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    蘭溪余糧山柿子軟腐病的發(fā)病機制研究

    2012-06-01 14:55:08申屠旭萍俞曉平董勝張蔣芝云吳曉峰范金根
    中國計量大學(xué)學(xué)報 2012年2期
    關(guān)鍵詞:蘭溪市病果軟腐病

    申屠旭萍,俞曉平,董勝張,馬 正,蔣芝云,吳曉峰,范金根

    (1.中國計量學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院,浙江省生物計量及檢驗檢疫技術(shù)重點實驗室,浙江 杭州 310018;2.蘭溪市森林病蟲防治檢疫站,浙江 蘭溪 321100)

    柿樹在我國已有2000多年的栽培史.柿子含1%以上可溶性糖,其含胡蘿卜素、維生素C及鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)勝過蘋果、梨、桃、李等果品,還具有止血潤便、降血壓、生津潤肺治咽喉痛等醫(yī)療保健的功效[1-4].浙江蘭溪的大紅柿聞名省內(nèi)外,曾多次獲得省、市級優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品金獎.目前蘭溪市的柿子種植面積達(dá)1135公頃,已成為當(dāng)?shù)剞r(nóng)民的主要經(jīng)濟來源之一.隨著柿樹在蘭溪市種植面積的不斷擴大和集約化程度的提高,柿樹病蟲害種類不斷增加,導(dǎo)致柿子產(chǎn)量損失嚴(yán)重,質(zhì)量明顯下降,給果農(nóng)造成了重大的經(jīng)濟損失[5-9].2006年以來,又有一種新病害在蘭溪暴發(fā)成災(zāi),該病害主要發(fā)生在果實采摘期,導(dǎo)致柿子部分變軟變腐,喪失商品性.2007年當(dāng)?shù)匾蜻@種病害造成5%以上的果實不能正常進(jìn)入市場,損失慘重.僅蘭溪市黃店鎮(zhèn)余糧山一個村就損失柿子果產(chǎn)量40噸以上,給廣大柿農(nóng)造成了重大的經(jīng)濟損失.

    明確導(dǎo)致柿果軟腐病的發(fā)病機理,提出合理的病害控制技術(shù)對減少因該病害引起的經(jīng)濟損失和增加果農(nóng)的收入非常必要,同時對促進(jìn)蘭溪市乃至全國的柿果產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展意義重大.該病害是病原性病害、生理性病害或者是由環(huán)境污染因素引起的?本研究開展了病原微生物分離、高效合理的防治措施篩選和環(huán)境污染因子對病害發(fā)生的影響研究等工作,為明確柿果軟腐病害的發(fā)生機制奠定基礎(chǔ).

    1 材 料

    1.1 試驗地點

    蘭溪市黃店鎮(zhèn)余糧山柿子種植區(qū).

    1.2 病原菌培養(yǎng)基

    1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,瓊脂20g,水1L;

    2)PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200g,葡萄糖20g,瓊脂20g,水1L;

    3)高氏一號合成培養(yǎng)基:可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl 0.5g,K2HPO40.5g,MgSO40.5g,F(xiàn)eSO40.01g,瓊脂20g,水1L;

    4)馬丁氏培養(yǎng)基:葡萄糖10g,蛋白胨5g,KH2PO41g,MgSO40.5g,瓊脂20g,水1L[10];

    5)柿子汁誘導(dǎo)培養(yǎng)基:在上述培養(yǎng)基中分別添加新鮮柿子汁組成不同配方培養(yǎng)基,添加量為1ml/10ml.

    1.3 供試殺菌劑

    丙森鋅70%可濕性粉劑(拜耳作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)),687.5g/L氟菌·霜霉威懸浮劑(商品名:68.75%銀法利懸浮劑,拜耳作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)),722g/L霜霉威鹽酸鹽(商品名:普力克水劑,拜耳作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)),400g/L嘧霉胺(商品名:施加樂懸浮劑,拜耳作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)),430g/L戊唑醇(商品名:好力克懸浮劑,拜耳作物科學(xué)有限公司生產(chǎn)),甲基硫菌靈70%可濕性粉劑(江蘇龍燈化學(xué)有限公司生產(chǎn)),硫酸鏈霉素72%可濕性粉劑(石家莊通泰生化有限公司生產(chǎn)),溴硝醇20%可濕性粉劑(遼寧丹東市農(nóng)藥總廠生產(chǎn))和噻菌銅20%懸浮劑(浙江龍灣化工有限公司生產(chǎn)).

