薄荷油對(duì)小鼠肝腎損傷的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究

李 枝，李 進(jìn)，李世開(kāi)，和海燕，師 濤，張 慶，陳海濱

（1.大理學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，云南大理 671000；2.大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南大理 671000）

薄荷在中醫(yī)藥中有較好的功效〔1〕，其中含有豐富芳香的薄荷油〔2〕，傳統(tǒng)認(rèn)為無(wú)毒性而廣泛用于牙膏等生活日用品之輔料，民間多以調(diào)味和菜食而廣泛大劑量食用，近期卻有大量食用薄荷油中毒的報(bào)道。為了掌握其對(duì)肝腎等重要器官的毒害作用，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)不同劑量對(duì)分組小白鼠實(shí)施灌胃，測(cè)定致死量并解剖觀察肝、腎器官的病理形態(tài)改變，以確定薄荷油的毒性及其量效關(guān)系，對(duì)指導(dǎo)合理量食用、醫(yī)藥的劑量使用具有重要意義。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)藥物100%薄荷油，由實(shí)驗(yàn)室制取。

1.2儀器電子天平，顯微鏡，全能型脫水機(jī)，解剖器械。

1.3動(dòng)物昆明小白鼠，同齡雌雄各半，由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，（20±2）g。

1.4方法

1.4.1 薄荷油的提取

1.4.1.1 原理 薄荷揮發(fā)油與水不互溶。當(dāng)受熱后，二者蒸氣壓的總和與大氣壓相同時(shí)，混合液即開(kāi)始沸騰，繼續(xù)加熱則揮發(fā)油可隨水蒸氣蒸餾出來(lái)，冷卻靜置，即可分離〔3〕。

1.4.1.2 提取方法 水蒸氣蒸餾法〔4〕提取，稱取粉碎好的薄荷200 g，置揮發(fā)油提取器中，加水1 000 mL，按《中國(guó)藥典》2000版附錄XD揮發(fā)油測(cè)定法提取揮發(fā)油。蒸餾6 h，收集薄荷油。靜置分層，用無(wú)水硫酸鈉脫水，濾紙過(guò)濾。

1.4.2 灌胃和解剖觀察 為了能達(dá)到藥物在有效時(shí)間范圍內(nèi)造成器官損傷的效果，進(jìn)行了試探性實(shí)驗(yàn)測(cè)定致死最小量。給藥劑量為1.00 mL/10 g的小鼠均在給藥半小時(shí)后死亡。當(dāng)給藥劑量降至0.05 mL/10 g時(shí)，小鼠給藥后，立即出現(xiàn)呼吸加快后減慢到呼吸停止，4只小鼠大約30 min后陸續(xù)死亡，最短死亡時(shí)間為給藥后42 min。當(dāng)給藥量降至0.005 mL/10 g時(shí)，小鼠癥狀減輕，但仍有部分小鼠給藥30 min后死亡。死亡小白鼠均進(jìn)行解剖，制片并鏡下觀察。

按照試探性實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果設(shè)計(jì)急性實(shí)驗(yàn)，如下：取小白鼠50只，體重相近（20±2）g，雌雄各半，隨機(jī)分為10組，其中1組空白對(duì)照組未灌胃，其他9組用100%薄荷油的不同劑量灌胃，觀察并記錄一般狀況和死亡情況等臨床過(guò)程，24 h后全部處死，解剖后取肝、腎作常規(guī)HE石蠟切片染色，光學(xué)顯微鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化。不同給藥劑量與切片檢查情況對(duì)照。見(jiàn)表1。

表1 小鼠1次灌胃不同劑量薄荷油對(duì)肝、腎組織形態(tài)的病理分級(jí)

2 結(jié)果

2.1不同劑量灌胃后小白鼠臨床改變按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)不同劑量灌胃小白鼠，觀察24 h。小劑量組（0.001～0.002 5 mL/10 g）小鼠給藥30 min后均出現(xiàn)驚厥，部分小鼠出現(xiàn)步履蹣跚，行走易向一側(cè)摔倒，隨著時(shí)間推移，癥狀緩解，部分小鼠死亡。中劑量組（0.003～0.003 5 mL/10 g）小鼠給藥30 min后明顯驚厥，出現(xiàn)步履蹣跚，行走易向一側(cè)摔倒，行動(dòng)遲緩，氣息微弱，部分可見(jiàn)抱腹現(xiàn)象，大多小鼠的上述癥狀隨著時(shí)間推移在1～2 h后得到緩解。劑量較大組（0.004 mL/10 g～0.005 mL/10 g） 小鼠大多30 min后出現(xiàn)異常反應(yīng)且陸續(xù)死亡。各劑量組均可見(jiàn)出現(xiàn)異常反應(yīng)的小鼠逐漸恢復(fù)正常。死亡小鼠解剖后肉眼檢查可見(jiàn)肝臟有不同程度的顏色變深、表面粗糙等，腎臟無(wú)明顯變化。具體死亡情況：空白組小鼠死亡數(shù)為0；薄荷油各組按劑量從低到高的死亡數(shù)依次為：0、1、3、3、2、4、3、5、5、5。第5、8、9、10組小鼠在給藥后分別立即死亡2、1、4、5只，剩余實(shí)驗(yàn)組小鼠部分陸續(xù)死亡，其余小鼠24 h之后仍活著。

