注射用頭孢替安與注射用氯諾昔康配伍穩(wěn)定性考察

方寶霞，蘇 翔，陸連英* ，朱 軍，艾學(xué)勇

頭孢替安是半合成的第二代頭孢菌素，臨床用于治療敏感菌所致的感染。氯諾昔康為新型非甾體抗炎藥，通過選擇性抑制環(huán)氧化酶-2 活性達(dá)到抗炎、鎮(zhèn)痛和解熱作用［1-2］。目前，臨床上常將鹽酸頭孢替安與氯諾昔康配伍用藥，用以預(yù)防術(shù)后感染與術(shù)后鎮(zhèn)痛。然而，此方法為經(jīng)驗性配伍用藥，其配伍液是否穩(wěn)定尚未見報道，且其安全性無確切的理論依據(jù)。因此，筆者根據(jù)臨床用藥濃度，參考有關(guān)文獻(xiàn)［3-9］，采用高效液相梯度洗脫法考察室溫下兩藥配伍液在0.9%氯化鈉注射液中的穩(wěn)定性，為臨床安全、合理用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DIONEX UltiMate 3000 高效液相色譜儀(德國戴安)，包括UltiMate 3000 四元低壓梯度泵、UltiMate 3000 二極管陣列檢測器、Chromeleon 色譜工作站;pHs-3C 型酸度計(上海華僑儀表廠);AEU-210 電子天平(日本島津)。

1.2 試藥 注射用鹽酸頭孢替安(哈藥集團(tuán)制藥總廠，批號:B201104312，規(guī)格:0.5 g/支)，注射用氯諾昔康(北京利祥制藥股份有限公司，批號:11070551，規(guī)格:8 mg/支)，氯諾昔康對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100663-200501)，頭孢替安對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:130565-200501)，0.9%氯化鈉注射液(四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號:A11052308-1)，磷酸二氫鉀(廣東汕頭西隴化工有限公司，分析純)，乙腈為色譜純，水為新制注射用水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱:Sinochrom ODS-BP(250 mm × 4.6 mm，5 μm)。以乙腈(A)-0.05 mol/L磷酸二氫鉀(B)為流動相。梯度洗脫程序:0 ～5 min，A 體積分?jǐn)?shù)為12%;6 ～14 min，A體積分?jǐn)?shù)為45%;15 ～21 min，A 體積分?jǐn)?shù)為12%。流速:0.8 mL/min;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:20 μL;測定波長分別為261、382 nm。

2.2 對照品儲備液的制備 分別精密稱取頭孢替安與氯諾昔康對照品適量，分別以流動相配制成濃度為520.0 μg/mL 頭孢替安與212.0 μg/mL氯諾昔康對照品儲備液，置4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 測定波長的選擇 在“2.1”項色譜條件下，通過二極管陣列檢測器對頭孢替安與氯諾昔康對照品溶液在200 ～600 nm 波長范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，由二極管陣列檢測器在200 ～600 nm 波長范圍內(nèi)的掃描圖譜得知，頭孢替安與氯諾昔康分別在261、382 nm 波長處有最大吸收。故將檢測波長分別定為261、382 nm。

2.4 系統(tǒng)適用性試驗 將上述對照品溶液等體積混合，在“2.1”項色譜條件下，進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。在此條件下，頭孢替安、氯諾昔康保留時間分別為6.8、12.7 min，頭孢替安與氯諾昔康的色譜峰理論塔板數(shù)均＞3 000，分離度＞1.5，專屬性良好，色譜圖見圖1。

