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      EV71感染手足口病患兒Th細(xì)胞免疫變化及其意義

      2012-04-29 19:26:20白敏韓宜姚
      中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生 2012年32期
      關(guān)鍵詞:手足口病干擾素

      白敏 韓宜姚

      [摘要] 目的 探討EV71感染手足口病患兒Th 細(xì)胞免疫平衡變化及其對(duì)疾病進(jìn)展的影響。 方法 選擇84例手足口病患兒分為普通組和重癥組,另選擇30例健康兒童作為對(duì)照,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)靜脈血Th1/Th2細(xì)胞表達(dá)水平變化,采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清IL-4及IFN-γ表達(dá)水平變化。 結(jié)果 重癥組及普通組患兒靜脈血Th1及Th1/Th2表達(dá)水平低于對(duì)照組,Th2高于對(duì)照組,IL-4及IFN-γ表達(dá)水平低于對(duì)照組。重癥組Th1及Th1/Th2表達(dá)水平低于普通組,Th2高于普通組,IL-4及IFN-γ表達(dá)水平低于普通組。 結(jié)論 EV71感染手足口病患兒Th細(xì)胞免疫異常,可能同手足口病患兒的發(fā)病及疾病進(jìn)展有關(guān)。

      [關(guān)鍵詞] 手足口?。荒c道病毒71;Th細(xì)胞免疫;白細(xì)胞介素4;γ干擾素

      [中圖分類號(hào)] R725.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B[文章編號(hào)] 1673-9701(2012)32-0077-02

      手足口病是學(xué)齡前兒童常見傳染性疾病,尤其以嬰幼兒高發(fā),手足口病以手、足及口部位的皮損為最常見的臨床表現(xiàn),嚴(yán)重者可導(dǎo)致患兒的多器官功能損害甚至功能衰竭而致患兒臨床死亡。手足口病是由病毒感染引起的傳染性疾病,其中以EV71病毒及CoxA16病毒感染最為常見。近年來的研究顯示[1],手足口病患兒在發(fā)病過程中,存在免疫功能失調(diào)的狀態(tài),患兒體內(nèi)的細(xì)胞免疫及體液免疫均存在不同程度的異常,并且與疾病的進(jìn)展有關(guān)。本文對(duì)EV71病毒感染所致的手足口病患兒Th 細(xì)胞免疫平衡變化及其對(duì)疾病進(jìn)展的影響進(jìn)行研究?,F(xiàn)報(bào)道如下:

      1 資料與方法

      1.1 臨床資料

      選擇2010年10月~2012年4月我院收治的手足口病患兒84例,均經(jīng)PCR診斷為EV71病毒感染所致手足口病,其中男49例,女35例,年齡0.4~9.2歲,平均(2.9±2.4)歲,患兒按衛(wèi)生部醫(yī)政司發(fā)布的《手足口病診療指南(2010)》[2]分為普通型52例及重癥型32例;另選擇30名健康幼兒作為對(duì)照組,其中男18例,女12例,年齡1~8歲,平均(2.8±1.7)歲?;純和瑢?duì)照組兒童的年齡、性別經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性。

      1.2 主要儀器及試劑

      流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司),721型分光光度計(jì)(北京儀器廠),CD3+、CD4+及CD8+抗體(美國(guó)BD公司),IL-4、IFN-γ檢測(cè)試劑盒(南京建成生物工程研究所),IL-4抗體和IFN-γ抗體(武漢波士德生物試劑公司)。

      1.3 標(biāo)本采集及檢測(cè)

      1.3.1 Th細(xì)胞檢測(cè)患兒清晨抽取空腹靜脈血,加入枸櫞酸鈉抗凝,PBS緩沖液調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/L,室溫暗處孵育30 min,每管加入500 μL溶血素裂解紅細(xì)胞,靜置20 min采用PBS緩沖液洗滌,500 G/min離心5 min,加入PBS緩沖液洗滌后上機(jī)檢測(cè),采用CD3+抗體標(biāo)記T細(xì)胞,采用CD4+抗體區(qū)分Th細(xì)胞亞群,IFN-γ和IL-4抗體篩選Th1、Th2細(xì)胞。檢測(cè)完畢后采用Cellquestpro軟件進(jìn)行分析。

      1.3.2 IL-4、IFN-γ表達(dá)檢測(cè)患兒靜脈血低溫分離血清,100 μL標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,100 μL樣品加入96孔板各反應(yīng)孔,37℃溫育60 min,PBS緩沖液沖洗,加入 X Biotin混勻后37℃溫育60 min,加入X HRP充分反應(yīng),TMB顯色液,37℃溫育15 min,H2SO4終止反應(yīng),ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定IL-4、IFN-γ水平,分別于450 nm處檢測(cè)吸光度,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IL-4、IFN-γ濃度。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

      數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料以(x±s)表示,采用方差分析,組間比較采用t檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05,P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 各組靜脈血Th1/Th2表達(dá)水平變化

      重癥組及普通組患兒靜脈血Th1及Th1/Th2表達(dá)水平低于對(duì)照組,Th2高于對(duì)照組,重癥組Th1及Th1/Th2低于普通組,Th2高于普通組。見表1。

