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    航天誘變復(fù)合菌劑發(fā)酵生產(chǎn)馬鈴薯渣菌體蛋白飼料研究

    2012-07-10 08:49:04張宗舟
    湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年11期
    關(guān)鍵詞:白地黑曲霉假絲

    張宗舟 ,張 揚(yáng) ,趙 慧

    (1.天水師范學(xué)院生命科學(xué)與化學(xué)學(xué)院,甘肅 天水 741001;2.天水師范學(xué)院物理與信息科學(xué)學(xué)院,甘肅 天水 741001;3.天水師范學(xué)院工學(xué)院,甘肅 天水 741001)

    馬鈴薯是最有發(fā)展前景的高產(chǎn)經(jīng)濟(jì)作物之一,馬鈴薯的種薯及各種加工產(chǎn)品已成為全球經(jīng)濟(jì)貿(mào)易中的重要組成部分[1-2]。2009年我國(guó)的馬鈴薯年產(chǎn)量已突破8 000萬(wàn)t,除50%用于鮮食、留種和飼用外,其余多用于馬鈴薯淀粉的加工[3]。馬鈴薯淀粉產(chǎn)業(yè)的發(fā)展帶動(dòng)了馬鈴薯主產(chǎn)區(qū)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,同時(shí)也產(chǎn)生了大量的鮮薯渣。薯渣中自帶菌多,不易儲(chǔ)存、運(yùn)輸,且易腐爛變質(zhì)產(chǎn)生惡臭,造成環(huán)境污染。倘若烘干則成本過(guò)高,增加企業(yè)負(fù)擔(dān),因此通常直接作為飼料或當(dāng)成廢渣作掩埋處理。隨著人們對(duì)環(huán)保問(wèn)題的日益重視,薯渣的開發(fā)利用已成為研究的焦點(diǎn)[4-7],對(duì)薯渣進(jìn)行綜合開發(fā)利用,不僅能減少環(huán)境污染,解除馬鈴薯淀粉加工業(yè)的后顧之憂,而且具有較好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

    馬鈴薯渣主要含有水、細(xì)胞碎片、殘余淀粉顆粒和薯皮細(xì)胞或細(xì)胞結(jié)合物。鮮薯渣中含水量高達(dá)90%左右,其水分被嵌入在殘余完整細(xì)胞中,需要通過(guò)細(xì)胞膜交換到外界除去,表現(xiàn)出典型膠體的理化特性,不具備液態(tài)流體性質(zhì)。其化學(xué)成分包括淀粉、纖維素、半纖維素、果膠、游離氨基酸、寡肽、多肽和灰分,其中殘余淀粉含量高達(dá)35%(以干基計(jì)),纖維素、果膠含量也較高,分別達(dá)到21%和17%(以干基計(jì))。筆者以馬鈴薯渣為原料,利用航天誘變獲得的黑曲霉突變株ZM-8、啤酒酵母突變株YB-6、白地霉、熱帶假絲酵母進(jìn)行固體共發(fā)酵生產(chǎn)菌體蛋白,以期將馬鈴薯渣轉(zhuǎn)化為高蛋白飼料,提高馬鈴薯渣的蛋白質(zhì)含量及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,開辟飼料新資源,避免薯渣對(duì)環(huán)境的污染。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 供試菌株 試驗(yàn)菌株為黑曲霉突變株ZM-8(Asp.niger ZM-8)、釀酒酵母 YB-6(Sac.cerevisiae YB-6)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、白地霉(Geotrichum candidum)。其中黑曲霉ZM-8是將黑曲霉搭載于返回式航天器上,經(jīng)空間特殊的環(huán)境條件誘變發(fā)生變異后,通過(guò)微生物學(xué)特性研究和變種的分離、培養(yǎng),最終選育出的菌株,其糖化酶活力最高達(dá)到 21 000 U/g,纖維素酶活力達(dá)到5 600 U/g以上。由于有較高的纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶活力,該菌株保存在中國(guó)CCTCC,保存號(hào)CCTCC-NO:M209125。釀酒酵母YB-6同樣是航天誘變選育獲得。

