Survivin與PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義

賀榮芳，趙 強，謝黎明，龔邵新，胡義艷，張小麗，陽 帥，唐運蓮

(1.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，湖南 衡陽 421001；2.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，湖南 衡陽 421001；3.南華大學(xué)腫瘤研究所，湖南 衡陽 421001)

淋巴瘤是指來源于淋巴細(xì)胞及其前體細(xì)胞的惡性腫瘤，在我國占所有惡性腫瘤的3%～4%，且近年來其發(fā)病率呈明顯上升趨勢。惡性淋巴瘤種類繁多，T細(xì)胞與B細(xì)胞淋巴瘤在病理形態(tài)、免疫表型、臨床特征、治療方法和預(yù)后等方面都有很大差別。T細(xì)胞淋巴瘤在西方國家比較少見，而在我國卻比較常見。Survivin是凋亡抑制蛋白家族中分子量最小的一員，被認(rèn)為是迄今發(fā)現(xiàn)最強的凋亡抑制因子。研究表明Survivin在多種腫瘤中異常高表達(dá)，且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)[1-2]。PLK1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，具有調(diào)控細(xì)胞周期與凋亡、促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展等多種作用。PLK1在多種腫瘤組織中過表達(dá)，且與腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后差顯著相關(guān)，已成為腫瘤診治的新靶點。最新研究表明皮膚T細(xì)胞淋巴瘤中存在PLK1過表達(dá)[3]。在其他部位及其他類型的T細(xì)胞淋巴瘤中是否也存在PLK1蛋白過表達(dá)，尚未見相關(guān)文獻(xiàn)報道。Survivin和PLK1因均與細(xì)胞周期與凋亡調(diào)控有關(guān)，且均作用于G2/M期而被學(xué)者們所關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)在肝癌細(xì)胞株BEL-7402中用RNA干擾技術(shù)抑制PLK1的表達(dá)后，細(xì)胞中Survivin蛋白表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞G2/M期阻滯[4]。Feng等[5]在食管鱗狀細(xì)胞癌中的研究也提示PLK1可能通過Survivin而發(fā)揮其抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。但二者在T細(xì)胞淋巴瘤中的作用及相互關(guān)系尚未見文獻(xiàn)報道。本研究旨在探討T細(xì)胞淋巴瘤組織中Survivin、PLK1蛋白的表達(dá)，并探討其表達(dá)與各臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系及二者表達(dá)之間的相關(guān)性，為進(jìn)一步闡明T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制及預(yù)后判斷提供實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2000-2011年南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科經(jīng)病理組織學(xué)及免疫組化標(biāo)記確診為T細(xì)胞淋巴瘤的患者50例，男30例，女20例，年齡13～78歲，中位年齡45歲?；颊吲R床、病理及實驗室資料完整。病理類型和惡性程度按WHO(2008年)的標(biāo)準(zhǔn)分類。臨床分期按AnnArbor分期標(biāo)準(zhǔn)。50例T細(xì)胞淋巴瘤患者中按年齡分類，45歲及以上者36例，45歲以下者14例；按發(fā)生部位分類，結(jié)內(nèi)16例，結(jié)外34例；按惡性程度分類，高侵襲性4例，侵襲性26例，惰性20例；按臨床分期分類，Ⅰ和Ⅱ期者33例，Ⅲ和Ⅳ期者17例。另取30例淋巴結(jié)反應(yīng)性增生(RH)患者作為對照組，男16例，女14例，年齡8～74歲，中位年齡38歲。

1.2 方法 所有病理組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，每例均行蘇木精-伊紅(HE染色)和SP法免疫組織化學(xué)染色。0.01 MPBS(pH 7.4)液代替一抗作陰性對照。所用Survivin、PLK1抗體均為鼠抗人單克隆抗體均購自博奧森生物技術(shù)有限公司，通用型SP試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑均購自北京中杉生物技術(shù)公司，染色步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，采用χ2檢驗，Survivin及PLK1蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)性分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Survivin和PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤及反應(yīng)性增生淋巴組織中的表達(dá) Survivin蛋白陽性著色主要定位于細(xì)胞核中，Survivin在T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)陽性率為70.0%(35/50)，顯著高于反應(yīng)性增生淋巴組織(43.3%，13/30)(χ2=5.486，P＜0.05)。PLK1蛋白陽性著色定位于細(xì)胞漿中。T細(xì)胞淋巴瘤中PLK1蛋白表達(dá)陽性率為72.0%(36/50)，顯著高于反應(yīng)性增生淋巴組織40.0%(12/30)(χ2=7.900，P＜0.01)(見圖1、圖2)。

圖1 免疫組化檢測survivin在T細(xì)胞淋巴瘤及反應(yīng)性增生淋巴組織中的表達(dá)(×400)

圖2 免疫組化檢測PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤及反應(yīng)性增生淋巴組織中的表達(dá)(×400)

2.2 T細(xì)胞淋巴瘤中Survivin、PLK1的表達(dá)與其惡性程度、臨床分期的關(guān)系 惰性、侵襲性及高侵襲性淋巴瘤中Survivin蛋白表達(dá)陽性率分別為40.0%、88.5%、100.0%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，三組之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。Ⅰ期和Ⅱ期患者Survivin蛋白表達(dá)陽性率為57.6%，而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表達(dá)顯著增高，陽性率為94.1%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，二者之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

