阿爾茨海默病相關(guān)的神經(jīng)絲蛋白的早期診斷價值

尹黎英，袁慧欣，張冀平，師銳贊，李慧媛，胡為民，李國平

阿爾茨海默病是一種以認知功能減退、生活能力下降及精神行為異常為臨床表現(xiàn)的致死性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。隨著世界人口的老齡化，AD 的發(fā)病率也在逐年上升，已成為繼心腦血管疾病和腫瘤后第三大危及人類生命健康的疾病。我國有部分城市的流行病學調(diào)查顯示，在55 歲及以上的人群中，AD 患病率為2.1% (732/34807)［1］，由此帶來的社會、經(jīng)濟、家庭和社會公共衛(wèi)生問題也日益突出。目前，主要依靠出現(xiàn)癡呆癥狀及評估精神量表等來明確診斷。臨床診斷的AD 患者基本都處于中晚期，現(xiàn)有的治療均難以取得滿意的療效。聯(lián)合應(yīng)用多種手段實現(xiàn)對AD 的早期診斷和早期治療，從而很好地控制不適癥狀，將有助于改善生存質(zhì)量，減輕社會與家庭的經(jīng)濟與精神負擔。

目前，AD 的發(fā)病機制尚不清楚，診斷的生物標記有3 種:tau 蛋白，磷酸化的tau 蛋白和Aβ42［2］。隨著神經(jīng)絲蛋白(neuronal thread protein，NTPs)這種新的標記物的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)用，AD 早期診斷準確率進一步提高。AD7c－NTP 在神經(jīng)元中表達，定位于神經(jīng)細胞軸突，在早期或中度AD 患者的皮層神經(jīng)元、腦組織抽提物、腦脊液中都有升高，且其含量與癡呆的嚴重程度成正比［3］。鑒于阿爾茨海默病患者尿樣中的AD7c－NTP 與腦脊液來源的AD7c－NTP 具有相同的分子量，本研究對老年性癡呆患者尿樣中AD7c－NTP 含量進行測定，確定尿中AD7c－NTP 含量與AD 的關(guān)系，為AD 的早期診斷提供一種有效、簡便可行的科學方法。

1 對象與方法

1.1 對象 AD 組:2009 ～2011 年我院神經(jīng)內(nèi)科就診的AD 患者38 例，男23 例，女15 例，62 ～89 歲，平均(77 ±5)歲。全部病例均進行系統(tǒng)的病史采集、?？撇轶w及智能精神狀態(tài)檢查量表(MMSE)、臨床癡呆評定量表(CDR)和日常生活能力量表(ADL)作為評價指標過一步確診，并滿足MMSE≤26 分，CDR=1.0 分，ADL≥16 分。認知能力障礙早于其他神經(jīng)系統(tǒng)征象的出現(xiàn)，排除其他疾病導致的癡呆。所有AD 患者均符合1992 年修訂的美國《國際疾病分類》10 版(ICD－10)診斷標準［4］。選擇年齡性別相匹配的，來自同一地理環(huán)境的健康體檢者35 名為健康對照組，其中男21 例，女14 例，年齡＞63 歲。無認知、語言行為障礙，智能檢查均正常(經(jīng)MMSE，CDR 和ADL 評定)，無嚴重心腦血管疾病，且血壓控制尚好，正常心電圖，血常規(guī)、血糖及血脂均控制在正常范圍，無明顯神經(jīng)系統(tǒng)體征及明顯的肝、腎或內(nèi)分泌疾病，排除顱腦占位性病變及感染。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑采用ADL 公司提供的AD7c－NTP 抗體試劑盒，批號QRCT－89562ELAUTL，AD7c－NTP 抗體。

1.2.2 標本采集 留取晨起中段尿，混勻，肉眼觀察，如尿液渾濁或顏色很深，則棄去，選取清亮的標本，置于冰箱保存，待標本統(tǒng)一收集完畢后，取出以2500 r/min，離心10 min，取上清液備用。測定前將標本控制到室溫，嚴格按試劑盒說明書逐步進行，酶標儀測定450 nm 波長處吸光度(OD450)，并經(jīng)Soft-Ma× Pro 軟件擬合濃度－吸光值二次標準曲線，從而得出待測尿樣本中AD7c－NTP 濃度。每組標本分別重復測定2 次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0 統(tǒng)計軟件，實驗數(shù)據(jù)以±s 表示，兩組間均數(shù)的比較采用成組t 檢驗，尿液AD7c－NTP 水平與MMSE，CDR，ADL 的關(guān)系采用直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 AD 和對照組尿液AD7c－NTP 水平比較 AD組和健康對照組尿中AD7c－NTP 含量分別為(90.78 ±16.54)ng/ml、(70.63 ±12.56)ng/ml，患者尿液AD7c－NTP 水平明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(t=5.827，p ＜0.01)。

2.2 AD7c－NTP 與AD 嚴重程度的相關(guān)性 AD患者尿中AD7c－NTP 含量與MMSE、CDR、ADL 分數(shù)有一定關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.756、－0.658、－0.760 (P 均＜0.01)。

3 討論

AD 是最常見的癡呆類型，是嚴重危害老年人健康的一種疾病，引起了全世界的關(guān)注［5］。日常生活能力下降、認知功能的障礙均是影響AD 患者社會適應(yīng)能力的主要因素。而認知障礙治療的關(guān)鍵，在于早期診斷及早期治療。因此，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是對AD 患者有效的防治措施，由于老年人對腰穿的顧慮，影響了標本的采集，為診斷帶來一定困難。而對于早期診斷，尿液中AD7c－NTP 的檢測克服了其他檢查缺點，它方便、簡單、快捷、無創(chuàng)傷，更易被患者接受。

1997 年，Munzar 等［6］首次從腦組織分離到AD7c－NTP 并命名。它是一個41 ku 的跨膜磷蛋白，為神經(jīng)絲蛋白家族的一個成員，只在神經(jīng)元表達，大量存在于AD 患者腦中的神經(jīng)元纖維纏結(jié)，在患者腦中呈分泌上調(diào)［7］，提示異常的AD7c－NTP蛋白表達是AD 神經(jīng)變性的早期事件［8］。有研究表明，腦脊液中AD7c－NTP 的表達水平在AD 組明顯高于正常組，且AD7c－NTP 水平與測定AD 各種量表得分有相關(guān)性，與年齡無相關(guān)性［9］。故AD7c－NTP 可作為一個潛在的分子標記，對AD 早期診斷有重要的應(yīng)用價值。

尋找一種簡捷有效的早期診斷方法，從而早期藥物干預(yù)是目前迫切需要解決的問題。生物學標志物的研究是近年的熱點，腦脊液中AD7c－NTP 對AD早期診斷有較高的靈敏度和特異性［5］。對AD 患者尿樣進行分析，發(fā)現(xiàn)其尿液也含有AD7c－NTP。本研究結(jié)果表明，AD 患者尿液中AD7c－NTP 的含量明顯高于健康對照組，提示尿液中AD7c－NTP 含量的測定有助于AD 的早期臨床診斷。與MMSE 和CDR、ADL 分數(shù)變化有一定關(guān)系，進一步提示尿液AD7c－NTP 含量對AD 的診斷有重要意義。本研究所采用ELISA 測定方法具有方便簡單、準確性較高、可操作性較強、無需長時間孵育等優(yōu)點，加之尿樣檢測為一項無創(chuàng)體外檢測方法，同時標本采集容易且便利，因此尿液AD7c－NTP 含量檢測在AD 的診斷中有重要的意義，具有良好的推廣和應(yīng)用價值。

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