      2.2 各組靜脈血IL-4、IFN-γ表達(dá)水平變化

      重癥組及普通組患兒血清IL-4及IFN-γ表達(dá)水平低于對(duì)照組。重癥組患兒血清IL-4及IFN-γ表達(dá)水平低于普通組。見表2。

      3 討論

      手足口病是兒童常見傳染性疾病,以手、足部及口腔黏膜潰瘍?yōu)橹饕呐R床表現(xiàn),嚴(yán)重者可引起循環(huán)系統(tǒng)、肺部及腦部等多系統(tǒng)損害而導(dǎo)致患兒臨床死亡。病毒感染是手足口病的致病原因,其中EV71病毒是主要的致病病毒之一。近年來的研究結(jié)果顯示[3],病毒感染能夠?qū)е禄純旱拿庖呦到y(tǒng)功能失調(diào),T淋巴細(xì)胞免疫在腸道病毒感染后能夠發(fā)生免疫調(diào)節(jié)作用,并且參與疾病的進(jìn)展,手足口病患兒的T淋巴細(xì)胞的數(shù)量及腫瘤均發(fā)生明顯變化,導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞的免疫功能失衡,而且小兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不完善,T淋巴細(xì)胞免疫的紊亂可能導(dǎo)致患兒的疾病進(jìn)展。

      本研究發(fā)現(xiàn),手足口病患兒的Th1表達(dá)水平下降,Th2表達(dá)水平上升,Th1/Th2比值下降,Th細(xì)胞是T細(xì)胞的亞群,分為Thl、Th2、Th0細(xì)胞,其中Th1介導(dǎo)細(xì)胞免疫,Th2主要介導(dǎo)體液免疫,Th1活化后能夠產(chǎn)生IFN-γ、TNF-β等具有炎癥拮抗作用的細(xì)胞因子,誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活化。Th2細(xì)胞活化后能夠產(chǎn)生具有強(qiáng)烈致炎作用及趨化誘導(dǎo)作用的IL-4、IL-5、IL-10和IL-13等細(xì)胞因子,調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞的功能,促進(jìn)B淋巴細(xì)胞的活化及免疫球蛋白的合成[4]。在正常機(jī)體內(nèi),Thl及Th2 能夠相互轉(zhuǎn)化并維持動(dòng)態(tài)平衡,保持機(jī)體的穩(wěn)定性。但在病理狀態(tài)下,Thl及Th2細(xì)胞受外來抗原信號(hào)的刺激功能發(fā)生改變,細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)平衡被破壞,其中Th1亞群的功能增強(qiáng)及Th2亞群的功能減弱最為典型,Thl/Th2的比值發(fā)生變化,發(fā)生免疫平衡漂移,導(dǎo)致Th1向Th2亞群分化,機(jī)體的免疫功能發(fā)生變化[5]。細(xì)胞免疫是病毒感染的第一道防線,手足口病患兒Th1細(xì)胞數(shù)量及功能下調(diào)導(dǎo)致IFN-γ等具有免疫介導(dǎo)作用的細(xì)胞因子減少,導(dǎo)致免疫細(xì)胞對(duì)EV71病毒的殺傷作用減弱[6]。在各組比較中發(fā)現(xiàn),手足口病患兒靜脈血的Th細(xì)胞的亞群分化發(fā)生明顯失調(diào),手足口病患兒靜脈血Th1及Th1/Th2降低,Th2比例升高,且重癥組表現(xiàn)更為明顯,說明在手足口病患兒體內(nèi)存在Th細(xì)胞免疫漂移現(xiàn)象,并與患兒的疾病進(jìn)展情況相關(guān)。

      對(duì)其下游的細(xì)胞因子IL-4及IFN-γ水平比較證實(shí),手足口病患兒的IL-4及IFN-γ均明顯下降,且重癥組同普通組的IL-4及IFN-γ表達(dá)水平降低得更為明顯,IL-4及IFN-γ是Th2及Th1表達(dá)的細(xì)胞因子,IL-4水平的下降說明Th2細(xì)胞可能絕對(duì)數(shù)的下降或者功能降低,而表1中Th1/Th2比值的降低可能是Th1下降更為明顯所致[7],或者T細(xì)胞免疫抑制后T細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量下降導(dǎo)致Th2的比例相對(duì)升高。本研究結(jié)果說明患兒的整個(gè)Th細(xì)胞免疫處于抑制狀態(tài),Th淋巴細(xì)胞的輔助作用是B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫的必要調(diào)節(jié)因子,Th細(xì)胞免疫抑制能夠?qū)е禄純后w液免疫功能下降,B細(xì)胞表達(dá)的IgG、IgA及IgM等免疫球蛋白水平下降[8],引起患兒的細(xì)胞免疫及體液免疫能力減弱,對(duì)病毒的清除能力下降,導(dǎo)致手足口病患兒的病情進(jìn)展。

      [參考文獻(xiàn)]

      [1]趙明奇,連廣琬,朱冰,等. 手足口病患兒外周血淋巴細(xì)胞亞群的研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2010,14(5):684-686.

      [2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 手足口病診療指南(2010)年版[J]. 國(guó)際呼吸雜志,2010,30(24):1473-1475.

      [3]莫揚(yáng). 手足口病危重型患兒淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白檢測(cè)[J]. 微循環(huán)學(xué)雜志,2011,21(4):58-59.

      [4]楊曉泉,葉曉明,農(nóng)少云,等. 手足口病患兒的免疫功能[J]. 實(shí)用臨床兒科雜志,2011,26(22):1764,1768.

      [5]農(nóng)少云,梁娟英,楊曉泉. 手足口病患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白檢測(cè)的意義[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(11):1287-1288.

      [6]張玉蘭,劉小慧. 手足口病患兒細(xì)胞免疫功能的改變及其臨床意義[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)學(xué),2011,12(5):69-70.

      [7]林路洋,李常興,曹開源,等. 單純皰疹-II 型病毒感染的皮損部位病毒載量與外周血 Th及Tc 的相關(guān)性研究[J]. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2009,9(9):994-997.

      [8]熊金鳳,王云芬,楊興林,等. 手足口病患兒免疫球蛋白檢測(cè)結(jié)果分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2012,9(7):837-838.

      (收稿日期:2012-08-02)

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