者患肺癌的風險性無增加;而吸煙量≥400支年的人群中攜帶GSTT1(－)基因型者較攜帶 GSTT1(+)基因型者患肺癌的風險顯著增加(表4)。

3 討論

肺癌的發(fā)生同時受吸煙、環(huán)境因素和腫瘤遺傳易感性的影響，個體對肺癌的遺傳易感性與機體對致癌物質的解毒能力密切相關。GSTT1基因是Ⅱ相代謝酶基因中重要的一種，對環(huán)氧化物及鹵代烷烴類有很強的解毒作用，基因多態(tài)性被認為與個體疾病的易感性有較大的相關性。GSTT1缺失基因型個體可能是由于基因缺失，不能催化體內許多潛在的毒性化學藥物、致癌劑和親脂性化合物等與還原型谷胱甘肽結合，不能進行致癌物的代謝減毒或代謝滅活，從而更易患肺癌。

表2 GSTT1基因多態(tài)性和吸煙狀況與肺癌易感性的關系Table 2 Synergetic interactions between GSTT1 genetic polymorphisms and smoking status on the susceptibility to lung cancer

表3 吸煙狀況和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關系Table 3 Synergetic interactions between smoking status and GSTT1 genetic polymorphisms on the susceptibility to lung cancer

表4 吸煙量和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關系Table 4 Relationship between GSTT1 genetic polymorphisms and susceptibility to lung cancer in defferent smoking doses

關于GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性關系的研究存在不同結果。本實驗結果肺癌組和對照組GSTT1(－)基因型的分布頻率有顯著差異，GSTT1基因缺失的個體與GSTT1基因陽性的個體相比，患肺癌的危險性增加了1.87倍，表明GSTT1基因缺失可作為判斷肺癌遺傳易感性有價值的指標，與文獻［3］報道相仿。關于GSTT1基因多態(tài)性和性別與肺癌易感性的關系報道較少。本實驗結果顯示，GSTT1(－)基因型的分布在正常人及肺癌不存在性別上的差異。關于GSTT1基因多態(tài)性和吸煙之間的交互作用與肺癌易感性關系的研究存在不同結果，認為GSTT1基因與吸煙對肺癌無明顯的交互作用［4］，也有報道GSTT1缺失基因型與吸煙協(xié)同增加患肺癌的風險［5］。本實驗結果顯示，吸煙與GSTT1(－)基因型間存在互交作用。從GSTT1基因多態(tài)性的角度分層分析探討其和吸煙量與肺癌易感性的關系，發(fā)現攜帶GSTT1(－)基因型并吸煙≥400支/年者較攜帶GSTT1(－)基因型并吸煙＜400支/年者患肺癌的風險增加，而攜帶GSTT1(+)基因型并吸煙≥400支/年者較攜帶GSTT1(+)基因型并吸煙＜400支/年者患肺癌的風險性無明顯差異，提示攜帶GSTT1(－)基因型且吸煙量越大者患肺癌的風險越高。GSTT1(－)基因型與吸煙之間存在交互作用以及GSTT1缺失基因型與重度吸煙相互協(xié)同增加肺癌風險的因素在肺癌的篩查及預防工作中有著重要的作用。肺癌的發(fā)生是多因素共同作用的結果，本研究只對單一的GSTT1基因型進行研究，具有一定的局限性，且由于缺乏研究對象毒物暴露水平等方面的詳細資料，對于其與肺癌發(fā)病之間的確切關系，仍有待進一步的研究。

［1］Schneider J，Bernges U，Philipp M，et al.GSTM1，GSTT1，and GSTP1 polymorphism and lung cancer risk in relation to tobacco smoking［J］.Cancer Lett，2004，208:65－74.

［2］曹燕飛，陳漢春，劉新發(fā)，等.中國湖南人群 GSTM1和GSTT1基因多態(tài)性與肺癌易感性關系的研究［J］.生命科學研究，2004，8:126 －132.

［3］Kumar M，Agarwal SK，Goel SK.Lung cancer risk in north Indian population:role of genetic polymorphisms and smoking［J］.Mol Cell Biochem，2009，322:73 －79.

［4］Lee KM，Kang D.CYP1A1，GSTM1，and GSTT1 polymorphisms，smoking，and lung cancer risk in a pooled analysis among Asian population［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2008，17:1120 －1126.

［5］姚武，王娜，吳擁軍，等.GSTM1、GSTT1基因缺失與肺癌易感性的關系.中國公共衛(wèi)生［J］.2006，22:51－53.