圖1 HPLC 色譜圖

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取頭孢替安與氯諾昔康對照品儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0 mL 至10 mL 量瓶中，以流動相定容，混勻，制得不同濃度的頭孢替安對照品溶液與氯諾昔康對照品溶液。分別取上述溶液20 μL，在“2.1”項色譜條件下進(jìn)樣測定。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果頭孢替安回歸方程為 Y頭孢替安= 21.35 X頭孢替安- 0.42 (r =0.999 7);氯諾昔康回歸方程為Y氯諾昔康= 1.52 X氯諾昔康+0.21(r=0.999 5)。結(jié)果表明，頭孢替安在26.0 ～260.0 μg/mL、氯諾昔康在10.6 ～106.0 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 分別精密吸取104.0 μg/mL頭孢替安對照品溶液與42.4 μg/mL 氯諾昔康對照品溶液各20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積，結(jié)果頭孢替安與氯諾昔康峰面積的RSD 分別為1.15%、1.21%。

2.7 穩(wěn)定性試驗 配制頭孢替安與氯諾昔康樣品溶液，置于25 ℃下，分別于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 h，在上述色譜條件下進(jìn)樣20 μL，測定峰面積。結(jié)果頭孢替安與氯諾昔康峰面積RSD 分別為1.35%、1.26%。說明頭孢替安與氯諾昔康樣品溶液在4 h 內(nèi)保持穩(wěn)定(n=6)。

2.8 加樣回收率試驗 取已知含量的注射用頭孢替安與注射用氯諾昔康配伍液適量，精密加入高、中、低濃度的頭孢替安與氯諾昔康對照品溶液適量，混勻，分別用純化水分別稀釋1 倍與100 倍，在“2.1”項色譜條件下測定，記錄峰面積，并計算回收率，結(jié)果頭孢替安與氯諾昔康的回收率分別為99.83%、99.52%，見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.9 配伍穩(wěn)定性試驗

2.9.1 配伍液的制備 取注射用鹽酸頭孢替安1.0 g 與注射用氯諾昔康8 mg，以注射用水溶解后加入0.9%氯化鈉注射液中，定容至100 mL，搖勻，制得配伍液置于室溫條件下保存。

2.9.2 外觀與pH 值變化 取上述配伍溶液適量，室溫條件下，在0、1、2、3、4、6、8 h 用納氏比色管觀察顏色變化并測定溶液的pH 值。結(jié)果見表2。

2.9.3 相對百分含量變化 在上述時間間隔，取上述配伍液適量，用純化水分別稀釋100 倍與1倍，在“2.1”項色譜條件下進(jìn)樣測定，計算配伍液中頭孢替安與氯諾昔康的含量，以0 h 藥物含量為100%，計算各時間點(diǎn)相對百分含量，見表2。

表2 注射用頭孢替安與注射用氯諾昔康配伍后外觀、pH 值及含量變化(%)

3 討論

頭孢替安的極性較強(qiáng)，具親水性，在反相高效液相色譜法中，易被流動相洗脫;而氯諾昔康極性相對較弱，與固定相親和力強(qiáng)，不易被洗脫，保留時間長，經(jīng)反復(fù)測試流動性組成，無法在等度洗脫條件同時測定二者含量。為同時兼顧色譜選擇性和分析時間等因素，最終確定“2.1”項梯度洗脫程序。在此條件下，頭孢替安與氯諾昔康峰型較好，兩色譜峰在較短時間獲得很好的分離，理論塔板數(shù)高，符合含量測定要求。

注射用頭孢替安與注射用氯諾昔康在0.9%氯化鈉注射液中配伍后，在25 ℃條件下，混合液黃色澄明，未見氣泡及肉眼可見的沉淀生成。經(jīng)HPLC 法測定配伍液中兩組分的含量，在8 h 內(nèi)氯諾昔康含量無明顯變化，頭孢替安的含量呈下降趨勢，8 h 含量為80.8%。配伍液pH 值隨時間延長逐漸增大，溶液顏色隨時間延長逐漸加深。綜合試驗結(jié)果，為保障臨床用藥安全，注射用頭孢替安與注射用氯諾昔康在0.9%氯化鈉注射液中可配伍使用，但應(yīng)在4 h 內(nèi)用完。

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