木聚糖酶微生物發(fā)酵生產(chǎn)的研究進(jìn)展

孫孝梅，黃建忠

（1.福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建 福州 350108；2.工業(yè)微生物教育部工程研究中心，福建 福州350108；3.福建省現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)工程研究中心，福建 福州 350108）

木聚糖酶是一類可特異性降解木聚糖的酶類，主要由β－1，4－內(nèi)切木聚糖酶和β－木糖苷酶組成［1］，廣泛分布在自然界中，細(xì)菌、真菌、酵母、放線菌、海洋藻類、反芻動(dòng)物瘤胃、蝸牛、甲殼動(dòng)物、各種無脊椎動(dòng)物和陸地植物組織中都有存在［2］。木聚糖酶在半纖維多聚糖資源的利用及工業(yè)應(yīng)用方面有巨大的潛力，如該酶在造紙工業(yè)中可以水解半纖維素釋放木素，可增加紙張白度，改善紙張性能，同時(shí)降低漂白時(shí)含氯化物的用量，大大減少環(huán)境污染［3］；在食品工業(yè)中可作為面包的改良劑［4］，增大面包體積，還可以利用木聚糖酶降解木聚糖生產(chǎn)低聚木糖等高附加值的產(chǎn)品［5］；在飼料工業(yè)中，木聚糖酶作為動(dòng)物飼料的添加劑，可以降解植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，提高飼料的轉(zhuǎn)化率，減少腸道疾病，提高動(dòng)物生長性能等［6］。因此，開展木聚糖酶的開發(fā)和生產(chǎn)研究具有極大的商業(yè)價(jià)值和廣闊的應(yīng)用前景。

而在眾多木聚糖酶來源中，人們研究和應(yīng)用最多的是微生物木聚糖酶。已報(bào)道的能產(chǎn)木聚糖酶的微生物主要有細(xì)菌、真菌、放線菌和酵母。國內(nèi)外研究較多的產(chǎn)木聚糖酶的微生物是木霉、青霉、曲霉、鏈霉菌等真菌和芽孢桿菌。絲狀真菌木聚糖酶的表達(dá)量往往高于細(xì)菌和酵母［7］，而且大多是胞外酶，易于發(fā)酵后的分離純化，但所產(chǎn)酶系較為復(fù)雜，常常伴隨高活性纖維素酶的產(chǎn)生。目前工業(yè)上使用的木聚糖酶也主要是利用這些微生物發(fā)酵而成。由于微生物木聚糖酶在處理半纖維素方面安全有效，因而大力尋找和開發(fā)經(jīng)濟(jì)、高效的微生物木聚糖酶具有重要的意義。

1 木聚糖酶高產(chǎn)菌種的分離和選育

菌種的分離和選育是木聚糖酶發(fā)酵生產(chǎn)的基礎(chǔ)性工作，菌種能否成功選育是木聚糖酶能否具有工業(yè)化價(jià)值和發(fā)酵過程能否成功的關(guān)鍵因素。

1.1 菌種篩選

我國對木聚糖酶的研究起步較晚，且普遍存在生產(chǎn)的木聚糖酶活性較低等問題，因此，篩選木聚糖酶活性較高的生產(chǎn)菌種已成為研究的關(guān)鍵。產(chǎn)木聚糖酶的微生物種類很多，陸地及海洋微生物均有分布。自然界中的土壤是取之不盡的菌種寶庫，因此木聚糖酶生產(chǎn)菌株大多從富含半纖維素的土壤中分離得到，如垃圾場、造紙廠及長期堆放木聚糖含量較高的木質(zhì)纖維材料土壤等。純種分離常采用平板分離法，包括劃線法和稀釋涂布法。菌種初篩通常采用透明圈法，在平板培養(yǎng)基中加入溶解性較差的底物（如木聚糖）作為唯一碳源，根據(jù)菌落周圍是否出現(xiàn)透明的水解圈及透明圈的大小來區(qū)別產(chǎn)酶菌株。另外，剛果紅透明圈法也是分離產(chǎn)酶菌株常用到的一種篩選方法。在初篩的基礎(chǔ)上，利用酶活測定法進(jìn)行復(fù)篩，從而篩選到產(chǎn)酶量高且性能更符合生產(chǎn)要求的菌種。

陳和秀等［8］以甘蔗渣半纖維素為碳源，從垃圾場土壤中分離到一株木聚糖酶活力較高的菌株。根據(jù)對菌株形態(tài)學(xué)分析和18SrDNA序列分析的結(jié)果，將該菌株鑒定為曲霉HQ3，通過固態(tài)發(fā)酵的木聚糖酶活力最高可達(dá)3421U／g干曲。孫豐慧等［9］利用剛果紅透明圈法，從造紙廠堿性土壤中篩選到一株木聚糖酶生產(chǎn)菌株X24－14，經(jīng)培養(yǎng)特性研究及16SrDNA序列比對分析，初步鑒定為纖維菌屬（Celulosimicrobium），經(jīng)發(fā)酵條件優(yōu)化后，該菌產(chǎn)生的木聚糖酶最大活力為2204U／mL，該酶最適反應(yīng)溫度為60℃，具有較寬的pH作用范圍，在pH 4.2～9.4范圍內(nèi)能保持較高的酶活力。張世敏等［10］采用透明圈法，從土壤中篩選到一株產(chǎn)酸性木聚糖酶的黑曲霉菌株F19，通過單因子及正交試驗(yàn)確定了最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基，在最適培養(yǎng)條件下，搖瓶發(fā)酵的木聚糖酶活性最高為1303.56 U／mL。Dheeran P等［11］從白蟻內(nèi)臟中分離到一株木聚糖酶高產(chǎn)菌株，經(jīng)生理特征和16SrRNA序列分析，該菌株被鑒定為麻浸類芽孢桿菌（Paenibacillusmacerans），所產(chǎn)酶具有較好的溫度（40～90℃）穩(wěn)定性和pH（3.5～9.5）穩(wěn)定性，在最適溫度（60℃）和最適pH（4.5）下，其最佳酶活力為（4170±23.5）U／mg。

