• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    間充質(zhì)干細胞治療椎間盤退行性變的研究進展

    2012-04-18 04:57:39超,李
    脊柱外科雜志 2012年3期
    關(guān)鍵詞:蛋白聚糖膠原椎間盤

    李 超,李 明

    腰痛是臨床常見病之一,據(jù)統(tǒng)計約有85%的人一生中會出現(xiàn)該癥狀,是45歲以上的人喪失勞動能力的主要原因之一。椎間盤退行性疾病(disc degeneration disease,DDD)是腰痛主要的原因之一。傳統(tǒng)的脊柱融合的治療方法能夠有效地緩解疼痛,但會導(dǎo)致脊柱活動度的下降和鄰近椎間盤的退變。間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植治療腰椎退行性疾病作為新型的治療手段,與傳統(tǒng)方法相比有很多優(yōu)勢,在基礎(chǔ)與臨床研究方面都取得了很大的進展。

    1 DDD的病理改變

    DDD作為與年齡密切相關(guān)的疾病,目前的確切病因尚不清楚。各種病因,如年齡、遺傳因素、吸煙等[1]共同作用,導(dǎo)致了椎間盤的病理變化。①細胞種類的改變:終板多由圓形的軟骨樣細胞構(gòu)成,而纖維環(huán)多由狹長的軟骨樣細胞構(gòu)成,這兩部分的細胞成分較少變化。未成熟的髓核中存在部分脊索細胞,相對于其他細胞而言,有著更強的分泌蛋白聚糖與Ⅱ型膠原的能力,隨著年齡的增長(約4~10歲)逐漸被軟骨樣的細胞替代,脊索細胞的消失被認為是椎間盤退變的重要原因之一[2]。②細胞老化壞死與細胞凋亡:Le Maitre等[3]發(fā)現(xiàn)在退化的椎間盤中P16INK4A,β半乳糖苷酶等細胞老化的標志物表達上升,同時細胞的增值能力下降。隨著細胞的老化與營養(yǎng)供應(yīng)的不足,椎間盤的微環(huán)境出現(xiàn)變化,包括氧分壓、PH值、自由基的增加等[4],微環(huán)境的改變誘導(dǎo)了細胞的壞死與凋亡。據(jù)報道,退變的椎間盤壞死的細胞比例可高達50%[5]。③細胞表達的變化:退變的椎間盤細胞蛋白合成結(jié)構(gòu)與生長因子等均發(fā)生了改變,如Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ型膠原纖維與白細胞介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)、IL-1β、IL-6、IL-1-RI含量的增加,Ⅱ、Ⅸ型膠原纖維、蛋白聚糖、IL-1-Ra含量的降低[6],細胞外基質(zhì)表達減少。特別是Ⅰ/Ⅱ型膠原蛋白比例的上升和蛋白聚糖、基質(zhì)含量的減少,被認為是DDD特征性的病理變化之一。上述細胞組織在病理狀態(tài)下的改變最終導(dǎo)致椎間盤水含量的降低,凝膠狀髓核逐漸干裂,加之外層纖維環(huán)張力的下降,最終導(dǎo)致了椎間盤高度的下降、纖維環(huán)的破裂和髓核的疝出。

    2 MSC的特點

    MSC是來自于未成熟的胚胎結(jié)締組織的多能干細胞,在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細胞,連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能。在人的骨髓中,MSC的密度約為百萬分之一到萬分之一,其免疫表型表現(xiàn)為CD29+,CD44+,CD71+,CD90+,CD106+,CD14-,CD4-,CD45-,HLA-Ⅱ陰性。MSC移植應(yīng)用于治療DDD有其自身的優(yōu)勢:①MSC來源廣泛,存在于骨髓、脂肪等間質(zhì)組織,相對于自身椎間盤髓核細胞(nucleus pulposuscell,NPC)移植而言,其提取不會損傷椎間盤,易于提取和培養(yǎng)增殖。②退化的椎間盤中的組織基因表達改變,合成Ⅱ型膠原與蛋白聚糖的能力下降,MSC不存在此問題。③MSC存在自我復(fù)制和分化的能力,相對于成熟細胞,MSC更易于誘導(dǎo)分化。④MSCHLA-Ⅱ型抗原陰性,免疫反應(yīng)較弱,為同種異體移植提供了可能。

