胃癌前病變內(nèi)鏡活檢組織γH2AX蛋白的表達(dá)及意義

賈金海，李 勇，張曉琳

（1.河北醫(yī)科大學(xué)門診部，河北石家莊 050017；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科，河北石家莊 050011；

3.河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，河北石家莊 050017）

·論 著·

胃癌前病變內(nèi)鏡活檢組織γH2AX蛋白的表達(dá)及意義

賈金海1，李 勇2，張曉琳3*

（1.河北醫(yī)科大學(xué)門診部，河北石家莊 050017；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科，河北石家莊 050011；

3.河北醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室，河北石家莊 050017）

目的探討胃癌前病變內(nèi)鏡活檢組織γH2AX蛋白的表達(dá)及意義。方法應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測53例患者胃癌前病變組織中γH2AX蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果腸型化生和異型增生組織γH2AX蛋白的相對含量高于正常組織（P＜0.01）；異型增生組織γH2AX蛋白的相對含量高于腸型化生組織（P＜0.05）。結(jié)論γH2AX蛋白在胃癌前病變組織中的表達(dá)反映了胃黏膜上皮細(xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂的情況，可能與胃癌前病變演變成胃癌的幾率大小有關(guān)。

胃腫瘤；流式細(xì)胞術(shù)；DNA

胃癌（gastric carcinoma）是我國最常見的惡性腫瘤之一［1］。各種環(huán)境因素（如紫外線、活性化學(xué)物質(zhì)、電離輻射等）和機(jī)體代謝產(chǎn)物（如活性氧介質(zhì)、錯誤復(fù)制的DNA等）均可誘發(fā)多種形式的DNA損傷，最終導(dǎo)致胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生。DNA雙鏈斷裂（double strand break，DSB）是最嚴(yán)重的DNA損傷之一，而磷酸化的H2AX（即γH2AX）可作為判斷早期DSB的金標(biāo)準(zhǔn)［2-3］。本文應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)，研究分析了γH2AX蛋白在胃癌前病變組織中的表達(dá)和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料：所有活檢標(biāo)本均取自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胃鏡室并經(jīng)病理證實(shí)，共53例，其中腸型化生18例，異型增生23例，癌前病變旁的正常胃黏膜12例。年齡35～69歲，平均50.2歲。采集的新鮮標(biāo)本即刻用70%酒精固定，4℃保存。

1.2 主要儀器和試劑：FACS-420型流式細(xì)胞分析儀購自美國BD公司。小鼠抗人γH2AX單克隆抗體和FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體均購自Santa Cruz公司。

1.3 流式細(xì)胞分析：生理鹽水反復(fù)沖洗固定后的標(biāo)本，搓網(wǎng)法制備單細(xì)胞懸液，小鼠抗人γH2AX單克隆抗體（1∶1 000）孵育細(xì)胞，37℃水浴30min，離心洗滌，異硫氰酸熒光素標(biāo)記山羊抗小鼠IgG抗體（1∶500）進(jìn)行免疫染色，37℃水浴30min，離心洗滌，400目篩網(wǎng)過濾，上機(jī)檢測，檢測前用雞血紅細(xì)胞作為標(biāo)準(zhǔn)樣品調(diào)整流式細(xì)胞分析儀熒光檢測變異系數(shù)值在5%以內(nèi)。

1.4 γH2AX表達(dá)的相對含量分析：采用美國BD公司生產(chǎn)流式細(xì)胞儀檢測，以熒光指數(shù)（fluorescence index，F(xiàn)I）表示蛋白表達(dá)的相對含量［4］。FI=（胃癌前病變組織γH2AX的平均熒光強(qiáng)度-對照樣品的平均熒光強(qiáng)度）/（正常組織γH2AX的平均熒光強(qiáng)度）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示，腸型化生和異型增生γH2AX的相對含量均高于正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與小腸型和結(jié)腸型腸型化生組織相比，各型異型增生組織的γH2AX相對含量均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在腸型化生組織中，小腸型腸型化生的γH2AX相對含量較結(jié)腸型低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。在各異型增生組織中，重度異型增生的γH2AX相對含量最高，顯著高于中度異型增生（P＜0.01）和輕度異型增生（P＜0.01）；輕度異型增生的γH2AX相對含量與中度異型增生相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 γH2AX在胃癌前病變組織和正常組織中的相對含量Table 1 The relative amount ofγH2AX in gastric cancerprecancerous lesions tissue and normal tissue

*P＜0.01 vs normal group #P＜0.05 vs atypical hyperplasia△P＜0.01 vs colon type ☆P＜0.05 vs severe type by t test

3 討 論

胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。全球2/3的胃癌病例分布在發(fā)展中國家，尤以中國、日本及其他東亞國家高發(fā)。在我國，胃癌約占全部腫瘤的1/3和消化系統(tǒng)腫瘤的1/2［5］。過去幾十年間，由于科技進(jìn)步和防治力度的加大，胃癌的病死率雖有所降低，但仍居高位，病死率更是排在惡性腫瘤死亡譜的第2位，嚴(yán)重威脅著人類健康［6-7］。在我國，胃癌的發(fā)病率和病死率更高，居各種惡性腫瘤之首［8］。迄今為止，手術(shù)仍是治療胃癌的主要手段，全球胃癌治療的最佳臨床證據(jù)表明，胃癌的預(yù)后直接與胃癌確診時(shí)的分期有關(guān)。然而，胃癌的早期診斷率極低，大部分胃癌在確診時(shí)已處于中晚期，手術(shù)后的5年生存率只有7%～34%，提高胃癌的防治水平已刻不容緩［9］。

