正交試驗優(yōu)選安脈口服液醇提工藝報告

袁麗娟 滕步洋

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正交試驗優(yōu)選安脈口服液醇提工藝報告

袁麗娟 滕步洋

（江蘇省連云港中醫(yī)藥高等職業(yè)技術(shù)學校，連云港 222007）

優(yōu)選安脈口服液的最佳醇提工藝。采用正交試驗法，以綠原酸和肉桂酸為指標，對安脈口服液的醇提工藝進行優(yōu)選。最佳醇提工藝為：加飲片總量8倍量的70%乙醇分3次回流提取，每次1.5h。該工藝穩(wěn)定，可行。

綠原酸；肉桂酸；正交試驗

安脈口服液系臨床經(jīng)驗效方，該藥由金銀花、玄參、牛膝、石斛等活血化淤、養(yǎng)陰通絡的中藥制成，其療效確切，副作用小，臨床上主要用于血管閉塞性脈管炎、靜脈血栓形成、動脈硬化性閉塞癥、腦血栓形成及后遺癥等病，隨著臨床經(jīng)驗的積累，其應用范圍日漸擴大，在臨床上得到廣泛應用。本實驗在原方劑基礎(chǔ)上，以方中主要活性成分為指標，研究其提取工藝，將其制成口服液。

本文以乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數(shù)等工藝條件為考察因素，以綠原酸、肉桂酸的含量為考察指標，采用L9（34）正交試驗，結(jié)果進行方差分析，以確定各因素的顯著性水平，從而得到該復方的最佳醇提工藝參數(shù)。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；VWD檢測器；HKromasil?-C18（4.6mm×250mm，5μm）（大連依利特科技公司）；電子天平（Mettler Toledo AG285）；KQ-500E型醫(yī)用超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4（鞏義市英峪予華儀器廠）；自動雙重純水蒸餾器。

1.2 對照品 肉桂酸照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110786-200403）、綠原酸照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110753－200212）。

1.3 試劑 乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。均購于上海化學試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗優(yōu)選最佳乙醇回流提取工藝 在回流提取過程中，乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)以及回流提取時間等因素直接影響到提取效果，故選用乙醇濃度、乙醇用量、提取次數(shù)以及回流提取時間作為考察因素，每因素各選3個水平，見表1，進行L9（34）正交試驗。

各正交樣品液選用綠原酸和肉桂酸的含量為主要考察指標，所得結(jié)果進行方差分析。試驗方法及結(jié)果如下。

表1 提取因素水平表

2.2 樣品制備方法 稱取9份處方藥材飲片金銀花、玄參、石斛、牛膝各20g，按正交表安排提取試驗，分別濃縮定容到200ml容量瓶中，即得樣品溶液。

2.3 HPLC測定不同提取方法樣品液中綠原酸、肉桂酸的含量測定 照高效液相色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ D）測定。

2.3.1 綠原酸的含量測定[1]

2.3.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱為Kromasil?-C18（4.6mm×250mm，5μm）；以乙腈-0.4%的磷酸水溶液（11∶89）；流速：1.0mL/min；檢測波長327nm；理論塔板數(shù)不低于1500。

2.3.1.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

2.3.1.3 供試品溶液的制備 精密吸取醇提樣品液2mL，加50%甲醇稀釋至25ml，離心，取上清液，供測定用。其余70%、80%乙醇回流提取液，分別精密吸取2ml，加50%甲醇稀釋至25ml，離心，取上清液，供測定用。

精密量取上述對照品和各供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，測定結(jié)果見表2。

2.3.2 肉桂酸含量測定[2]

2.3.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性試驗 色譜柱為Kromasil?-C18（4.6mm×250mm，5μm）；甲醇∶0.1%磷酸溶液（56∶44）為流動相；流速：1.0ml/min；檢測波長為278nm；理論塔板數(shù)不低于1500。

2.3.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取肉桂酸對照品適量，置量瓶中，甲醇∶水（54∶46）制成每1ml含5μg的溶液，即得。

