畜禽免疫抗體監(jiān)測血樣采集與血清分離保存技術

羅承金 （云南省寧洱縣動物疫病預防控制中心 665100）

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畜禽免疫抗體監(jiān)測血樣采集與血清分離保存技術

羅承金 （云南省寧洱縣動物疫病預防控制中心 665100）

畜禽血樣的采取是動物免疫抗體監(jiān)測和疫病監(jiān)測工作中的重要內(nèi)容。在畜禽血樣的采取過程中，其做好采前準備、采血方法、采集時機、血樣運送、保存和處理等環(huán)節(jié)，都直接關系到免疫抗體檢測結果的準確性及可靠性，筆者通過多年的實際操作，積累了一定的方法和經(jīng)驗，供同行參考。

1 采血前的準備

采血前應穿好工作服，備好保定器械，V形管、V形管架，一次性注射器(采血針)、記號筆、酒精棉球、干棉球、相關表格等。16號針頭、9號和7號頭皮針若干，鑷子、剪刀、酒精(75%)、藥棉若干、保定棍和繩2副、一次性5ml真空管若干。

2 血樣的采集

根據(jù)畜禽種類、所需血樣或血清的數(shù)量確定采血部位、器械及采血量。禽類采翅靜脈、豬采前腔靜脈或耳靜脈、牛采頸靜脈或耳靜脈、羊采頸靜脈；禽類用5ml一次性醫(yī)用注射器，豬、牛、羊用10~20ml一次性醫(yī)用注射器；禽類采血量不少于2ml，豬、牛、羊不少于5ml。

2.1 豬血樣采集

2.1.1 豬的保定 （1）徒手保定法：適用于中、小豬，可根據(jù)具體情況采用正提、倒提或橫臥方法保定。保定人抓住豬的雙耳向上提起，兩腿夾住豬背。也可用雙手抓住豬的兩后肢，向上倒提后，兩腿夾住其肩胸部。保定中豬時，保定者應背靠圈欄增加穩(wěn)定性。橫臥保定由一人或二人操作。保定者從背側將豬后肢及前肢或耳抓住后，用力提起橫臥放倒，并緊壓其頭部及后軀。（2）器械保定法：適用于成年公豬、母豬或野性較強的豬。一種為鼻繩保定，即用直徑1cm、長3~4m的一根繩子，一端結成直徑為20cm的活套，將其套于豬的豬的上頜犬齒后方后，收緊環(huán)套，另一端拉緊或纏繞于欄桿上。另一種為鼻捻棒保定，即用1m長木棒，一端栓一直徑20cm的繩套，同上法套用于豬上頜犬齒后方后，捻轉收緊繩套將豬保定。

2.1.2 采血 豬血樣采集耳靜脈或前腔靜脈，豬的采血最好是空腹，在早上或午后進行。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃為宜。（1）耳靜脈采血：豬保定后，將豬耳根捏緊，顯露靜脈。局部常規(guī)消毒采血部位后，用較細的針頭刺入耳靜脈采血。采血完畢，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。（2）前腔靜脈采血：將要采血的豬保定后，把豬的頭部拉直，使前腔靜脈緊張，胸前窩充分顯露，用套針管的注射器斜向對側或向后內(nèi)方，與地面呈60°角刺入2~3cm抽取血液。采血前后應按常規(guī)消毒。采血完畢，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。

2.2 牛血樣采集

2.2.1 牛的保定 主要采用站立保定，對于脾性溫順的牛可用，其方法是一手抓住牛鼻繩或鼻中隔，另一手抓住牛角即可；對于脾性暴躁的牛必須有保定架，在條件許可時，也可將牛置于兩樹之間，保定好牛的頭部，使其向上一側上仰，對側頸靜脈便暴露出來。

2.2.2 采血方法 牛的采血最好是空腹，在早上放牧前進行。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃為宜。（1）耳靜脈采血法，即一手保定牛，一手協(xié)助采血者握住牛耳根使其耳靜脈怒張，術者對術部消毒后，用帶乳膠管的9號頭皮針進行采血，免疫抗體監(jiān)測用的是微量法，采集約5ml析出血清即可。并做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。（2）頸靜脈采血法，將牛頭向一側保定后，先在頸靜脈中1/3與下1/3交界處剪毛、消毒，采血者緊壓頸靜脈下端，待血管怒張使頸靜脈充分顯露，取16號針頭，以拇指、食指和中指夾住，依靠腕力，垂直扎進頸靜脈的皮膚，然后調整位置，一旦進入血管，血液即會噴射出，采血完畢，止血消毒。同時做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。（3）尾靜脈采血法，牛尾靜脈位于尾椎腹側正中的脈管溝內(nèi)，采血者站立于牛的正后方，將牛尾向上抬起180°，在第一尾椎與第二尾椎之間的尾中線上進針采血。此法簡便快速，是牛血樣采集的常用方法。采血完畢，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。

2.3 羊血樣采集

2.3.1 羊的保定 羊的保定有騎胯保定法、側臥保定法和栓系保定法3種。（1）騎胯保定法：騎胯保定法就是保定人員騎胯在羊的肩部，用兩腿用力夾住羊的頸部和肩部，同時用兩手緊握羊的兩角或兩耳，將羊固定的保定方法。（2）側臥保定法：側臥保定法就是將羊按倒側臥，一手按住前肢上側，另一手按壓羊的臀部，捆住四肢保定。（3）栓系保定法：栓系保定法就是用繩子栓系在羊角或羊的頸部，并將繩子固定在木樁或護欄上，使羊不能大幅度活動的保定方法，此法在保定人員的協(xié)助下可對羊進行采血。