    3 MSC分化的誘導(dǎo)

    3.1 生物支架

    生物支架能夠模擬椎間盤的微環(huán)境,提高MSC移植效率。Merceron等[7]提出生物支架必須兼?zhèn)渖锝M織相容性,體內(nèi)降解能力,三維的內(nèi)部構(gòu)像,合適的機械強度等條件。目前常用的有藻酸鹽凝膠、聚氨基葡萄糖凝膠、藻酸丙二醇酯、膠原海綿等多種,哪種支架能夠提供最佳的生物學效果目前尚無定論[4]。Gruber等[8]對比了膠原海綿、膠原凝膠、瓊脂糖、藻酸鹽,發(fā)現(xiàn)膠原海綿支架有著良好的誘導(dǎo)細胞增殖與基因表達能力,但是盡管膠原凝膠支架中的細胞增殖能力最強,其合成基質(zhì)的能力較低,限制了其應(yīng)用。Richardson等[9]報道了復(fù)合左旋乳酸支架能夠誘導(dǎo)MSC向椎間盤中NPC分化,隨后的研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖-甘油磷酸酯凝膠可誘導(dǎo)MSC向軟骨樣細胞分化,并表達膠原與蛋白聚糖。Vinatier等[10]通過動物實驗證實了水凝膠類支架有著良好的效果,其誘導(dǎo)效果與其他支架相近,其可注射的特點使其在臨床應(yīng)用中有著更廣闊的前景。

    3.2 MSC培養(yǎng)的微環(huán)境

    正常人體組織中椎間盤的環(huán)境可以誘導(dǎo)MSC細胞向NPC分化,其作用與通過膠原等大分子和MSC膜表面的信號通路接觸有關(guān),目前認為NPC的存在可以誘導(dǎo)MSC細胞向NPC分化,而MSC也可促進NPC自身的修復(fù)與表達。Allon等[11]將 MSC與NPC共同培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)MSC在保持自身數(shù)量的同時存在向軟骨樣細胞分化的現(xiàn)象,其結(jié)構(gòu)全部為外層的軟骨樣細胞包裹內(nèi)層的MSC細胞,并在培養(yǎng)基中呈微衛(wèi)星放射樣分布。Sobajima等[12]將MSC與NPC按照不同的比例混合培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)NPC與MSC比例為75∶25或50∶50時培養(yǎng)基產(chǎn)生的細胞外基質(zhì)含量最高。MSC培養(yǎng)的物理環(huán)境,如低氧、PH值等可誘導(dǎo)MSC向能夠分泌蛋白聚糖及基質(zhì)的軟骨樣細胞分化。Felka等[13]通過MSC的體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)低氧能夠誘導(dǎo)MSC向軟骨樣細胞分化,并增加細胞外基質(zhì)的分泌。Wuertz等[14]提取兔MSC在體外培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)酸性環(huán)境可抑制MSC的分化與增殖。

    3.3 細胞因子

    細胞因子可以調(diào)節(jié)MSC的增殖、分化和基質(zhì)的合成[15],Steck 等[16]提取人 MSC 在含轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β,TGT-β)藻酸鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)TGF-β可促進MSC表達轉(zhuǎn)錄因子9分泌,并提高膠原與聚糖蛋白的表達。Yang等[17]將54只椎間盤損傷模型兔隨機分為3組,分別予纖維凝膠-MSC-TGF-β1、纖維凝膠-TGF-β1 及空白對照處理,發(fā)現(xiàn)第1組可有效減緩?fù)米甸g盤退變。IGF-1可以誘導(dǎo)MSC向軟骨組織的分化,Ehlicke等[18]在體外以不同細胞因子誘導(dǎo)MSC向NPC分化3周,以熒光免疫法檢測結(jié)果,發(fā)現(xiàn)胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、成纖維生長因子-2(fibroblast growth factor-2,F(xiàn)GF-2),血小板衍生生長因子(platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)有誘導(dǎo)MSC分化與基質(zhì)合成的作用。Shen等[19]以 TGF-β3 同骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)誘導(dǎo)MSC分化,發(fā)現(xiàn)TGF-β3明顯增加蛋白聚糖及Ⅱ型膠原的表達,而這一作用可被BMP-2加強。Chiou等[20]的研究發(fā)現(xiàn)FGF-2可能通過MAPK信號旁路誘導(dǎo)MSC向軟骨樣細胞分化。Imai等[21]將人NPC在含重組人成 骨 蛋 白-1(recombination human osteegenic protein-1,rhOP-1)培養(yǎng)基中培養(yǎng)14 d,發(fā)現(xiàn)rhOP-1可促進細胞增殖與產(chǎn)物表達。在MSC與NPC共培養(yǎng)的過程中,MSC與NPC可相互促進這些細胞因子的分泌,并以此誘導(dǎo)MSC向NPC分化、NPC的增殖及產(chǎn)物的表達。

