皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中埃茲蛋白和水通道蛋白3的表達(dá)*

王 璐，朱 瑩，袁耀東，劉林嶓

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院整形外科鄭州450052

皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)是起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte，KC)的一種惡性腫瘤，是最常見的非黑素瘤皮膚腫瘤之一，好發(fā)于頭皮、面頸部等暴露部位的皮膚和黏膜。皮膚SCC常發(fā)生于原有慢性皮膚病變?nèi)缏詽?、燒傷后瘢痕、放射性損傷的基礎(chǔ)上，約占皮膚惡性腫瘤的60%左右，好發(fā)年齡為50～60歲，然而國(guó)外報(bào)道在小于40歲的年輕人中發(fā)病率也在迅速增長(zhǎng)［1］。埃茲蛋白(Ezrin)是一種重要的膜-細(xì)胞骨架聯(lián)結(jié)蛋白，對(duì)細(xì)胞形態(tài)、分化、運(yùn)動(dòng)性和細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與間質(zhì)間的黏附有重要的調(diào)節(jié)作用［2］，與腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)。水通道蛋白3(aquaporins-3，AQP3)屬于AQPs家族的水甘油通道類，在液體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用［3］，與多種疾病有關(guān)［4-6］。作者采用免疫組化染色方法檢測(cè)皮膚SCC組織中Ezrin和AQP3的表達(dá)，并分析其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 選擇2008年至2010年鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診存檔的皮膚SCC蠟塊標(biāo)本65例，患者男36例，女29例;高分化24例，中分化23例，低分化18例;有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例，均未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移;均未接受抗腫瘤治療。以20例正常皮膚組織標(biāo)本作對(duì)照，患者男12例，女8例。

1.2 Ezrin和AQP3的檢測(cè)方法 采用免疫組化染色SP法。鼠抗人Ezrin單克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司，山羊抗人AQP3多克隆抗體購(gòu)自晶美生物工程有限公司，SP免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。用已知染色陽性的SCC組織切片作陽性對(duì)照，以PBS代替一抗孵育組織切片作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 2個(gè)蛋白陽性反應(yīng)均呈棕色顆粒狀分布于胞膜和(或)胞質(zhì)，采用雙盲法，觀察至少10個(gè)代表性高倍視野。按著色強(qiáng)度計(jì)分，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;按陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分，＜5%為0分，5% ～為1分，25% ～為2分，50% ～為3分。兩項(xiàng)評(píng)分相加，0～1分判為陰性，≥2分判為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。皮膚正常和SCC組織中Ezrin和AQP3陽性表達(dá)率的比較采用χ2檢驗(yàn)，有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的SCC組織中2者陽性表達(dá)率的比較采用校正χ2檢驗(yàn)，不同分化程度SCC組織中2者陽性表達(dá)率的比較采用確切概率法，SCC組織中2者表達(dá)的關(guān)系用列聯(lián)系數(shù)評(píng)價(jià)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 皮膚正常和SCC組織中Ezrin和AQP3的表達(dá) 見圖1和表1。

圖1 皮膚正常及SCC組織中Ezrin(A)和AQP3(B)的表達(dá)(SP，×400)

表1 皮膚正常和SCC組織中Ezrin和AQP3的表達(dá) 例(%)

2.2 皮膚SCC組織中Ezrin和AQP3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

表2 皮膚SCC組織中Ezrin和AQP3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

2.3 皮膚SCC組織中Ezrin和AQP3表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 見表3。

