液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定化妝品中的多種性激素

姜曉輝

（珠海市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東 珠海 519002）

0 引 言

化妝品中添加性激素，雖然在短時(shí)間內(nèi)可以起到促進(jìn)毛發(fā)生長、減緩皮膚老化、增加皮膚彈性的作用，但長期使用就會(huì)導(dǎo)致色素沉積，產(chǎn)生黑斑或皮膚萎縮，甚至有一定的致癌性。我國的《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》規(guī)定，化妝品中禁止添加性激素；因此，建立快速準(zhǔn)確的激素檢測(cè)方法具有重要意義。本文利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）同時(shí)檢測(cè)化妝品中的6種雌激素，兩種雄激素和3種孕激素，方法快速、簡便、靈敏度高，適合于日常檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

液質(zhì)聯(lián)用儀Aglient 6430，安捷倫科技有限公司；高速臺(tái)式離心機(jī)TDL-100，上海安亭科學(xué)儀器廠；臺(tái)式超聲波清洗器DL-120B，上海之信儀器有限公司。

睪酮、甲基睪酮、孕酮、醋酸甲地孕酮、甲羥孕酮乙酸酯、雌酮、雌二醇、雌三醇、炔雌醇、己烯雌酚、己烷雌酚等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，百靈威科技有限公司。

甲醇、乙腈均為色譜純，德國CNW公司；welchromRSPE BRP，月旭材料科技有限公司。

1.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取樣品0.5000g（貼膜取擠出的液體），化妝水和貼膜可以直接上樣，其他樣品加入5mL甲醇，超聲萃取至樣品與溶劑充分混勻，8000 r/min離心5min，提取甲醇層，加蒸餾水至25mL。精油樣品重復(fù)提取兩次，合并甲醇層，在水浴上蒸去甲醇至2mL左右，然后加蒸餾水至25mL。然后分別用5mL甲醇和5mL水先后洗滌SPE小柱，上樣，用2mL 25%的甲醇水溶液淋洗，用2mL 80%甲醇水溶液洗脫。洗脫液上機(jī)測(cè)試。

1.3 儀器分析條件

色譜條件：色譜柱為月旭Ultimate XB-C8 2.1m×100mm×3μm；流動(dòng)相為水∶乙腈＝40∶60，流速 0.3mL/min。質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；毛細(xì)管電壓4.0 kV；噴霧器壓力 2.895×105Pa；干燥氣流速 10 L/min；干燥氣溫度為350℃；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。其中孕激素和雄激素采用正模式，雌激素采用負(fù)模式。其他質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。

表1 激素質(zhì)譜分析參數(shù)1）

2 結(jié)果和討論

2.1 前處理?xiàng)l件的選擇

與溶劑萃取上機(jī)測(cè)試的方法相比較，通過SPE小柱處理樣品可以將樣品進(jìn)一步凈化并濃縮，提高了定量回收率和檢出靈敏度，也減少了溶劑的用量和工作時(shí)間。

2.2 儀器條件的選擇

分別在正負(fù)兩種模式下考察了不同激素的母離子強(qiáng)度，雌激素采用負(fù)模式，雄激素和孕激素采用正模式。盡管串聯(lián)質(zhì)譜有較好的檢測(cè)性能，但是好的色譜分離可以減少雜質(zhì)的干擾和基質(zhì)的影響，有利于提高定性和定量的準(zhǔn)確性。因此，分別考察了C8和C18兩種色譜柱的分離度，實(shí)驗(yàn)表明樣品在C8柱上的分離更完全，峰形也更加對(duì)稱，所以選擇C8柱作為分離柱。由于各激素均溶于甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，因此使用水∶甲醇和水∶乙腈作為流動(dòng)相，并嘗試多種流動(dòng)相配比。選擇水∶甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，水量從低到高分別嘗試均發(fā)現(xiàn)有一個(gè)或幾個(gè)激素不出峰，因此選擇水∶乙腈作流動(dòng)相，綜合考慮分離效果及分析時(shí)間，最終選擇水∶乙腈＝40∶60，以 0.3mL/min的流速等度洗脫。

2.3 定量分析

按上述色譜質(zhì)譜條件，得到正模式下雄激素和孕激素的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（TIC），如圖1所示；負(fù)模式下雌激素下的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖（TIC），如圖2所示。11種激素的定量標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及相關(guān)系數(shù)、檢出限見表2。不同狀態(tài)樣品的三水平加標(biāo)回收率平均值及精密度測(cè)定結(jié)果如表3所示。不同激素的回收率在73%～105%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于10%。

圖1 雌激素色譜圖（TIC）

表2 工作曲線及檢出限

3 結(jié)束語

與《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》中環(huán)己烷液－液萃取方法相比較，固相萃取方法節(jié)省了大量的有機(jī)溶劑，無需蒸餾濃縮，節(jié)省了前處理的時(shí)間。用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中的多種性激素，與傳統(tǒng)的液相色譜法相比較，質(zhì)譜的定性能力不僅明顯優(yōu)于紫外及熒光分光光度的檢測(cè)方法，而且比二極管陣列檢測(cè)器的定性準(zhǔn)確度更高。優(yōu)化的質(zhì)譜條件，使方法的靈敏度更高，檢出限也遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)的液相色譜法，而且操作簡單，快速，定量準(zhǔn)確。本文提出的方法可為功能性化妝品中性激素多組分同時(shí)監(jiān)測(cè)提供參考。

表3 加標(biāo)回收率及合并相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

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