硫磺多菌靈和惡霉靈不同比例混配對(duì)蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

王獻(xiàn)慧 ，梁志懷 ，魏 林 ，陳玉榮 ，張 屹

（1.中南大學(xué)研究生院隆平分院，湖南 長(zhǎng)沙 410125；2.湖南省植物保護(hù)研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125；3.湖南省西瓜甜瓜研究所，湖南 長(zhǎng)沙 410125；4.園藝作物病蟲(chóng)害治理湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410125）

蓮藕是集果、蔬、藥為一體的優(yōu)質(zhì)蔬菜，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。蓮藕腐敗病是蓮藕生產(chǎn)上的常見(jiàn)病害，主要危害地下莖；感病時(shí)，地上部葉片、葉柄、花蕾也會(huì)出現(xiàn)相關(guān)癥狀，通常會(huì)減產(chǎn)20%，嚴(yán)重的可達(dá)60%～80%，甚至絕收，給蓮藕生產(chǎn)造成較大的損失[2]。由于藕農(nóng)常習(xí)慣于周年和連年的重茬種植，該病的發(fā)生呈逐年加重趨勢(shì)。目前，蓮藕腐敗病的綜合防治措施有輪作、選用抗病品種、加強(qiáng)田間管理、藥劑防治等。但在市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)條件下，輪作難以實(shí)施，抗病品種的選育和推廣無(wú)配套技術(shù)，而田間管理措施對(duì)防病效果又不明顯[3]。因此，藥劑防治仍然是防治蓮藕腐敗病的主要手段，但常年使用同種農(nóng)藥，其作用位點(diǎn)單一，容易使病原菌產(chǎn)生抗藥性[4]。為了延緩或防止蓮藕腐敗病菌對(duì)藥劑產(chǎn)生抗藥性，選擇了硫磺多菌靈和惡霉靈進(jìn)行復(fù)配使用，研究其不同的復(fù)配比例對(duì)蓮藕腐敗病菌的防治效果，以期為生產(chǎn)中蓮藕腐敗病的防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：蓮藕腐敗病菌（F.oxysporum）菌株T1和T2，均從蓮藕腐敗病發(fā)病株上分離、純化獲得，培養(yǎng)于PDA固體培養(yǎng)基上待用。

供試藥劑：50%硫磺多菌靈WP和99%惡霉靈WP，均由威海韓孚生化藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 供試病菌培養(yǎng) 將分離純化的病原菌接種于直徑為8.5 cm的PDA固體培養(yǎng)基上，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（約6天），待菌落快長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿時(shí)，用無(wú)菌打孔器制備成直徑8 mm的菌餅備用。

1.2.2 含不同復(fù)配比例藥劑平板的制備 依據(jù)預(yù)試驗(yàn)各藥劑最低有效抑制濃度設(shè)置藥劑濃度梯度。用無(wú)菌水將各藥劑稀釋成10 mg/mL的母液，再根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)稀釋成各種所需濃度。硫磺多菌靈的濃度梯度為 1、2、4、8、16 μg/mL，惡霉靈的濃度梯度為 15、30、60、120、240 μg/mL?；旌纤巹┌戳蚧嵌嗑`與惡霉靈設(shè)置 1∶50、1∶25、1.5∶25、2∶25、3∶25 五個(gè)混配比例，其混合藥劑的濃度梯度設(shè)為4、8、16、32、64 μg/mL，每個(gè)濃度處理設(shè) 3 個(gè)重復(fù)，混合藥劑用母液配制，其中混劑的濃度=（混劑中硫磺多菌靈的質(zhì)量+混劑中惡霉靈的質(zhì)量）/混劑的總體積；以等量無(wú)菌水為對(duì)照。將各種藥劑按比例移取至盛有50 mL、溫度約為40～50℃的無(wú)菌PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，充分混勻后倒入培養(yǎng)皿中，制備成試驗(yàn)所需PDA平板。

