HPLC法測定小兒金翹顆粒中連翹苷的含量

李志成，鄧 濤，楊永壽

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

HPLC法測定小兒金翹顆粒中連翹苷的含量

李志成，鄧 濤，楊永壽*

（大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院，云南大理 671000）

目的：建立小兒金翹顆粒中連翹苷的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以0.1%磷酸-乙腈為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，檢測波長277 nm。結(jié)果：連翹苷進(jìn)樣量在0.5~5.0μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；加樣回收率為99.3%，RSD為0.25%（n=6）。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好，可用于小兒金翹顆粒的質(zhì)量控制。

連翹苷；小兒金翹顆粒；高效液相色譜法

小兒金翹顆粒收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)：中藥新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》中（WS3-893（Z-178）-2004（Z）），由金銀花、連翹、葛根、大青葉、山豆根、柴胡、甘草等中藥組成，具有疏風(fēng)清熱、解毒利咽、消腫止痛的作用，常用于兒童咳嗽、咽痛、風(fēng)熱襲肺所致乳蛾等癥〔1〕。金銀花和連翹是該制劑的主藥，連翹苷為連翹的主要成分〔2〕，研究表明連翹苷有一定的抑菌能力〔3〕，部分含有連翹的復(fù)方，多以連翹苷含量作為質(zhì)量評(píng)價(jià)依據(jù)，但小兒金翹顆粒的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中并未對(duì)其含量進(jìn)行控制，為了有效控制該制劑的質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜法對(duì)小兒金翹顆粒中連翹苷的含量進(jìn)行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent 1100高效液相色譜儀（包含G1315B型DAD檢測器，G1313A型自動(dòng)進(jìn)樣器，G1311A型泵），超聲波清洗器（SB5200DT，寧波新芝生物有限公司）。

1.2 試藥連翹苷對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110821-200609），小兒金翹顆粒（四川凱京制藥廠，批號(hào)：20100704，20101203，20110403），甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Agilent色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）；0.1%磷酸-乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫：0~15 min（73∶27），15~20 min（60∶40），20~25 min（27∶73）；檢測波長277 nm〔4-6〕；流速1.0 mL/min〔7〕；進(jìn)樣量10μL〔8〕。

圖1 HPLC色譜圖（A：對(duì)照品；B：供試品；C：陰性樣品；1：連翹苷）

2.2 甲醇濃度的考察精密稱取供試品8份，每份2.0 g，分別加濃度為30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的甲醇溶液20 mL，精密稱定，超聲提取30 min，補(bǔ)重，用0.45μm的微孔濾膜濾過，進(jìn)樣，測定峰面積并計(jì)算連翹苷的含量，結(jié)果表明用80%的甲醇提取，連翹苷的含量最高。

2.3 超聲提取時(shí)間的考察為研究供試品中連翹苷的最佳超聲提取時(shí)間，實(shí)驗(yàn)過程中考察了20、30、40、50、60 min，結(jié)果表明2.0 g供試品加入20 mL 80%的甲醇超聲提取30 min，供試品中連翹苷即可提取完全。

2.4 對(duì)照品溶液的制備精密稱取連翹苷對(duì)照品2.5 mg，于10 mL量瓶中，加入甲醇適量，溶解，定容，搖勻即得。

2.5 供試品溶液的制備取供試品2.0 g，精密稱定，置具塞燒瓶中，加80%甲醇溶液20 mL，精密稱定，超聲提取30 min，補(bǔ)重，即得。

2.6 陰性對(duì)照品溶液制備按小兒金翹顆粒的制備工藝制備缺連翹的陰性對(duì)照品，再按供試品溶液的制備方法同法操作，得陰性對(duì)照品溶液。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別取0.25 mg/mL的連翹苷對(duì)照品溶液2、5、10、15、18、20μL進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線〔9〕，結(jié)果連翹苷進(jìn)樣量在0.5~ 5.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為Y= 567.10X+3.8789，r=0.999 9。

3.2 精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，在同一色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣10μL，記錄峰面積并計(jì)算RSD為0.22%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)取同一供試品（20110403）6份，精密稱定，按供試品溶液制備方法處理，用0.45μm的微孔濾膜濾過，按“2.1”項(xiàng)下操作，記錄峰面積，結(jié)果連翹苷含量的RSD為0.3%，表明本方法重復(fù)性好。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)按“2.5”項(xiàng)制備供試品溶液，分別測定2、4、6、8、10、12、24 h后的峰面積，結(jié)果連翹苷的RSD為1.4%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 加樣回收率試驗(yàn)精密稱定已知含量的同一批號(hào)（20110403）供試品6份，按“表1”精密加入連翹苷對(duì)照品適量，按“2.5”項(xiàng)處理，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定峰面積，結(jié)果連翹苷的平均回收率為99.3%，RSD為0.25%，表明該方法的加樣回收率好。