2.3.2.3 供試品溶液的制備 精密吸取醇提樣品液2mL，加甲醇∶水（54∶46）稀釋至25ml，離心，取上清液，供測定用。其余70%、80%乙醇回流提取液，分別精密吸取10ml，加甲醇∶水（54∶46）稀釋至25ml，離心，取上清液，供測定用。

精密量取上述對照品和各供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，測定結(jié)果見表2。

2.4 測定方法與結(jié)果

表2 提取正交試驗結(jié)果

表3 綠原酸提取含量方差分析表

表4 肉桂酸提取含量方差分析表

表5 綜合得分方差分析表

根據(jù)表3，以綠原酸得率為考察指標，方差分析結(jié)果表明：B、C因素不同水平之間見有顯著性差異，結(jié)合Ki值，其最佳的因素水平為A3B3C2D2。根據(jù)表4，以肉桂酸得率為考察指標，方差分析結(jié)果表明：B因素不同水平之間見有顯著性差異，結(jié)合Ki值，其最佳的因素水平為A2B3C3D1。根據(jù)表6，以綜合得分為考察指標，方差分析結(jié)果表明：A、B、C因素不同水平之間見有顯著性差異，結(jié)合Ki值，其最佳的因素水平為A3B3C2D1。綜合以上結(jié)果，綜合考慮成本等因素，確定最佳的工藝參數(shù)為為A2B3C2D1，即以各飲片投料，加70%乙醇，回流提取3次，每次8倍量，每次1.5h。

2.5 最佳醇提工藝的驗證 分別稱取3份金銀花、玄參、石斛、牛膝各20g，按上述最佳醇提工藝即以藥材飲片投料，70%乙醇，回流提取3次，每次8倍量，每次1.5h進行最佳醇提工藝驗證。驗證結(jié)果見表6。

表6 最佳醇提工藝研究的驗證表（n=3）

上述最佳乙醇提取工藝研究結(jié)果說明：優(yōu)化提取的結(jié)果與正交表中的最優(yōu)水平相似，說明本研究所確定的工藝合理可行，可操作性強。

3 討論

3.1 本方采用正交試驗法，優(yōu)選安脈口服液醇提工藝，以綠原酸和肉桂酸含量為指標，分別用HPLC法進行含量測定，結(jié)果進行方差分析，最終優(yōu)選出A2B3C2D1的制備工藝。通過最佳醇提工藝驗證，所得結(jié)果與選定的工藝結(jié)果相似。通過最佳醇提工藝驗證實驗也可證明該工藝的合理性。

3.2 綠原酸的含量測定，藥典采用乙腈∶0.4%磷酸溶液（13∶87）為流動相，最終確定以以乙腈∶0.4%的磷酸水溶液（11∶89）為流動相，分離效果較好。同時，肉桂酸采用的方法以流動相甲醇∶0.1%磷酸溶液（56∶44）分離效果較好。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2005年版.北京:化學工業(yè)出版社,2005:153.

[2] 李文莉. HPLC測定脈絡寧注射液及玄參藥材中肉桂酸的含量[J].華西藥學雜志,2007,22(1):091-09.

Study on Extracting Techniques of AnMai Orally Liquid

Yuan Lijuan Teng Buyang

Lianyungang Higher Vocational and Technical School of TCM, Lianyungang, 222007, China

Aim To optimize the alcohol extraction process of AnMai Orally liquid．Methods The alcohol extraction process of gongxueyin granules was optimized by the orthogonal design，with Caffeotannic acid，Cinnamic acid and the extraetum ag the indicators．Results The optimal process was adding 8 times 70%Mcohol into herbal pieeeq．then reflux extracting 3 times and 1.5 hours each time．Conclusion The optimal extraction process is stable and reasonable．

Caffeotannic acid; Cinnamic acid; Orthogonal experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.109

1672-2779（2012）-02-0156-02

2011-12-11

（本文校對：劉剛 ）