1.2.3 兩種殺菌劑及其不同混配比例對(duì)蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定 在平板中央接種一塊菌餅，置于28℃條件下恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6 d后，用游標(biāo)卡尺十字交叉法測(cè)定各培養(yǎng)皿內(nèi)菌落的直徑。按公式：I=（D0-Dt）/D0×100%（I為菌絲生長(zhǎng)抑制率，D0為對(duì)照菌落增長(zhǎng)直徑，Dt為處理菌落增長(zhǎng)直徑），求抑菌率。其中D=D1-D2（D表示菌落增長(zhǎng)直徑，D1表示菌落直徑，D2表示菌餅直徑）。以藥劑濃度的對(duì)數(shù)為自變量x，以抑制率的幾率值為因變量y，運(yùn)用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，求出供試藥劑對(duì)蓮藕腐敗病菌的毒力回歸方程Y＝a+bX及相關(guān)系數(shù)（r）值，并由方程計(jì)算各供試藥劑的抑制中濃度（EC50），并根據(jù)Wadley法求出各混配比例的增效系數(shù)（SR）。增效系數(shù)（SR）＝混劑的 EC（th）50÷混劑的 EC50?；靹┑睦碚?EC（th）50＝（a+b）÷[（a÷A的EC50）＋（b÷B的EC50）]，式中A、B分別指硫磺多菌靈與惡霉靈這兩種藥劑，a、b分別為硫磺多菌靈和惡霉靈的混配比的各自分量。根據(jù)SR評(píng)價(jià)混劑的聯(lián)合作用：當(dāng)SR＞1.5時(shí)是增效作用；當(dāng)0.5≤SR≤1.5時(shí)是相加作用；當(dāng)SR＜0.5時(shí)為拮抗作用。根據(jù)增效系數(shù)（SR），再結(jié)合生產(chǎn)成本確定最佳配比。

2 結(jié)果和分析

2.1 各處理對(duì)蓮藕腐敗病菌菌絲生長(zhǎng)的影響

由表1可知，硫磺多菌靈與惡霉靈單劑及5種不同混配比例在設(shè)定的濃度范圍之內(nèi)，對(duì)病原菌絲的生長(zhǎng)均有一定的抑制作用。在設(shè)定的濃度范圍之內(nèi)，抑制效果隨著藥劑濃度的增加而增加，但是各處理對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制效果存在一定的差異。從菌絲凈生長(zhǎng)量和抑制率可以看出，硫磺多菌靈單劑的抑制效果最好，硫磺多菌靈與惡霉靈混配比例為2∶25和3∶25時(shí)，抑制效果次之。50%硫磺多菌靈的試驗(yàn)濃度為16 μg/mL時(shí)，T1和T2兩個(gè)菌株的菌絲凈生長(zhǎng)量分別為0.04 cm和0.08 cm，其抑制率分別是99.5%和99.0%。硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為 2∶25，試驗(yàn)濃度為 16 μg/mL 時(shí)，T1和T2兩個(gè)菌株的菌絲凈生長(zhǎng)量分別為0.6 cm和0.4 cm，其抑制率分別是92.2%和94.8%。硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為3∶25，試驗(yàn)濃度為16 μg/mL時(shí)，T1和T2兩個(gè)菌株的菌絲凈生長(zhǎng)量分別為0.2 cm和0.6cm，其抑制率分別是97.4%和92.2%。試驗(yàn)結(jié)果還表明，同一處理對(duì)2個(gè)蓮藕腐敗病菌的抑制效果較為一致。