表1 加樣回收率試驗(yàn)（n=6）

3.6 樣品含量測定取3個(gè)不同批號(hào)的供試品，按“2.5”項(xiàng)進(jìn)行處理，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測定，并計(jì)算測定結(jié)果。見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n=3）

4 討論

本實(shí)驗(yàn)分別以不同提取時(shí)間、不同甲醇濃度優(yōu)化連翹苷的提取工藝，最終得出80%甲醇超聲提取30 min可將連翹苷提取完全。

曾試驗(yàn)用0.1%磷酸-甲醇（65∶35）作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)連翹苷峰與雜質(zhì)峰分離效果不理想，目標(biāo)峰對(duì)稱性差。后采用0.1%磷酸-乙腈〔10〕作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)果表明供試品中連翹苷能達(dá)到基線分離，峰的對(duì)稱性好，雜質(zhì)峰少。

本方法操作簡單、重復(fù)性好，建議在修訂小兒金翹顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)加入對(duì)連翹苷的含量測定，以確保該藥品的質(zhì)量。

〔1〕國家藥典委員會(huì).國家藥品標(biāo)準(zhǔn).新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)〔S〕.66冊(cè).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008：46-49.

〔2〕馮衛(wèi)生，李珂珂，鄭曉柯.連翹化學(xué)成分的研究〔J〕.中國藥學(xué)雜志，2009，13（7）：490-492.

〔3〕段飛，張雙民，楊建雄，等.連翹葉提取物抑菌作用的研究〔J〕.西北藥學(xué)雜志，2005，20（2）：66-67.

〔4〕李堅(jiān)，冼婉筠，周建因，等.HPLC法測定銀翹解毒顆粒中連翹苷的含量〔J〕.鄖陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，29（2）：165-166.

〔5〕張國彪.HPLC測定清靈感冒顆粒中連翹苷的含量〔J〕.海峽醫(yī)藥，2008，20（8）：49-51.

〔6〕遲芳振，丁始陽，王金洲.HPLC法測定岑連片中連翹苷的含量〔J〕.中國藥師，2010，13（5）：688-699.

〔7〕夏伯侯，朱晶晶，王智民，等.連翹苷新增藥材定量標(biāo)準(zhǔn)研究〔J〕.中國中藥雜志，2010，35（16）：2110-2111.

〔8〕黃永剛，顧旭霞.HPLC法同時(shí)測定清熱解毒片中黃岑苷和連翹苷含量〔J〕.中國藥師，2009，12（6）：771-773.

〔9〕李清芳，張健.高效液相法測定桑菊連化痰口服液中連翹苷含量〔J〕.中醫(yī)研究，2011，24（9）：12-14.

〔10〕謝秉湘，李志梅，陳善超.連花清瘟膠囊中連翹苷和鹽酸麻黃堿的HPLC法測定〔J〕.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2010，41（9）：690-691.

*通信作者：楊永壽，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師.

（責(zé)任編輯 毛本勇）

Determination of Forsythin in Xiaoerjinqiao Granules by HPLC

LI Zhicheng,DENG Tao,YANG Yongshou*
（College of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali 671000,China）

Objective:To establish a method to determine the content of Forsythin in Xiaoerjinqiao Granules.Methods:High performance liquid chromatography（HPLC）was applied with the condition of 0.1%phosphoric acid-acetonitrile as mobile phase for gradient elution,the flow rate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 277 nm.Results:The calibration curve was linear in the range of 0.5-5.0μg for Forsythin,r=0.999 9;the average recovery was 99.3%,and relative standard deviation RSD=0.25%（n=6）. Conclusion:The established method is accurate and reliable,and can be used to determine the Forsythin in Xiaoerjinqiao Granules.

Forsythin;Xiaoerjinqiao Granules;HPLC

R917

A

1672-2345（2012）06-0023-03

大理學(xué)院大學(xué)生科研基金資助項(xiàng)目（DXS201114）

2011-11-18

2012-03-27

李志成，藥學(xué)專業(yè)2009級(jí)本科生.