    4 MSC體內(nèi)植入研究

    Zhang等[22]報道了MSC與髓核細胞混合培養(yǎng)后植入山羊椎間盤退變模型中,經(jīng)過6個月后發(fā)現(xiàn)實驗組椎間盤中蛋白聚糖濃度較對照組(只注入培養(yǎng)基)高45%。Yang等[17]將家兔椎間盤退變模型分為MSC-TGF-β1聯(lián)合注入組,單純 TGF-β1注入組和空白組,結(jié)果顯示相對于單純TGF-β1注入組,MSC有效減緩椎間盤退變,膠原及蛋白多糖的積聚明顯多于空白組與單純 TGF-β1注入組。Sakai等[23]在家兔退變椎間盤模型制成2周后,分別移植入MSC,24周后檢查正常椎間盤、模擬手術(shù)椎間盤和移植后椎間盤的X線片椎間盤高度、MRI T2信號的改變,組織學、免疫組織化學和基質(zhì)關(guān)聯(lián)的基因表達。結(jié)果顯示移植MSCs組椎間盤的高度為正常對照組的91%、T2信號強度為正常對照組81%,免疫組織化學和基因表達分析有蛋白多糖積聚。而模擬手術(shù)椎間盤只有正常對照組的61%和60%。Crevensten等[24]將白鼠異體MSC以透明質(zhì)酸凝膠為支架注入尾骨椎間盤內(nèi),單獨注射凝膠為對照組。2周后以免疫熒光法可觀察到存活MSC細胞,4周后發(fā)現(xiàn)實驗組椎間盤較對照組有增高趨勢。Sobajima等[12]以 β-半乳糖苷酶標記兔 MSC,分別注入12只兔L2/L3/L4/L5髓核內(nèi),在3周、6周、12周及24周觀察干細胞情況,發(fā)現(xiàn)24周時MSC存活良好,未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng),并且在周圍纖維環(huán)中觀測到MSC的存在。Wang 等[25]對獼猴 L3/L4、L5/L6椎間盤摘除術(shù)后,隨機分組做陶瓷椎間盤、自體髂骨移植融合及骨髓MSC陶瓷混合融合等3種替代治療,3個月分析融合及基質(zhì)、膠原產(chǎn)生情況,結(jié)果顯示混合組融合最佳,相對于其他2組膠原與蛋白聚糖的積累有顯著差異。Hiyama等[26]將犬分為不作處理對照組,髓核摘除組和MSC組,其中MSC組在髓核摘除4周后給予MSC注入,12周后觀察結(jié)果,發(fā)現(xiàn)MSC組椎間盤退變較其他組緩慢,其作用可能是通過表達人凋亡相關(guān)因子配體以維持髓核免疫豁免狀態(tài)。Yang等[27]將異體鼠MSC注入鼠退變椎間盤內(nèi),觀察12周,發(fā)現(xiàn)NPC蛋白聚糖基因表達上調(diào),而原位雜交與免疫組化分析可發(fā)現(xiàn)MSC向NPC分化的現(xiàn)象,證實MSC可通過分化與增殖為NPC并促進NPC產(chǎn)物表達在體內(nèi)發(fā)揮其保護椎間盤的作用。Henriksson等[28]將椎間盤退變豬分為2組,分別給予人MSC與人MSC-水凝膠,在1個月、3個月和6個月觀察,MRI發(fā)現(xiàn)所有椎間盤均出現(xiàn)退變,但人MSC-水凝膠組退變較慢,證實水凝膠類在機體內(nèi)仍可發(fā)揮其促進MSC分化與基因表達的作用,同時探討了異種MSC用于治療DDD的可能性。Wei等[29]將熒光標記人MSC分為CD34+組與CD34-組注入鼠尾骨椎間盤,42 d后發(fā)現(xiàn)MSC存活情況良好,在21 d后發(fā)現(xiàn)CD34-組MSC存在向NPC分化現(xiàn)象,而CD34+無此現(xiàn)象,且在所有椎間盤內(nèi)均無炎細胞的聚集,證實異種MSC可存活、分化、表達且有免疫豁免。由于MSC治療DDD開展時間相對較短,其安全性尚有待進一步驗證,臨床報道的人體實驗很少。Yoshikawa等[30]報道了2名腰椎椎管狹窄合并椎間盤退行性變的病例,在髂骨取MSC在體外含自體血清的培養(yǎng)基增殖后,以膠原海綿為支架植入退化椎間盤內(nèi),2年后行MRI檢查,椎間盤無退化跡象。