    1.1.2 供試原料 馬鈴薯渣由秦安縣淀粉廠提供,65℃烘干,粉碎過(guò)40目篩備用。麩皮為市售。

    1.1.3 培養(yǎng)基 (1)麥麩培養(yǎng)基:將麩皮和水按1∶1混合均勻后,裝入250 mL的三角瓶,每瓶裝50 g;(2)麥芽汁液體培養(yǎng)基:將麥芽汁濾液稀釋到5波美度,pH值約6.4;(3)麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基:將麥芽汁液體培養(yǎng)基加入2%瓊脂即成;(4)固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基:干馬鈴薯渣70 g,麩皮30 g,加自來(lái)水110 mL混合、拌勻后,再加1%KH2PO4以及不同配比的白糖、硫銨、尿素、三十烷醇。上述培養(yǎng)基均需在1.0×105Pa、121℃滅菌 30 min,pH 值自然。

    1.1.4 儀 器 電子天平、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、手提壓力蒸氣滅菌鍋、CS213電熱恒溫培養(yǎng)箱(重慶試驗(yàn)設(shè)備廠)、THZ-82A臺(tái)式恒溫振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠)。

    1.2 方法

    1.2.1 菌種培養(yǎng) (1)黑曲霉突變株ZM-8:將黑曲霉ZM-8母種接到PDA斜面培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)72 h,再接種到250 mL三角瓶麩皮培養(yǎng)基上,28℃擴(kuò)大培養(yǎng)72 h。(2)釀酒酵母YB-6:將釀酒酵母YB-6母種接種到麥芽汁瓊脂斜面培養(yǎng)基上,28℃培養(yǎng)72 h,再接種到250 mL麥芽汁液體搖瓶培養(yǎng)基中,28℃、124 r/min 擴(kuò)大培養(yǎng) 72 h。(3)白地霉:將白地霉母種接到PDA斜面培養(yǎng)基上,8℃培養(yǎng)72 h,再接種到250 mL三角瓶麩皮培養(yǎng)基,28℃擴(kuò)大培養(yǎng)72 h。(4)熱帶假絲酵母:同白地霉的擴(kuò)大培養(yǎng)方式。

    1.2.2 發(fā)酵工藝 (1)原料配制:干馬鈴薯渣140 g、麥麩 60 g、水 220 mL,拌勻,潤(rùn)水。(2)蒸煮:將原料放置蒸煮鍋中蒸30 min后出鍋,并加入不同比例的尿素、白糖、磷酸二氫鉀和三十烷醇等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)復(fù)合菌劑的制備與接種:將用三角瓶麩皮固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)得到的航天誘變菌種黑曲霉ZM-8和白地霉,以及用麥芽汁液體培養(yǎng)基搖瓶培養(yǎng)得到的熱帶假絲酵母、啤酒酵母YB-6按不同比例混合制成太空復(fù)合菌劑。再將制成的太空復(fù)合菌劑于30℃接種到蒸煮好的原料中,拌勻。(4)堆制與培養(yǎng):接種航天誘變復(fù)合菌劑之后,堆制24 h(堆溫≤36℃),期間不斷攪拌,24 h后原料上長(zhǎng)滿菌絲體,顏色為灰白色。將原料上發(fā)酵盤,培養(yǎng)(溫度≤36℃),48 h后培養(yǎng)結(jié)束。(5)出料與烘干:將培養(yǎng)好的半成品從發(fā)酵盤中移出,于烘干室進(jìn)行烘干。烘干溫度為100℃,時(shí)間控制在3 h以內(nèi),水分控制在5%~7%為宜。(6)粉碎與質(zhì)檢:烘干后降溫,粉碎,進(jìn)行質(zhì)檢。粗蛋白的測(cè)定采用GB/T 6434-94凱氏定氮法。馬鈴薯渣發(fā)酵工藝如圖1所示。

    圖1 發(fā)酵工藝流程

    1.2.3 發(fā)酵條件的優(yōu)化 (1)多菌復(fù)配適宜配比的確定:以培養(yǎng)基中黑曲霉 ZM-8(A)、釀酒酵母(B)、熱帶假絲酵母(C)、白地霉(D)為考察因素,選用四因素三水平L9(34)正交表(表1),設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),自然pH值發(fā)酵,低溫烘干后分析粗蛋白含量。

    表1 正交試驗(yàn)因素水平 (g)

    (2)培養(yǎng)基配方中各營(yíng)養(yǎng)元素含量的確定:以培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)成分白糖(A)、硫銨(B)、尿素(C)、三十烷醇(D)為考察因素,設(shè)計(jì)四因素三水平正交試驗(yàn),選用L9(34)正交表(表2),自然pH值發(fā)酵,低溫烘干后分析粗蛋白含量。