惰性、侵襲性及高侵襲性淋巴瘤中PLK1蛋白表達(dá)陽性率分別為40.0%、92.3%、100.0%，三組之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。Ⅰ期和Ⅱ期患者PLK1蛋白表達(dá)陽性率為60.6%，而在Ⅲ期和Ⅳ期患者中的表達(dá)顯著增高，陽性率為94.1%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，二者之間的表達(dá)差異統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.3 T細(xì)胞淋巴瘤中Survivin，PLK1的表達(dá)與性別、年齡、發(fā)生部位的關(guān)系 Survivin，PLK1蛋白在不同性別、年齡、發(fā)生部位中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 T細(xì)胞淋巴瘤中Survivin，PLK1的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.4 Survivin與PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤中表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)Survivin與PLK1蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.467，P=0.001)，見表2。

表2 T細(xì)胞淋巴瘤中Survivin與PLK1蛋白表達(dá)之間的關(guān)系

3 討 論

Survivin是1997年美國耶魯大學(xué)的Ambrosini等利用效應(yīng)細(xì)胞蛋白受體-1(EPR-1)cDNA從人類基因組庫中篩選出的一個基因。Survivin與細(xì)胞分裂、增殖有關(guān)，在成熟分化組織中不表達(dá)或弱表達(dá)，而在胚胎組織及腫瘤組織中表達(dá)。Survivin在細(xì)胞周期G2/M期呈高表達(dá),可能通過直接抑制caspase23和caspase27而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究表明,Survivin在多種腫瘤組織中表達(dá)上調(diào),并且與腫瘤的組織學(xué)分級、臨床分期、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及多藥耐藥密切相關(guān)[1-2,6-7]。本研究中Survivin在T細(xì)胞淋巴瘤中高表達(dá)，且與腫瘤惡性程度、臨床分期顯著相關(guān)；而與性別、年齡、發(fā)生部位無關(guān)。提示，survivin蛋白高表達(dá)可能是T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生發(fā)展的重要生物學(xué)標(biāo)志。利用RNA干擾技術(shù)抑制Survivin的表達(dá)能誘導(dǎo)人HL-60白血病細(xì)胞發(fā)生凋亡[8]。Cheson等[9]研究建議在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤Ⅱ期患者中可聯(lián)合使用Survivin抑制劑YM155與利妥昔單抗。結(jié)合本實驗，我們推測在T細(xì)胞淋巴瘤中survivin是否也可作為基因靶向治療的目標(biāo)。PLK1是細(xì)胞周期重要調(diào)控因子，許多調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的重要分子Cdc2、p53、CyclinB1、Bcl-2等都是PLK-1的作用底物。在多種實體腫瘤組織中，如乳腺癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、膠質(zhì)瘤等均有過表達(dá)，且與這些腫瘤組織學(xué)分級、侵襲轉(zhuǎn)移、臨床分期及患者預(yù)后存在密切相關(guān)。本研究中，PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤中顯著高表達(dá)，且其高表達(dá)與腫瘤惡性程度、臨床分期相關(guān)，而與性別、年齡、發(fā)生部位無關(guān)，提示PLK1蛋白高表達(dá)可能與T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。在T細(xì)胞淋巴瘤中檢測PLK1蛋白表達(dá)情況可能對其診斷、治療及預(yù)后判斷具有重要意義。已有研究者以PLK1為靶目標(biāo)對腫瘤進(jìn)行治療，結(jié)果都能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖[10]。在T細(xì)胞淋巴瘤中PLK1也有望成為基因靶向治療的目標(biāo)。以上推測需進(jìn)一步研究予以證實。

Survivin和PLK1均作用于G2/M期而調(diào)控細(xì)胞周期且均能抑制細(xì)胞凋亡而發(fā)揮促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展作用。He等[4]在肝癌細(xì)胞中研究發(fā)現(xiàn)Survivin蛋白是PLK1的靶基因之一。Feng等[5]發(fā)現(xiàn)在食管鱗狀細(xì)胞癌中PLK1也可能通過上調(diào)Survivin表達(dá)而發(fā)揮其促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。Colnaghi等[11]也認(rèn)為PLk1可能通過磷酸化Survivin而調(diào)控細(xì)胞周期。為此，我們采用了免疫組化方法在T細(xì)胞淋巴瘤中進(jìn)行兩者表達(dá)之間的相關(guān)性研究；結(jié)果顯示Survivin、PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤中均呈高表達(dá)，且兩者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)。因此，我們初步推測，在T細(xì)胞淋巴瘤中Survivin蛋白可能是PLK1的靶基因之一，兩者在T細(xì)胞淋巴瘤中可能發(fā)揮協(xié)同作用，相互促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

總之，聯(lián)合檢測Survivin、PLK1對T細(xì)胞淋巴瘤的預(yù)后判斷及指導(dǎo)治療具有一定的現(xiàn)實意義，兩者有望成為T細(xì)胞淋巴瘤新的預(yù)后判定標(biāo)志物和基因靶向治療的工具。但由于T細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展是多基因參與調(diào)節(jié)的復(fù)雜過程，Survivin、PLK1在T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及其生物學(xué)功能與臨床意義尚待進(jìn)一步研究。

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