胃癌的發(fā)生是一個多步驟、多因素進(jìn)行性發(fā)展的過程。正常情況下，基因組穩(wěn)定性維持著胃黏膜上皮細(xì)胞增殖、分化和凋亡的動態(tài)平衡。然而，當(dāng)機(jī)體受到某些物理、化學(xué)或自身因素的刺激時(shí)，胃黏膜上皮細(xì)胞就可能發(fā)生各種形式的DNA損傷，DNA損傷如果得不到及時(shí)修復(fù)，就會導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡的失衡，直至發(fā)展到胃癌前病變甚至胃癌。胃癌前病變包括腸型化生和異型增生，極易演變成胃癌。

眾所周知，DNA雙鏈斷裂（double strand break，DSB）是最嚴(yán)重的DNA損傷形式之一［3］，而組蛋白H2AX是體內(nèi)DSB的生物標(biāo)志物，γH2AX在細(xì)胞內(nèi)的蛋白表達(dá)可輔助判斷DSB的存在［2］。本實(shí)驗(yàn)流式細(xì)胞檢測結(jié)果表明，腸型化生組織和異型增生組織的γH2AX相對含量均高于正常胃黏膜組織（P＜0.01），這提示胃癌前病變組織中發(fā)生了DSB。結(jié)果還表明，結(jié)腸型腸化生較小腸型腸化生的γH2AX相對含量多（P＜0.01），而各型異型增生組織又顯著高于腸型化生組織（P＜0.05），這一方面提示結(jié)腸型腸化生組織較小腸型腸化生組織發(fā)生了較重的DSB，異型增生組織較腸化生組織發(fā)生了較重的DSB；另一方面是否也提示組織中γH2AX相對含量的多少與其發(fā)生癌變的幾率有關(guān)，還有待做進(jìn)一步研究。

總之，檢測γH2AX表達(dá)變化可準(zhǔn)確判斷胃癌前病變組織中發(fā)生DSB的嚴(yán)重程度，及時(shí)警示患者積極采取預(yù)防措施，如多吃新鮮蔬菜和水果、少吃腌臘制品、根治幽門螺桿菌等，努力使癌前病變發(fā)生逆轉(zhuǎn)，從而減少其演變成胃癌的幾率。

［1］ 賴鄰寧，馬小南，杜敏，等.替吉奧一線治療老年復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移胃癌的臨床研究［J］.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2011，15（19）：49-58.

［2］ TAKAHASHIA，MORIE，OHNISHI T.The foci of DNA double strand break-recognition proteins localizewith gammaH2AX after heat treatment［J］.JRadiat Res（Tokyo），2010，51（1）：91-95.

［3］ BAUERSCHMIDT C，ARRICHIELLO C，BURDAKROTHKAMM S，et al.Cohesin promotes the repair of ionizing radiation-induced DNA double-strand breaks in replicated chromatin［J］.Nucleic Acids Res，2010，38（2）：477-487.

［4］ 江克翔.Claudin-7與E-cadherin在肝癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究［J］.北京醫(yī)學(xué)，2011，33（3）：252-253.

［5］ 楊志剛.胃癌的病理學(xué)新進(jìn)展［J］.華北煤炭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，13（3）：335-336.

［6］ JEMAL A，SIEQEL R，WARD E，et al.Cancer statistics［J］.CA Cancer JClin，2009，59（4）：225-249.

［7］ 衣玉麗，熊建萍，孫哲，等.低劑量5-Fu靜脈泵入治療老年晚期胃癌療效觀察［J］.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2011，15（3）：94-95.

［8］ 顧本興，孫曉南.進(jìn)展期胃癌治療進(jìn)展［J］.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27（1）：93-96.

［9］ 鄧薇，沈琳.胃癌靶向藥物治療進(jìn)展［J］.中國新藥雜志，2010，19（17）：1531-1538.

（本文編輯：劉斯靜）

THE SIGNIFICANCE OFγH2AX EXPRESSION IN GASTRIC CANCER PRECANCEROUS LESIONS COLLECTED BY ENDOSCOPIC BIOPSY

JIA Jinhai1，LIYong2，ZHANG Xiaolin3*
（1.Clinic of HebeiMedical University，Shijiazhuang 050017，China；2.Department of Cardiothoracic Surgery，the Fourth Hospital of HebeiMedical University，Shijiazhuang 050011，China；3.Departmentof Epidemiology and Health Statistics，the School of Public Health，HebeiMedical University，Shijiazhuang 050017，China）

ObjectiveTo investigate the significance ofγH2AX expression in gastric cancer precancerous lesions collected by endoscopic biopsy.MethodsThe expression ofγH2AX was detected in gastric cancer precancerous lesions of 53 patients by flow cytometry.ResultsThe expression of γH2AX in intestinalmetaplasia tissue and atypical hyperplasia tissue was significantly higher than that of normal tissue（P＜0.01）.At the same time，the expression ofγH2AX in atypical hyperplasia tissue was significantly higher than that of intestinalmetaplasia tissue（P＜0.05）.ConclusionThe expression of γH2AX in gastric cancer precancerous lesions reflects the information of double strand breaks in gastric epithelial cells，which may be related to the probability of gastric cancer precancerous lesions evolved into gastric cancer.

stomach neoplasms；flow cytometry；DNA

R735.2

A

1007-3205（2012）03-0249-03

2011-12-09；

2012-02-29

河北省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題（20100033）

賈金海（1976-），男，河北曲周人，河北醫(yī)科大學(xué)門診部主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事腫瘤防治研究。

*通訊作者。E-mail：lukyjia@163.com

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.03.001