    表2 正交試驗(yàn)因素水平

    1.2.4 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS軟件對(duì)測(cè)定的數(shù)據(jù)進(jìn)行四因素三水平方差分析和正交試驗(yàn)極差分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 多菌復(fù)配不同配比對(duì)產(chǎn)物中粗蛋白含量的影響

    由表3極差分析可知,各因素對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白含量影響的主次順序?yàn)锽>C>D>A,即釀酒酵母對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白含量的影響最大,其次是熱帶假絲酵母、白地霉菌,最后是黑曲霉突變株ZM-8;各水平的最優(yōu)水平組合為A3B1C2D3,即釀酒酵母1.5 g、熱帶假絲酵母2.0 g、白地霉菌2.5 g、黑曲霉突變株ZM-8 2.0 g,在此條件下固體發(fā)酵馬鈴薯渣,產(chǎn)物中粗蛋白含量可達(dá)32.1%。

    表3 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

    2.2 不同培養(yǎng)基配方對(duì)產(chǎn)物中粗蛋白含量的影響

    由表4極差分析可知,各因素對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白含量的影響的主次順序是B>D>C>A,即硫胺對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物中粗蛋白含量的影響最大,其次是三十烷醇、尿素,最后是白糖;各水平的最優(yōu)水平組合為A1B2C2D1,即白糖 4 g、硫銨 7 g、尿素 4 g、三十烷醇2.5 mg/L,在此優(yōu)化條件下發(fā)酵馬鈴薯渣,產(chǎn)物中粗蛋白含量可達(dá)32.5%。

    表4 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

    3 小 結(jié)

    (1)利用航天誘變獲得的優(yōu)良菌種——黑曲霉ZM—8和啤酒酵母YB-6、熱帶假絲酵母和白地霉復(fù)配制成的復(fù)合菌劑,在馬鈴薯渣的培養(yǎng)基上共發(fā)酵,可以獲得蛋白質(zhì)含量較高的菌體蛋白飼料(粗蛋白含量為32.1%),粗蛋白含量提高了5.84倍(原料中粗蛋白5.5%)。航天復(fù)合菌劑的最優(yōu)配比為:釀酒酵母YB-6 1.5 g、熱帶假絲酵母2.0 g、白地霉菌2.5 g,黑曲霉突變株ZM-8 2.0 g。這說(shuō)明了利用復(fù)合菌合成菌體蛋白的效果比單一菌種要好,且利用航天誘變來(lái)獲得優(yōu)良的微生物變異種,并將其用于飼料菌體蛋白培養(yǎng)的方法行之有效。

    (2)利用航天誘變選育出的混合菌種發(fā)酵馬鈴薯渣,通過(guò)正交試驗(yàn)獲得了適宜的培養(yǎng)基配方,即白糖4 g、硫銨7 g、尿素4 g、三十烷醇2.5 mg/L。該配方可使產(chǎn)物中粗蛋白的含量達(dá)32.5%,試驗(yàn)結(jié)果較好。

    (3)馬鈴薯渣經(jīng)航天誘變混合菌種共發(fā)酵獲得的菌體蛋白飼料,纖維素含量降低,粗蛋白含量顯著提高,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值增加。該方法在生產(chǎn)中推廣,可以提高馬鈴薯渣的利用價(jià)值,充分利用資源,減輕環(huán)境污染,能帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)、生態(tài)效益。

    [1]戴亨仁,吳建軍,韋祿春,等.江西紅壤區(qū)馬鈴薯高產(chǎn)、高效、優(yōu)質(zhì)綜合栽培技術(shù)[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,22(2):74-76.

    [2]Sun J,Li J P.Influence of climate conditions on potato yield and studies on the forecasting model of potato yield[J].Agricultural Science&Technology,2010,11(4):121-123,129.

    [3]陳佳寧,王 娟,李立芹.馬鈴薯試管薯誘導(dǎo)體系的研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(23):12377-12379.

    [4]張博潤(rùn).微生物發(fā)酵農(nóng)作物秸稈生產(chǎn)蛋白飼料的研究與應(yīng)用[J].微生物學(xué)報(bào),2000,27,(4):291-293.

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    [6]鄔敏辰,李江華,鄔顯章.黑曲霉固態(tài)培養(yǎng)生產(chǎn)纖維素酶的研究[J].釀酒,1997,(6):5-8.

    [7]王玉萬(wàn),徐文玉.木質(zhì)纖維素固體基質(zhì)發(fā)酵物中半纖維素、纖維素和木質(zhì)素的定量分析程序 [J].微生物學(xué)通報(bào),1987,14(2):81-84.

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