2.3.2 采血方法 羊主要采用頸靜脈采血，方法同牛的頸靜脈采血。采血完畢，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。羊的采血最好是空腹，在早上放牧前進行。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃為宜。

2.4 家禽血樣的采集

2.4.1 家禽的保定 根據(jù)采血的部位對家禽進行保定。對翅內(nèi)靜脈采血時的保定，助手用左手抓住禽的兩肢腳，右手將兩翅重疊后捏緊掌骨，使禽背部貼住助手上腹部助手右手稍高于左手，兩手輕輕用力，使禽體伸展，暴露出翅內(nèi)側；對跖骨內(nèi)側靜脈采血時的保定，助手取一凳，右手抓住兩翅根部，保定于凳上，背側靠近保定者，左手壓住禽體，禽腳靠近采血者，采血者左手拉住下面一只腳，即可看見跖骨內(nèi)側暴露的靜脈。

2.4.2 采血方法 家禽的采血最好是喂料前(早上或下午)進行。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25~28℃，冬季l5~20℃為宜。（1）翅內(nèi)靜脈采血法：采血者左手撥開左側翅內(nèi)側靜脈上的羽毛使靜脈暴露，消毒后右手持采血針與皮膚呈45°角方向進針，持針時手要穩(wěn)，進針不宜過深，如刺穿血管，則很快引起皮下血腫，導致采血失敗。一旦刺入皮膚，即可回抽活塞，使管內(nèi)形成負壓，這樣能夠準確判定是否進入血管，采血完畢后壓迫止血30s后放回雞舍。采血完畢，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。（2）跖骨內(nèi)側靜脈采血法：保定把采血部位消毒后，右手持注射器，針頭與跖骨呈l0°角方向進針，同時緩慢回抽活塞，抽取2ml血液。采血完畢，局部消毒并適當按壓止血，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。家禽的心臟采血和頸靜脈采血容易造成死亡，常規(guī)免疫監(jiān)測一般不采用這兩種方法。

3 血清分離與保存及運送

3.1 血清分離

（1）采集的血液樣品可保存于一次性5ml真空管中，在常溫下靜置1~2h可自然析出血清。也可將裝入血液的真空管置于37℃溫箱中1h，待其析出血清。分離好的血清加蓋編號，造冊登記。（2）利用離心機分離血清，首先將采集的血液樣品置室溫30min，待血液凝固后2000~3000轉/分離心5~10min，試管上層清液即為血清，如離心后有輕微的溶血，用牙簽將血凝塊挑出，將混有紅細胞碎片的血清再次離心，用干凈吸管收集于干燥的指型管中，貼上標簽備用，如血清溶血，應剔出樣品。

3.2 血清的保存

合格的血清應無溶血、不渾濁、不變質。所分離出的血清若不能及時送檢，應保存在2~8℃的冰箱中，可存15d，-15℃以下血清可保存2年。

3.3 血清的運送

如果血清能在24h內(nèi)送往實驗室，運送時把血清放在裝有冰塊且保存于4℃的保溫瓶內(nèi)送檢，如果24h內(nèi)不能抵達或送往外地實驗室時，血清必須冷凍處理，并在低溫下運送。運送途中防止血清泄漏，密閉封裝并加冰袋運送，也不能劇烈震蕩。

4 體會

（1）采血人員應認真做好自身防護工作，特別是大家畜的采血時。（2）血樣的采集要求技術熟練，一針見血。既可以節(jié)省時間，又能得到畜主對這項工作支持和了解，強化畜主對動物疫病防疫的認識，增強防疫意識。（3）對豬進行采血，豬只不能過飽，個體要適中，動作過大有可能對豬只胃腸移位或采血后發(fā)生嘔吐。助手配合默契，保定姿勢要正確，有利于采血一次成功。（4）在抽血過程中，拉動活塞不能過快過猛，隨時觀察針頭深度和抽血情況，耳靜脈、翅內(nèi)側腋下靜脈、跖骨內(nèi)側靜脈采血宜緩宜慢。（5）耳靜脈、翅內(nèi)側腋下靜脈采血，針頭拔出后容易出血，特別是禽類容易出現(xiàn)血腫，短期內(nèi)局部難恢復，畜主有一定的反感情緒。因此，要求采血技術要熟練，止血是關鍵。（6）采血前后要保持環(huán)境的安靜，避免畜禽劇烈運動。（7）采血部位要嚴格消毒，采血后可服用一定量的抗菌素，防止感染，增強保護力。（8）消毒采血部位時，酒精未干，即行采血，有可能混入酒精引起溶血；血清未分離前，攜帶血液劇烈震蕩，使血液不斷振蕩引起溶血；采取多次離心，可達到分離作用。（9）離化驗室較遠，不能及時送檢，將血液分離出的血清或長時間存放冰箱的冷藏層，又不能馬上送檢，保存不當，放置時間較長，從而造成變質。采血過程中，部位或器械被污染等因素也可造成血清變質。

（2011–12–02）

S851.34+7

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1007-1733(2012)02-0048-02