表3 皮膚SCC組織中Ezrin和AQP3表達(dá)的關(guān)聯(lián)性

3 討論

Ezrin是一種重要的膜-細(xì)胞骨架聯(lián)結(jié)蛋白，在細(xì)胞骨架和細(xì)胞膜之間起連接作用，它將胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞骨架，影響細(xì)胞骨架蛋白的構(gòu)象和分布，進(jìn)而改變細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力和功能的穩(wěn)定性［2］。Ezrin分布于各種類型的上皮細(xì)胞，在腫瘤中異常高表達(dá)并且表達(dá)位置顯著改變。Moilanen等［7］研究表明，不同分化程度的腫瘤組織內(nèi)Ezrin的表達(dá)強(qiáng)度和表達(dá)定位不相同，因此推斷Ezrin分布異常將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)及生理功能發(fā)生改變，從而參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。激活狀態(tài)的Ezrin可使E-cadherin在細(xì)胞內(nèi)聚集而在細(xì)胞膜的表達(dá)下降，且降低E-cadherin從細(xì)胞內(nèi)向細(xì)胞膜的轉(zhuǎn)運(yùn)速率，從而參與腫瘤的進(jìn)展［8］。Ezrin還可能通過激活PI3-K/AKT路徑阻止到達(dá)轉(zhuǎn)移灶的腫瘤細(xì)胞凋亡，從而促進(jìn)腫瘤形成轉(zhuǎn)移灶［9］。激活的Ezrin能夠與CD95特異性連接，促使CD95與肌動(dòng)蛋白連接，導(dǎo)致細(xì)胞膜極性改變，從而使細(xì)胞對(duì)CD95介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑的敏感性發(fā)生改變［10］。李留霞等［5］發(fā)現(xiàn) Ezrin蛋白不僅與腫瘤的惡性程度相關(guān)，而且與腫瘤的分化程度相關(guān)。作者的研究結(jié)果顯示，Ezrin在皮膚SCC組織中的表達(dá)明顯高于正常皮膚組織，且其表達(dá)隨SCC分化程度的降低而增強(qiáng)，與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，提示Ezrin的表達(dá)異?？赡軈⑴c了皮膚SCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，這也為皮膚SCC的臨床診斷、治療及預(yù)后判斷提供了新思路。

在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了共13種亞型水通道蛋白，即 AQP0～AQP12［3-11］，分別分布在不同的組織、細(xì)胞中。皮膚中的AQPs主要是AQP3［12］。AQP3不僅能轉(zhuǎn)運(yùn)水，還能轉(zhuǎn)運(yùn)甘油和尿素，因此又稱水-甘油通道，在液體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要作用［3］。許多疾病可能與水通道蛋白功能異?；蛘{(diào)節(jié)失控有關(guān)［4］。Hara-Chikuma等［13］發(fā)現(xiàn) AQP3 缺失小鼠皮膚基底層細(xì)胞的增殖和遷移能力減弱;將AQP3缺失小鼠暴露在致皮膚癌的因素下，它們對(duì)皮膚癌表現(xiàn)出明顯的耐受性，可見AQP3是皮膚癌發(fā)生過程中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。目前已有研究［14］表明，AQPs抑制劑可顯著抑制腫瘤轉(zhuǎn)移。作者發(fā)現(xiàn)，AQP3在皮膚SCC組織中的陽表達(dá)性率顯著高于正常皮膚;SCC組織中細(xì)胞分化程度越低，AQP3的表達(dá)越少，提示AQP3的表達(dá)與皮膚SCC的分化有關(guān)，但具體的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。因此，檢測(cè)皮膚SCC組織中AQP3的表達(dá)有可能成為了解腫瘤分化情況的輔助指標(biāo)，為皮膚 SCC的防治提供了一個(gè)新的切入點(diǎn)。

研究還證實(shí)皮膚SCC組織中Ezrin和AQP3的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)，提示Ezrin和AQP3的共同表達(dá)失調(diào)可能是皮膚SCC發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制之一，也可能對(duì)預(yù)后評(píng)估有一定的意義。

綜上所述，Ezrin與AQP3的高表達(dá)可能參與了皮膚SCC的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，并與其惡性程度相關(guān)，這也為皮膚SCC的臨床診斷、治療及預(yù)后判斷提供了新的思路。

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