2.2 各處理對(duì)蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力比較

各藥劑處理對(duì)蓮藕腐敗病菌的毒力回歸方程、抑制中濃度（EC50）、相關(guān)系數(shù)（r）及增效系數(shù)（SR）見(jiàn)表2。從EC50值可知，各處理對(duì)蓮藕腐敗病菌均有一定的毒力。其中50%硫磺多菌靈單劑對(duì)蓮藕腐敗病菌的抑制效果最好，對(duì)兩個(gè)菌株的EC50值分別為1.49 μg/mL和1.58 μg/mL；其次混配比例為2∶25的處理對(duì)兩個(gè)菌株的EC50值分別為4.62 μg/mL和 4.42 μg/mL，混配比例為 3∶25的處理對(duì)兩個(gè)菌株的 EC50值分別為 1.80 μg/mL 和 5.89 μg/mL。毒力最低的是99%惡霉靈單劑，其對(duì)兩個(gè)菌株的EC50值分別為 115.60 μg/mL 和 100.20 μg/mL。比較各混劑的增效系數(shù)可知，5個(gè)混配比例對(duì)蓮藕腐敗病菌的抑制效果均表現(xiàn)為增效作用，其中硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為2∶25和3∶25時(shí)，增效作用最明顯。

表1 各處理對(duì)蓮藕腐敗病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果

3 小結(jié)與討論

通過(guò)菌絲體生長(zhǎng)速率測(cè)定，比較了硫磺多菌靈與惡霉靈以及5種不同比例混劑對(duì)蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明，硫磺多菌靈與惡霉靈的5種混配比例對(duì)蓮藕腐敗病菌的抑制效果均表現(xiàn)為增效作用，即均能提高對(duì)腐敗病菌的室內(nèi)毒力。其中硫磺多菌靈與惡霉靈的混配比例為2∶25和3∶25的處理，增效作用最明顯，抑菌效果最好。此外，這兩種藥劑混配還能有效降低成本，擴(kuò)大藥劑的防治譜，而且還有利于阻止或延緩蓮藕腐敗病菌抗藥性的產(chǎn)生[5-6]。這可能是這兩種殺菌劑的作用機(jī)制不同所致。比較5種混劑的抑制中濃度及增效系數(shù)，表明2∶25和3∶25的硫磺多菌靈與惡霉靈混配比例為最佳配比。

表2 各處理對(duì)蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力比較

試驗(yàn)結(jié)果還表明，不同發(fā)病組織上分離獲得的蓮藕腐敗病菌株對(duì)同一種混配供試藥劑敏感性相似，這為同一施用藥劑（單劑或混配）應(yīng)用于不同種植區(qū)防治蓮藕腐敗病提供了理論依據(jù)。該試驗(yàn)只進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定，供試的兩種藥劑混配對(duì)蓮藕腐敗病的田間防治效果還有待于進(jìn)一步田間應(yīng)用試驗(yàn)。

[1]羅海莉，李 潔，嚴(yán)守雷，等.蓮藕貯藏期主要致病真菌分離鑒定及其致病相關(guān)酶酶學(xué)特征研究[J].長(zhǎng)江蔬菜，2011，10（16）：68-72.

[2]梁志懷，魏 林，成燕清，等.不同殺菌劑對(duì)蓮藕腐敗病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定及田間防治效果[J].長(zhǎng)江蔬菜，2011，10（16）：60-63.

[3]丁愛(ài)云，宋衛(wèi)國(guó)，時(shí)呈奎，等.蓮藕腐敗病的發(fā)生和藥劑毒力測(cè)定[J].農(nóng)藥，2002，41（6）：32-33.

[4]杜宜新，楊秀娟，阮宏椿，等.幾種殺菌劑及其混配對(duì)香蕉枯萎病菌的毒力測(cè)定[J].農(nóng)藥，2008，47（10）：764-766.

[5]成家壯.植物病原真菌的抗藥性與殺菌劑的混配[J].廣州化工，2008，36（4）：1-5.

[6]陳 軍，高國(guó)平，張 偉，等.6種殺菌劑及其混配對(duì)香栓孔菌的室內(nèi)毒力測(cè)定[J].西北農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，27（1）：129-131.