2.2不同劑量灌胃后小白鼠病理形體改變

2.2.1 不同劑量灌胃后小白鼠肝臟病理形體改變光鏡下觀察，空白組及低劑量第2組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完好，肝細(xì)胞未見(jiàn)明顯變性、壞死及肝血竇改變。低劑量組（3、4、5組）：肝小葉結(jié)構(gòu)尚正常，肝細(xì)胞可見(jiàn)水樣變性，細(xì)胞體積增大，胞漿變得透亮、淡染。中等劑量組（6、7組）：可見(jiàn)肝細(xì)胞水樣變性，細(xì)胞體積增大，胞漿變得透亮、淡染，偶見(jiàn)脂肪變性細(xì)胞，肝索不明顯，肝小葉結(jié)構(gòu)不清，肝細(xì)胞排列混亂。高劑量組（8、9、10組）肝組織有顯著性損傷：肝小葉結(jié)構(gòu)不清偶見(jiàn)壞死灶及炎性浸潤(rùn)，大片肝細(xì)胞呈現(xiàn)脂肪變性，胞漿內(nèi)圓形脂肪滴擠壓細(xì)胞核變形趨居一側(cè)，可見(jiàn)部分肝細(xì)胞氣球樣變及核溶解現(xiàn)象。見(jiàn)圖1～2。

圖1 肝細(xì)胞水腫（HE染色，10×40倍）

圖2 肝細(xì)胞脂肪變性（HE染色，10×10倍）

2.2.2 不同劑量灌胃后小白鼠腎臟病理形體改變光鏡下觀察，空白組及低劑量第2組腎組織切片顯示：腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞水腫等病理改變，管腔輪廓清晰。低劑量組（3、4、5組）：腎組織未見(jiàn)異常；中等劑量組（6、7組）：腎小管上皮細(xì)胞見(jiàn)輕度水腫及破壞，輪廓不清，相互融合。高劑量組（8、9、10組）：腎組織出現(xiàn)腎小管上皮細(xì)胞明顯腫脹，細(xì)胞體積明顯增大，胞漿淡染，可見(jiàn)絲狀淡染物質(zhì)。部分腎小管管腔輪廓不清，相對(duì)變窄，腔內(nèi)偶見(jiàn)脫落的上皮細(xì)胞及細(xì)胞核溶解現(xiàn)象。見(jiàn)圖3。

圖3 腎小管上皮細(xì)胞水舯（HE染色，10×40）

3 討論

薄荷在生活中應(yīng)用廣泛，其價(jià)值受到青睞，對(duì)薄荷油的研究也日益增多〔5〕，但對(duì)其毒性研究較少，尤其腎毒性的研究甚少。Ilene B.Anderson等〔6〕報(bào)道過(guò)薄荷油中毒的病例，其中毒主要表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肝和腎方面。陳光亮等〔7〕已在小鼠薄荷油急性毒性實(shí)驗(yàn)中證實(shí)：薄荷油有中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝毒性。對(duì)肝臟的損傷多有報(bào)道〔8〕，但對(duì)腎臟的損傷研究較少，為進(jìn)一步了解其毒性作用，彌補(bǔ)該藥對(duì)腎臟損傷的空缺，進(jìn)行本次研究，從而指導(dǎo)薄荷油的安全使用。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)小白鼠灌胃較大劑量（大于0.004 mL/10 g）30 min后，小鼠出現(xiàn)步履蹣跚，行動(dòng)遲緩，易向一側(cè)摔倒，呼吸急促并有部分死亡。隨著劑量變大，小鼠死亡速率和死亡率呈增大趨勢(shì)。小劑量組某些小鼠亦可在給藥30 min后出現(xiàn)死亡，可能是個(gè)體對(duì)薄荷油的敏感性存在差異，亦可能是在灌胃過(guò)程中人為因素導(dǎo)致的。另外，有資料表明內(nèi)服少量薄荷油有中樞興奮作用，但超過(guò)一定量時(shí)對(duì)中樞神經(jīng)起抑制作用〔9〕。灌胃小劑量薄荷油即可使小鼠30 min后出現(xiàn)驚厥，表現(xiàn)為中樞神經(jīng)興奮。30 min后出現(xiàn)步履蹣跚，行動(dòng)遲緩，易向一側(cè)摔倒，類似醉酒狀態(tài)等異常反應(yīng)，可能是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，血藥濃度升高到一定程度后，薄荷油發(fā)揮中樞抑制作用的結(jié)果。顯微鏡下觀察，不同劑量薄荷油對(duì)小鼠肝臟和腎臟的病理?yè)p傷程度不同，采用灌胃方法給予小白鼠大劑量薄荷油時(shí)，肝細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重水腫、脂肪變性和壞死等改變，小劑量時(shí)變化不明顯。腎損傷均不明顯，大劑量時(shí)可見(jiàn)腎小管細(xì)胞水腫。出現(xiàn)上述病理改變的原因可能是薄荷油能夠引起肝、腎細(xì)胞內(nèi)某些代謝酶變性〔10〕，或是代謝后產(chǎn)生了能夠損傷肝、腎細(xì)胞的毒性物質(zhì)，具體毒理機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。大量資料表明，人體低劑量服用薄荷油并無(wú)毒性作用，日常生活及臨床應(yīng)用中只要合理控制劑量并不會(huì)產(chǎn)生明顯的急性中毒，從而有效、安全地利用其藥用價(jià)值。一次大劑量服用本品可產(chǎn)生一系列的毒性作用，尤以中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝毒性顯著，并對(duì)腎臟有輕度毒性，所以在使用過(guò)程中要謹(jǐn)慎。對(duì)薄荷油毒性作用的掌握有利于指導(dǎo)合理量食用及醫(yī)藥劑量的使用。

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