    應(yīng)用MSC治療DDD,針對病因治療,避免了傳統(tǒng)治療手段脊椎活動受限、相鄰節(jié)段椎間盤退變等并發(fā)癥,在動物實驗中已取得了良好的效果,擁有廣闊的臨床應(yīng)用前景[31]。然而,還有許多問題亟待解決:①細胞因子與髓核細胞誘導(dǎo)MSC分化的機制及分子生物學基礎(chǔ)尚不明確。②缺乏嚴密設(shè)計的人體相關(guān)試驗,臨床安全性未得到評估。③MSC移植作為治療手段,在臨床應(yīng)用的時機有待確定。相信在醫(yī)務(wù)工作者的不懈努力下,這些問題不日將得到解決,MSC將在治療椎間盤退變性疾病方面發(fā)揮更大的作用。

    [1] Kalichman L,Hunter DJ.The genetics of intervertebral disc degeneration.Familial predisposition and heritability estimation[J].Joint Bone Spine,2008,75(4):383-387.

    [2] Guehring T,Wilde G,Sumner M,et al.Notochordal intervertebral disc cells:sensitivity to nutrient deprivation[J].Arthritis Rheum,2009,60(4):1026-1034.

    [3] Le Maitre CL,F(xiàn)reemont AJ,Hoyland JA.Accelerated cellular senescence in degenerate intervertebral discs:a possible role in the pathogenesis of intervertebral disc degeneration[J].Arthritis Res Ther,2007,9(3):R45.

    [4] Woods BI,Sowa G,Vo N,et al.A Change in Strategy:The Use of Regenerative Medicine and Tissue Engineering to Augment the Course of Intervertebral Disc Degeneration[J].Oper Tech Orthop,2010,20(2):144-153.

    [5] Reza AT,Nicoll SB.Characterization of novel photocrosslinked carboxymethylcellulose hydrogels for encapsulation of nucleus pulposus cells[J].Acta Biomater,2010,6(1):179-186.

    [6] Zhao CQ,Wang LM,Jiang LS,et al.The cell biology of intervertebral disc aging and degeneration[J].Ageing Res Rev,2007,6(3):247-261.

    [7] Merceron C,Vinatier C,Clouet J,et al.Adipose-derived mesenchymal stem cells and biomaterials for cartilage tissue engineering[J].Joint Bone Spine,2008,75(6):672-674.

    [8] Gruber HE,Leslie K,Ingram J,et al.Cell-based tissue engineering for the intervertebral disc:in vitro studies of human disc cell gene expression and matrix production within selected cell carriers[J].Spine J,2004,4(1):44-55.

    [9] Richardson SM,Hughes N,Hunt JA,et al.Human mesenchymal stem cell differentiation to NP-like cells in chitosan-glycerophosphate hydrogels[J].Biomaterials,2008,29(1):85-93.

    [10] Vinatier C,Mrugala D,Jorgensen C,et al.Cartilage engineering:a crucial combination of cells,biomaterials and biofactors[J].Trends Biotechnol,2009,27(5):307-314.

    [11] Allon AA,Aurouer N,Yoo BB,et al.Structured coculture of stem cells and disc cells prevent disc degeneration in a rat model[J].Spine J,2010,10(12):1089-1097.

    [12] Sobajima S,Vadala G,Shimer A,et al.Feasibility of a stem cell therapy for intervertebral disc degeneration[J].Spine J,2008,8(6):888-896.

    [13] Felka T,Schfer R,Schewe B,et al.Hypoxia reduces the inhibitory effect of IL-1beta on chondrogenic differentiation of FCS-free expanded MSC[J].Osteoarthritis Cartilage,2009,17(10):1368-1376.

    [14] Wuertz K,Godburn K,Neidlinger-Wilke C,et al.Behavior of mesenchymal stem cells in the chemical microenvironment of the intervertebral disc[J].Spine(Phila Pa 1976),2008,33(17):1843-1849.

    [15] Chen WH,Liu HY,Lo WC,et al.Intervertebral disc regeneration in an ex vivo culture system using mesenchymal stem cells and platelet-rich plasma[J].Biomaterials,2009,30(29):5523-5533.

    [16] Steck E,Bertram H,Abel R,et al.Induction of intervertebral disc-like cells from adult mesenchymal stem cells[J].Stem Cells,2005,23(3):403-411.