    2 試驗方法

    2.1 病原組織微生物的分離與鏡檢

    2.1.1 病果表面消毒 75%酒精消毒5min→無菌水沖洗→10%次氯酸鈉消毒5min→無菌水沖洗.

    2.1.2 病菌固體培養(yǎng)基平板分離 去柿子皮,用無菌刀切取病原組織4~5mm大小的塊狀移至固體平板培養(yǎng).同時,另切取同樣大小組織小塊置于無菌水中,充分搗碎,將菌懸液稀釋成10-1,10-2,10-3三個梯度,分別涂布.將含牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的平板置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~2d.將含PDA培養(yǎng)基、高氏一號合成培養(yǎng)基和馬丁氏培養(yǎng)基的平板置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3~5d.

    2.1.3 病菌液體培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng) 去柿子皮,用無菌刀切取組織4~5mm小塊移至含有柿子汁的液體誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng).

    2.1.4 用無菌接種環(huán)挑取柿子汁涂片,干燥,固定,用草酸銨結(jié)晶紫溶液染色,鏡檢.

    2.2 殺菌劑的防治試驗

    采用東方紅3WB-15X背負(fù)式機動噴霧機和延伸噴頭直接對柿子樹噴施不同的殺菌劑,噴施要求藥液霧滴分布均勻,覆蓋率高,藥液濕潤葉面和果面不產(chǎn)生流失為宜.共設(shè)9種殺菌劑,每種藥劑設(shè)3個地點處理,每個處理設(shè)3次重復(fù),稀釋農(nóng)藥的清水作為陰性對照.施藥時間為采摘前期(7月~9月間),共計噴霧3次.柿子采摘期檢查防治效果.

    2.3 SO2處理對柿子的影響

    采用2.5L密閉的微波爐專用盒子(直徑9.6cm、高8.8cm),每個盒子中放置大小均一成熟度較一致的柿子10個,在盒子中放置一個敞口且加有不同量的Na2SO3和稀H2SO4溶液的小玻璃瓶1只,然后密閉盒子.利用復(fù)分解反應(yīng)Na2SO3+H2SO4=Na2SO4+SO2↑+H2O產(chǎn)生SO2氣體.密閉容器中SO2含量分別為2.38mg、0.59mg、0.15mg、0.04mg、9.30×10-3mg、2.33×10-3mg、5.81×10-4mg、1.45 ×10-4mg、3.63×10-5mg、9.08×10-6mg、2.27×10-6mg共11個處理,對照組只有柿子不加SO2,每日觀察盒子內(nèi)柿子的變化.

    2.4 數(shù)據(jù)處理

    試驗數(shù)據(jù)分析在SPSS15.0統(tǒng)計軟件下處理.

    3 結(jié)果與分析

    3.1 病原微生物對柿子軟腐病的影響

    對2010年9月27日、10月8日和10月17日采摘回的3批次病果分別進(jìn)行病原菌分離試驗.結(jié)果表明:用不同的培養(yǎng)基和固體及液體培養(yǎng)后,平板上未見有細(xì)菌、放線菌和真菌菌落生長,液體培養(yǎng)基也未變渾濁或見絲狀微生物生長.進(jìn)一步對柿子汁涂片染色后觀察,在顯微鏡下未見微生物細(xì)胞,具體結(jié)果,見圖1.

    圖1 柿子病原組織微生物的分離培養(yǎng)結(jié)果Figure 1 Isolation and culture of pathogenic microorganism in Diospyros kaki tissue

    3.2 殺菌劑對軟腐病的防治

    在2010年7—9月間,分別選擇前兩年軟腐病較嚴(yán)重的3個種植區(qū)域進(jìn)行防治試驗.噴施后柿子成熟時每個試驗區(qū)域每個處理分別采摘30個左右果子進(jìn)行軟腐病統(tǒng)計,分析農(nóng)藥對軟腐病的防治效果,見表1.

    試驗結(jié)果表明,在3個區(qū)域利用9種殺菌劑處理后柿子的病果率和對照無顯著性差異,這也間接表明供試殺菌劑對該病害沒有明顯的防治效果.

