黑龍江省不同地域山里紅葉的生藥鑒定研究1）

于曉瑾，王振宇

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱 150040；2.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，哈爾濱 150001）

山里紅葉系薔薇科植物山里紅（CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.）的干燥葉。我國北方大部分地區(qū)和朝鮮、蘇聯(lián)遠(yuǎn)東地區(qū)均有分布，我省主產(chǎn)于小興安嶺、完達(dá)山、張廣才嶺及老爺嶺等山區(qū)。山里紅葉作為山楂葉的一種來源，被《中華人民共和國藥典》（2005版）收載，其味酸、性平，歸肝經(jīng)；具有活血化淤、理氣通脈的功能，可用于氣滯血淤、胸悶憋氣、心悸健忘、眩暈耳鳴等癥。山楂的品種比較復(fù)雜，我國藥典（2005年版）收載山楂葉的來源植物為山楂（CrataeguspinnatifidaBge.）；山里紅（CrataeguspinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.）；上述兩種產(chǎn)于北方，謂之北山楂。野山楂（C.cuneataSibe et Zucc）主產(chǎn)南方，謂之南山楂。此外，尚有遼山楂（C.sanguineaPall.）；云南山楂［C.scabrifolia（Franch）Rfhd］；湖北山楂（C.hunpensisSarg）等果實(shí)均作藥用［1］。

山里紅葉的外部形狀受環(huán)境因素影響變異很大，又粉末狀態(tài)難于鑒別，而組織學(xué)研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其葉柄及主脈韌皮部外側(cè)纖維束及厚壁細(xì)胞的分布狀況、掃描電鏡下葉表面角質(zhì)層紋飾以及其HPLC圖譜等均有區(qū)別，可以作為種間鑒別的指標(biāo)［2］。同時山里紅葉中又含有多種黃酮成分［3－4］。對各種心血管疾病等都有較好的療效［5－6］。我們在藥材樣品收集過程中發(fā)現(xiàn)，在黑龍江不同地域的山里紅葉隨著地區(qū)的不同在其形態(tài)上有一定的差異。為此，本實(shí)驗(yàn)通過對黑龍江大興安嶺地區(qū)和張廣才嶺地區(qū)采集的山里紅葉藥材進(jìn)行鑒別研究，為山里紅葉藥材資源的鑒別及開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與儀器與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

于2006年7月，共采集三種黑龍江產(chǎn)山里紅葉藥材，其中兩種采自大興安嶺（加格達(dá)奇）分別為CrataegusmaximowicziiSchneid.、C.dahuricaKoehne.ex Schneid.。還有一種采自張廣才嶺（五常）為C.pinnatifidaBge.var.majorN.E.Br.。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

DMWBA 200VC顯微鏡；掃描電鏡（北京普瑞賽斯儀器有限公司）

1.3 原材料處理方法

樣品采集后，置陰涼處風(fēng)干至脆備用。供性狀觀察的樣品選用典型而完整者，適當(dāng)軟化展平。供顯微觀察的樣品，取自葉片中部，制備葉表面透化，解離，過中脈橫切面等臨時制切片。

2 結(jié)果與分析

2.1 性狀鑒別

2.1.1 藥材性狀鑒別

黑龍江產(chǎn)山里紅葉藥材多為闊卵形至卵狀菱狀，葉緣有鋸齒，深裂或淺裂，具托葉，但多早落。其藥材呈皺縮狀或不規(guī)則碎片狀。深究其同中之異，可發(fā)現(xiàn)直觀簡便而有效的鑒別特征。即光葉山里紅與山里紅葉均為紙質(zhì)，黃綠色，無光澤，但前者葉片厚實(shí)，透明度低，后者葉片極薄，透明度高。而毛山里紅則為革質(zhì)，綠色，有光澤。

表1 黑龍江山里紅葉性狀特征的比較

通過觀察發(fā)現(xiàn)，三種山里紅葉的光澤有無及程度與被毛茸情況呈負(fù)相關(guān)性。山里紅葉無毛而有光澤；光葉山里紅葉僅主脈與二級脈下毛較密而近于無光澤；毛山里紅葉則全體被毛而無光澤。但是，光葉山里紅葉的被毛區(qū)與非被毛區(qū)的光澤程度未見差異，表明毛絨并非影響葉表面光澤的直接因素。

三種山里紅葉葉脈的顏色亦有所不同。毛山里紅葉各級葉脈均含較深黃棕色至紅棕色物質(zhì)而使脈絡(luò)清晰分明；光葉山里紅葉僅見一、二級脈呈較淺棕黃色，而山里紅葉葉脈未見此類色素。該類呈色物質(zhì)在組織中的分部部位參見表1。三種山里紅葉葉脈的這種差別，表明其各自所含代謝產(chǎn)物的質(zhì)或量上的不同，其生物鑒別與質(zhì)量評價意義，尚有待對其化學(xué)結(jié)構(gòu)，積累動態(tài)與藥理活性的深入研究。