    [17] Yang H,Wu J,Liu J,et al.Transplanted mesenchymal stem cells with pure fibrinous gelatin-transforming growth factor-beta1 decrease rabbit intervertebral disc degeneration[J].Spine J,2010,10(9):802-810.

    [18] Ehlicke F,F(xiàn)reimark D,Heil B,et al.Intervertebral disc regeneration:influence of growth factors on differentiation of human mesenchymal stem cells(hMSC)[J].Int J Artif Organs,2010,33(4):244-252.

    [19] Shen B,Wei A,Tao H,et al.BMP-2 enhances TGF-beta3-mediated chondrogenic differentiation of human bone marrow multipotent mesenchymal stromal cells in alginate bead culture[J].Tissue Eng Part A,2009,15(6):1311-1320.

    [20] Chiou M,Xu Y,Longaker MT.Mitogenic and chondrogenic effects of fibroblast growth factor-2 in adipose-derived mesenchymal cells[J].Biochem Biophys Res Commun,2006,343(2):644-652.

    [21] Imai Y,Miyamoto K,An HS,et al.Recombinant human osteogenic protein-1 upregulates proteoglycan metabolism of human anulus fibrosus and nucleus pulposus cells[J].Spine(Phila Pa 1976),2007,32(12):1303-1309.

    [22] Zhang Y,Drapeau S,Howard SA,et al.Transplantation of goat bone marrow stromal cells to the degenerating intervertebral disc in a goat disc injury model[J].Spine(Phila Pa 1976),2011,36(5):372-377.

    [23] Sakai D,Mochida J,Iwashina T,et al.Regenerative effects of transplanting mesenchymal stem cells embedded in atelocollagen to the degenerated intervertebral disc[J].Biomaterials,2006,27(3):335-345.

    [24] Crevensten G,Walsh AJ,Ananthakrishnan D,et al.Intervertebral disc cell therapy for regeneration:mesenchymal stem cell implantation in rat intervertebral discs[J].Ann Biomed Eng,2004,32(3):430-434.

    [25] Wang T,Dang G,Guo Z,et al.Evaluation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell-calcium phosphate ceramic composite for lumbar fusion in rhesus monkey interbody fusion model[J].Tissue Eng,2005,11(7-8):1159-1167

    [26] Hiyama A,Mochida J,Iwashina T,et al.Transplantation of mesenchymal stem cells in a canine disc degeneration model[J].J Orthop Res,2008,26(5):589-600.

    [27] Yang F,Leung VY,Luk KD,et al.Mesenchymal stem cells arrest intervertebral disc degeneration through chondrocytic differentiation and stimulation of endogenous cells[J].Mol Ther,2009,17(11):1959-1966.

    [28] Henriksson HB,Svanvik T,Jonsson M,et al.Transplantation of human mesenchymal stems cells into intervertebral discs in a xenogeneic porcine model[J].Spine(Phila Pa 1976),2009,34(2):141-148.

    [29] Wei A,Tao H,Chung SA,et al.The fate of transplanted xenogeneic bone marrow-derived stem cells in rat intervertebral discs[J].J Orthop Res,2009,27(3):374-379.

    [30] Yoshikawa T,Ueda Y,Miyazaki K,et al.Disc regeneration therapy using marrow mesenchymal cell transplantation:a report of two case studies[J].Spine(Phila Pa 1976),2010,35(11):E475-480.

    [31] 張燕,吳劍宏,王超鋒,等.非接觸式共培養(yǎng)體系對臍帶間充質(zhì)干細胞向類髓核細胞的誘導(dǎo)分化效應(yīng)[J].脊柱外科雜志,2011,9(4):249-252.