    表1 九種殺菌劑對柿子軟腐病的防治效果Table 1 Control efficacy of nine kinds of fungicides against soft-blet disease of Diospyros kaki

    3.3 正常果子和病果形態(tài)觀察

    剛從樹上采摘下來的病果癥狀為頂部顏色比其他部位顯紅,且較軟(圖2).在常溫放置數(shù)天后,柿子其他部分也逐漸變紅,原來頂部先變紅的部分變干,顏色上和其他部位已無差別.掰開后肉眼觀察未見有病原菌菌落生長,也無腐爛現(xiàn)象.把正常柿子另挑出,放置數(shù)天后發(fā)現(xiàn)頂部也變干變褶皺,只是顏色比病果稍淺(圖3).

    圖2 病果Figure 2 Diseased Diospyros kaki stored for several days

    圖3 放置數(shù)天后正常果子與病果外觀比較Figure 3 Appearance of non-diseased and deseased fruit

    3.4 SO2對柿子的影響

    盡管實驗室密閉模擬試驗和種植區(qū)環(huán)境有一定的差異,但10d后觀察到SO2處理的盒子中出現(xiàn)柿子先變紅現(xiàn)象,腐熟度比對照明顯高.其中密閉容器中SO2含量為2.38mg,0.59mg,0.15mg,0.04mg,也就是質(zhì)量濃度分別為9.52×10-1mg/L,2.36×10-1mg/L,6.00×10-2mg/L,1.6×10-2mg/L的腐熟現(xiàn)象明顯(圖4),這初步說明SO2氣體可以刺激柿子早熟變軟.

    圖4 SO2對柿子軟腐的影響Figure 4 Influence of SO2on Diospyros kaki soft-blet

    4 討 論

    針對2006年以來在蘭溪余糧山柿子種植區(qū)新出現(xiàn)的病害——柿子軟腐病,本研究分別從病果病原菌分離鑒定、不同殺菌劑的防治試驗、不同環(huán)境因子的監(jiān)測和對病害發(fā)生的影響等3方面入手開展了該病發(fā)生的機制初探.選擇了適合細(xì)菌、放線菌和真菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基,補充了加入柿子汁的誘導(dǎo)培養(yǎng)基,結(jié)果均未分離到病原菌.防治試驗中選用了針對真菌性病害和細(xì)菌性病害的殺菌劑,并且采用了不同的防治濃度,但未見有防效.從形態(tài)上觀察病果和正常果子不同主要在于顏色,未見有腐爛現(xiàn)象.結(jié)合上述結(jié)果可以初步判斷該病害不是由病原菌引起的,也即非病理性病害.

    實地調(diào)查中發(fā)現(xiàn),當(dāng)?shù)厥赁r(nóng)施用的農(nóng)藥和化肥每年種類基本相同,病害狀況也不同于植物缺素或者藥害.柿農(nóng)反映發(fā)病區(qū)域每年都不盡相同.余糧山柿子軟腐病大量發(fā)生前其周邊建造了發(fā)電廠,是否發(fā)電廠排放的氣體誘發(fā)了該病害的發(fā)生有待于進(jìn)一步的監(jiān)測和研究?但實驗室研究表明,柿子接觸SO2氣體后出現(xiàn)成熟和腐軟的現(xiàn)象.《蘭州市大氣污染對兒童肺功能的影響研究》課題研究也表明,植物接觸SO2、O3等大氣污染物以后,體內(nèi)會產(chǎn)生應(yīng)激乙烯.

    2011年在試驗的3個區(qū)域分別隨機采摘50個柿子進(jìn)行病害統(tǒng)計,結(jié)果均未發(fā)病.同時,我們委托蘭溪市環(huán)境保護監(jiān)測站在余糧山柿子種植區(qū)設(shè)點進(jìn)行為期一周的空氣中二氧化硫、氮氧化物監(jiān)測,采樣方法為連續(xù)24h采樣,監(jiān)測結(jié)果是環(huán)境空氣中二氧化硫、氮氧化物濃度符合GB3095—1996《環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》二級標(biāo)準(zhǔn).這是否進(jìn)一步說明該病害的發(fā)生和當(dāng)?shù)丨h(huán)境條件以及氣候相關(guān),如溫度、風(fēng)向,等等,這些因素均可導(dǎo)致柿子樹種植區(qū)SO2濃度的高低.

    由于柿子軟腐病是新出現(xiàn)的一種病害,同時研究時間受到柿子生長周期的限制,這兩方面的因素給本研究帶來了一定的困難.但經(jīng)過兩年的研究分析,可以初步明確該病既非病理性病害也非生理性病害,有可能與環(huán)境因素相關(guān).

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