2.1.2 附帶部位的鑒別

在山里紅葉采收過程中，常見混入小枝、葉芽、果實(shí)等。為藥材鑒別提供佐證。如山里紅新萌發(fā)枝易隨葉摘取，其枝葉疏密、色澤明顯不同；山里紅托葉多為早落，但常見有殘存，其形狀大小各異。此外，山里紅葉柄、葉芽、果實(shí)等亦可提供鑒別信息（參見表2）。

表2 黑龍江山里紅葉附帶部位的比較

2.2 顯微鑒別

2.2.1 表面微觀比較

為了準(zhǔn)確地鑒別山里紅葉的細(xì)碎藥材、生藥粉末及丸、散等有關(guān)中成藥中的山里紅葉，本文系統(tǒng)地比較觀察了顯微鏡下三種黑龍江產(chǎn)山里紅葉的上下表皮細(xì)胞形狀、柵表比、氣孔密度、脈島數(shù)、非腺毛長度與密度等表面細(xì)微特征及其參數(shù)。從表3可見，三種山里紅葉中草酸鈣結(jié)晶的種類、大小、分布部位與密度具有重要顯微鑒別意義。山里紅葉中，主要有簇晶，晶形好，密度高，分布均勻，而毛山里紅葉和光葉山里紅葉中除簇晶外，還間有方晶，但光葉山里紅葉結(jié)晶僅排列于葉脈外，而毛山里紅葉的各級脈邊緣及近域均有分布；三種山里紅葉氣孔的大小亦有不同。一般地，葉上表皮細(xì)胞為多邊形、下表皮細(xì)胞為分枝狀，但是光葉山里紅葉的上下表皮細(xì)胞壁均呈波狀分枝形，特征鮮明。山里紅葉表面裸眼未見毛茸，但在顯微鏡下，于葉下表面中脈近葉柄處仍可見稀疏細(xì)長的非腺毛，在顯微觀察鑒定中應(yīng)加以注意。毛山里紅葉表面非腺毛的特點(diǎn)是先端多為鉤狀。

表3 黑龍江山里紅葉表面顯微特征比較

2.2.2 橫切面微觀比較

對過葉中脈橫切面觀察的結(jié)果表明，三種黑龍江山里紅葉中脈的輪廓、維管束的組織比例及草酸鈣結(jié)晶與色素的性狀分布等方面亦間有差異（見表4）。雖然各種葉中脈上方均無柵欄組織通過，但山里紅葉該部位柵欄組織卻與上表皮分離而向內(nèi)側(cè)探入，且中脈棱外周計(jì)有三處凸起細(xì)棱線。此外，三者柵欄細(xì)胞大小不同，光葉山里紅葉的柵欄細(xì)胞呈短粗狀，毛山里紅葉的呈細(xì)長狀，山里紅葉則介于兩者之間。

表4 黑龍江山里紅葉過中脈橫切面的比較

2.2.3 電鏡掃描觀察

對三種山里紅葉的電鏡掃描觀察結(jié)果，證實(shí)了三者間氣孔形態(tài)上的差異，并可進(jìn)一步比較其大小、各部分間比例和細(xì)微構(gòu)造，以及非腺毛表面紋飾與尖端情況、葉表面角質(zhì)層紋理的形態(tài)與分布。結(jié)果見表5。

表5 黑龍江三種山里紅葉的電鏡掃描觀察

3 結(jié)論

對三種不同地域來源的黑龍江山里紅葉，其完整藥材或碎片，可由質(zhì)地、厚度及其透光性的顯著不同加以區(qū)分；其藥粉粗粉末，則可由上下表皮細(xì)胞壁與非腺毛的形態(tài)以及草酸鈣結(jié)晶的分布情況等方面進(jìn)行鑒定。本文引入了葉的透光性、葉表皮細(xì)胞形態(tài)、氣孔長短對比、草酸鈣結(jié)晶的種類、大小、密度及分布部位等新的鑒別信息，為藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)，保持藥材質(zhì)量和用藥安全。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［2］高光躍，秦香芹，李鳴，等.山楂屬主要植物葉子生藥學(xué)研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1994，6（4）：27.

［3］黃燮才.中藥山楂原植物的研究［J］.廣西植物，1989，9（4）：303.

［4］劉霞.山楂黃酮類成分的分析測定［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1997，19（3）：47.

［5］王立娟.山楂葉中黃酮類化合物及提取方法［J］.中國林副特產(chǎn)，2000（1）：47－48.

［6］于秋紅，黃沛力，儲金花，等.山楂葉對大鼠血脂調(diào)節(jié)作用的研究［J］.中華醫(yī)藥文萃，2004（1）：9－10.