    猜你喜歡
    蛋白聚糖膠原椎間盤
    基于T2mapping成像的后纖維環(huán)與腰椎間盤突出相關(guān)性研究
    頸腰痛雜志(2023年2期)2023-05-05 02:20:32
    ProDisc-C人工頸椎間盤在頸椎間盤突出癥患者中的臨床應(yīng)用
    磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在肝細胞癌組織中的表達及臨床意義
    膠原無紡布在止血方面的應(yīng)用
    核心蛋白聚糖對人甲狀腺乳頭狀癌CGTHW3細胞增殖的影響
    競爭性ELISA法測定軟骨細胞蛋白聚糖代謝片段的可行性分析
    紅藍光聯(lián)合膠原貼治療面部尋常痤瘡療效觀察
    氨基葡萄糖對IL-1β誘導(dǎo)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細胞蛋白聚糖分解代謝的影響
    人工頸椎間盤置換術(shù)治療急性頸椎間盤突出癥12例
    椎間盤源性腰痛的影像學診斷
    丰满乱子伦码专区| 国产精品久久久久成人av| av网站免费在线观看视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 精品国产露脸久久av麻豆| av黄色大香蕉| 国产人妻一区二区三区在| 日本与韩国留学比较| 亚洲图色成人| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲在久久综合| 黄色视频在线播放观看不卡| 激情 狠狠 欧美| 观看av在线不卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久精品94久久精品| 国产 一区精品| 国产欧美亚洲国产| 人妻少妇偷人精品九色| 国产精品一及| 制服丝袜香蕉在线| 国产伦精品一区二区三区四那| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲国产最新在线播放| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久精品久久精品一区二区三区| 日韩成人伦理影院| 亚洲性久久影院| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品国产三级专区第一集| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲av男天堂| av网站免费在线观看视频| 在线观看免费视频网站a站| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产精品一区二区性色av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产亚洲一区二区精品| 97在线视频观看| 身体一侧抽搐| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲av综合色区一区| 国产精品免费大片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 1000部很黄的大片| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 99久久综合免费| 精品久久久久久久末码| 亚洲欧美日韩无卡精品| 高清黄色对白视频在线免费看 | 成人黄色视频免费在线看| 国产伦精品一区二区三区四那| 99热这里只有是精品在线观看| av国产久精品久网站免费入址| 深夜a级毛片| 伦精品一区二区三区| 国产成人精品一,二区| 毛片女人毛片| 七月丁香在线播放| 日韩中字成人| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日本黄色片子视频| 日本爱情动作片www.在线观看| xxx大片免费视频| 国产高清不卡午夜福利| 精品人妻一区二区三区麻豆| 伊人久久国产一区二区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产又色又爽无遮挡免| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 日韩精品有码人妻一区| 久久久午夜欧美精品| 99久久精品一区二区三区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久国内精品自在自线图片| 美女国产视频在线观看| 色网站视频免费| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲四区av| 高清av免费在线| 色吧在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲三级黄色毛片| 老熟女久久久| 亚洲四区av| 国产精品三级大全| www.色视频.com| 日韩欧美 国产精品| 国产av一区二区精品久久 | 久久精品国产a三级三级三级| 国产免费一区二区三区四区乱码| 99久久综合免费| av免费在线看不卡| 久久国产乱子免费精品| 身体一侧抽搐| 国产午夜精品一二区理论片| 九草在线视频观看| 国产精品蜜桃在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 综合色丁香网| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲综合色惰| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久婷婷青草| 欧美97在线视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲欧洲日产国产| 日韩人妻高清精品专区| 国产欧美亚洲国产| www.av在线官网国产| 久热久热在线精品观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 插阴视频在线观看视频| 在线观看三级黄色| 少妇的逼好多水| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产探花极品一区二区| 亚洲av二区三区四区| 在线观看人妻少妇| 男人爽女人下面视频在线观看| 一级毛片我不卡| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美xxⅹ黑人| 高清黄色对白视频在线免费看 | 欧美人与善性xxx| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产 精品1| 99久国产av精品国产电影| 国产精品一区二区在线不卡| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产伦精品一区二区三区视频9| 免费大片黄手机在线观看| 精品亚洲成a人片在线观看 | 国产熟女欧美一区二区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产又色又爽无遮挡免| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费看日本二区| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 校园人妻丝袜中文字幕| 在线观看三级黄色| 亚洲欧美精品专区久久| 色吧在线观看| 久久久午夜欧美精品| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲av二区三区四区| 免费观看a级毛片全部| 亚洲av.av天堂| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 黄片wwwwww| 午夜福利高清视频| 久久久午夜欧美精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 少妇精品久久久久久久| 亚洲美女搞黄在线观看| 最后的刺客免费高清国语| 久久国内精品自在自线图片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 少妇的逼好多水| 少妇丰满av| 99久久精品热视频| 久久热精品热| 久久人妻熟女aⅴ| 全区人妻精品视频| 久久久精品免费免费高清| 久久久精品免费免费高清| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产成人午夜福利电影在线观看| 中文字幕制服av| 晚上一个人看的免费电影| 久久久久精品性色| 女人十人毛片免费观看3o分钟| av不卡在线播放| 国产精品一区二区在线不卡| 又大又黄又爽视频免费| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品亚洲一区二区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲av成人精品一二三区| 欧美最新免费一区二区三区| 成人午夜精彩视频在线观看| 中文资源天堂在线| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲无线观看免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久毛片免费看一区二区三区| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲av综合色区一区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| a级毛色黄片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 一级毛片我不卡| 免费大片18禁| 中文天堂在线官网| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 成人无遮挡网站| 久久久久久人妻| 99热这里只有是精品在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 三级国产精品片| 99热全是精品| 亚洲国产色片| 99久国产av精品国产电影| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日本一二三区视频观看| 亚洲av综合色区一区| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲无线观看免费| 国产在线男女| 日本-黄色视频高清免费观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久久久久久久久久久丰满| 人人妻人人看人人澡| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产男女超爽视频在线观看| 国产欧美亚洲国产| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 在线看a的网站| 精品人妻视频免费看| 亚洲精品视频女| 又大又黄又爽视频免费| 观看av在线不卡| 成人国产麻豆网| 国产精品一及| 国产精品av视频在线免费观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 成人国产麻豆网| 欧美一区二区亚洲| 国产精品一区二区在线不卡| 偷拍熟女少妇极品色| 99九九线精品视频在线观看视频| 五月玫瑰六月丁香| 一级毛片我不卡| 丰满少妇做爰视频| 极品教师在线视频| 日韩成人伦理影院| 日韩成人伦理影院| 性高湖久久久久久久久免费观看| 伦精品一区二区三区| 日韩人妻高清精品专区| 日韩人妻高清精品专区| 国产成人精品婷婷| 多毛熟女@视频| 高清不卡的av网站| 久久 成人 亚洲| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品人妻熟女av久视频| 老女人水多毛片| 在线观看人妻少妇| .国产精品久久| 最近中文字幕2019免费版| 日韩中字成人| 一区二区av电影网| 天天躁日日操中文字幕| 99久久综合免费| 午夜精品国产一区二区电影| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 99热国产这里只有精品6| 日韩精品有码人妻一区| 成人漫画全彩无遮挡| 色视频在线一区二区三区| 最后的刺客免费高清国语| 国产在视频线精品| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 欧美97在线视频| 男的添女的下面高潮视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 一级毛片 在线播放| 美女内射精品一级片tv| videossex国产| 欧美成人午夜免费资源| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲中文av在线| .国产精品久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲怡红院男人天堂| 男女国产视频网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产精品99久久99久久久不卡 | 毛片女人毛片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久久欧美国产精品| 色5月婷婷丁香| 国产有黄有色有爽视频| 国产黄片美女视频| 国产成人freesex在线| 蜜桃在线观看..| 91精品一卡2卡3卡4卡| 中文字幕亚洲精品专区| av在线老鸭窝| a级一级毛片免费在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 制服丝袜香蕉在线| 精品午夜福利在线看| 伦理电影免费视频| 国产 精品1| 欧美成人精品欧美一级黄| 联通29元200g的流量卡| 99re6热这里在线精品视频| 在线看a的网站| 欧美日韩在线观看h| 97在线视频观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲av不卡在线观看| 久久这里有精品视频免费| 国产男女超爽视频在线观看| 国产高潮美女av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 各种免费的搞黄视频| 一区二区三区免费毛片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 91狼人影院| 99精国产麻豆久久婷婷| 日韩中文字幕视频在线看片 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产精品99久久久久久久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产综合精华液| 一本久久精品| 国产视频内射| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品国产av在线观看| 波野结衣二区三区在线| 久久99精品国语久久久| 久久久久久久久大av| 黄色怎么调成土黄色| 插阴视频在线观看视频| 色视频www国产| 99热这里只有是精品50| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 亚洲av欧美aⅴ国产| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美一区二区亚洲| 观看免费一级毛片| 1000部很黄的大片| 欧美日韩视频精品一区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费观看的影片在线观看| 欧美3d第一页| 在线观看免费视频网站a站| 看十八女毛片水多多多| 只有这里有精品99| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产毛片在线视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲av福利一区| 一本久久精品| 内地一区二区视频在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 日韩中文字幕视频在线看片 | 高清毛片免费看| 九草在线视频观看| 久久久午夜欧美精品| 亚洲精品色激情综合| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲精品第二区| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲欧美日韩无卡精品| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 熟女人妻精品中文字幕| 一级爰片在线观看| 成人免费观看视频高清| 午夜福利在线在线| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲国产最新在线播放| 国产日韩欧美在线精品| h日本视频在线播放| xxx大片免费视频| 能在线免费看毛片的网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 99re6热这里在线精品视频| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲精品国产成人久久av| 大香蕉97超碰在线| 亚洲无线观看免费| 中文字幕av成人在线电影| xxx大片免费视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产高清三级在线| 2022亚洲国产成人精品| 少妇的逼好多水| 一级黄片播放器| 精品视频人人做人人爽| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲精品乱久久久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲成色77777| 中国三级夫妇交换| 国产免费一区二区三区四区乱码| 极品教师在线视频| 九草在线视频观看| 一区在线观看完整版| 日本欧美国产在线视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 亚洲av成人精品一区久久| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲美女视频黄频| 欧美zozozo另类| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品99久久久久久久久| 日韩大片免费观看网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 一级爰片在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲av.av天堂| 国产美女午夜福利| 午夜免费观看性视频| 国产一区二区在线观看日韩| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲成人一二三区av| 免费av不卡在线播放| 精品一区二区免费观看| 少妇 在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 国产极品天堂在线| 一区二区三区四区激情视频| 国产精品久久久久久久久免| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚州av有码| 久久久色成人| 国产午夜精品一二区理论片| freevideosex欧美| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美区成人在线视频| 亚洲内射少妇av| 少妇 在线观看| 欧美区成人在线视频| av又黄又爽大尺度在线免费看| 女性被躁到高潮视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲综合精品二区| 一级爰片在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲国产精品国产精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人影院久久| 久热久热在线精品观看| 国产精品一区二区性色av| 精品久久国产蜜桃| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 日本欧美视频一区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 深爱激情五月婷婷| 久久久精品免费免费高清| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩电影二区| 国产成人精品福利久久| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 色视频在线一区二区三区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国国产精品蜜臀av免费| 日本黄色片子视频| 久久久久久久久久久免费av| 高清av免费在线| 天堂俺去俺来也www色官网| av福利片在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲精品,欧美精品| 在线观看免费高清a一片| av在线老鸭窝| av免费观看日本| 成人无遮挡网站| 97超碰精品成人国产| www.色视频.com| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲成人av在线免费| 欧美精品国产亚洲| 国产69精品久久久久777片| 国产乱人视频| 好男人视频免费观看在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久久成人免费电影| 国产人妻一区二区三区在| 久久精品国产亚洲av涩爱| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美成人精品欧美一级黄| av.在线天堂| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 在线观看免费日韩欧美大片 | 国产一区二区三区综合在线观看 | 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲人与动物交配视频| 黄色一级大片看看| 777米奇影视久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 最后的刺客免费高清国语| 久久女婷五月综合色啪小说| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91精品伊人久久大香线蕉| h视频一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 中文字幕免费在线视频6| 久久久久久九九精品二区国产| 国产av国产精品国产| 亚洲最大成人中文| 九色成人免费人妻av| 国产成人精品婷婷| 国产爽快片一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 97热精品久久久久久| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲性久久影院| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 国产成人一区二区在线| 97超视频在线观看视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 日日啪夜夜撸| 日本欧美国产在线视频| 最近中文字幕2019免费版| 日本爱情动作片www.在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 七月丁香在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲人与动物交配视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 美女cb高潮喷水在线观看| 看免费成人av毛片| 嫩草影院新地址| 成人午夜精彩视频在线观看| 一区二区av电影网| 亚洲人成网站在线播| 国产一区二区三区av在线| 人妻少妇偷人精品九色| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 91精品伊人久久大香线蕉| 人妻一区二区av| 男女国产视频网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 男的添女的下面高潮视频| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲av二区三区四区| 观看美女的网站| 久久亚洲国产成人精品v| 成人漫画全彩无遮挡| av专区在线播放| 五月玫瑰六月丁香| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费黄网站久久成人精品| 一区在线观看完整版| 国产91av在线免费观看| 2022亚洲国产成人精品| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲精品日韩在线中文字幕| av卡一久久| 国产成人精品福利久久| 观看美女的网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 青春草亚洲视频在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站| 联通29元200g的流量卡| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 观看免费一级毛片| 日日撸夜夜添| 日日啪夜夜爽| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费黄频网站在线观看国产| 精品一区二区免费观看| 久热久热在线精品观看| 日本wwww免费看| 国产久久久一区二区三区| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美成人午夜免费资源| 日韩不卡一区二区三区视频在线| av线在线观看网站| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产爽快片一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久小说| 特大巨黑吊av在线直播| 美女国产视频在线观看| 又爽又黄a免费视频|