1.2 誘變育種

誘變育種是微生物改良的常用方法，而且是大多數(shù)工業(yè)微生物育種上最重要、最有效的技術(shù)。通常野生型的木聚糖酶生產(chǎn)菌株產(chǎn)量較低，生產(chǎn)能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足工業(yè)化的生產(chǎn)要求，有必要對其進(jìn)行誘變育種，以期得到酶活較高的菌株。目前，研究者大多采用紫外線、微波、亞硝基胍、硫酸二乙酯等理化誘變方法獲得高產(chǎn)木聚糖酶菌株，其中紫外誘變是最常用和最有效的誘變劑之一。此外，利用多種誘變劑依次對產(chǎn)酶菌株進(jìn)行復(fù)合誘變處理也是木聚糖酶高產(chǎn)菌株誘變育種中經(jīng)常采用的技術(shù)。木聚糖酶誘變育種的工作主要包括誘變劑及其劑量的選擇、正突變株的篩選和高產(chǎn)木聚糖酶突變株產(chǎn)酶最佳條件的調(diào)整。近幾年來，木聚糖酶高產(chǎn)菌株的誘變育種得到了很大的發(fā)展。

楊健等［12］以球毛殼霉菌（chaetomiumglobosumAS3.3601）為出發(fā)菌種，通過紫外誘變的方法篩選到一株木聚糖酶高產(chǎn)突變株Z30－56，其最高酶活可達(dá)9850U／mL，比出發(fā)菌株AS3.3601提高53.7%，并且遺傳性能穩(wěn)定。張新峰［13］等同樣采用紫外誘變技術(shù)，對嗜熱真菌（Thermomyces lanuginosusDSM10635）原生質(zhì)體進(jìn)行誘變處理，通過初篩和復(fù)篩，最終選育出3株遺傳性能穩(wěn)定的木聚糖酶高產(chǎn)誘變株，木聚糖酶的酶活分別比出發(fā)菌株提高了26.5%、37.78%、28.2%。曾瑩等［14］以黑曲霉（AspergillusnigeAn54）為出發(fā)菌株，經(jīng)紫外（UV）和硫酸二乙酯（DES）復(fù)合誘變處理原生質(zhì)體，以nystainr和2－D－Gr為遺傳標(biāo)記，定向篩選得到一株木聚糖酶高產(chǎn)菌株An54－A3，該突變株在以玉米芯和稻草為主要原料的基質(zhì)上30℃下培養(yǎng)65h左右，木聚糖酶活力達(dá)4447.44 U／g鮮曲，比出發(fā)菌株的產(chǎn)酶能力提高45.85%。徐同寶等［15］以黑曲霉（AspergillusnigerXE6）為出發(fā)菌株，采用微波（MW）和硫酸二乙酯（DES）誘變處理，選育出一株遺傳性狀穩(wěn)定的高產(chǎn)木聚糖酶菌株mAnl，該突變株經(jīng)固態(tài)發(fā)酵，所產(chǎn)木聚糖酶的酶活為81151U／g，比出發(fā)菌株的酶活提高了34.88%。

1.3 基因工程育種

隨著生物技術(shù)的發(fā)展，利用基因工程手段克隆木聚糖酶的基因，然后將基因?qū)氲胶线m的宿主中，并研究其基因的表達(dá)調(diào)控，不但可以大幅度提高木聚糖酶的產(chǎn)量，而且能夠改變酶的性質(zhì)。國內(nèi)外已有許多研究者將基因工程技術(shù)應(yīng)用與木聚糖酶生產(chǎn)菌株的選育中，許多來自細(xì)菌或真菌的木聚糖酶基因被克隆并在大腸桿菌等表達(dá)系統(tǒng)中成功表達(dá)。其中，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)因具有遺傳背景清晰、生產(chǎn)繁殖快、培養(yǎng)條件簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、成本低廉與可以快速大規(guī)模表達(dá)目的蛋白等優(yōu)點(diǎn)而備受青睞。

付正等［16］利用基因工程技術(shù)將嗜熱真菌（ThermomyceslanuginosDSM10635）的木聚糖酶1YNA的基因xyl克隆到表達(dá)宿主大腸桿菌BL21（DE3）后獲得了能成功表達(dá)木聚糖酶的工程菌，該工程菌表達(dá)的木聚糖酶1YNA的最適溫度為65℃，最適pH 值為6.0，其在75℃，pH 值為6.5的條件下失活處理30min后仍殘存有30%的酶活，具有很好的熱穩(wěn)定性。Kui H等［17］將NesterenkoniaxinjiangensisCCTCC AA001025的β－1，4內(nèi)切木聚糖酶基因xyn11NX克隆至大腸桿菌中，并成功實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá)。對重組酶酶學(xué)性質(zhì)分析表明，最適反應(yīng)pH值為7.0、溫度55℃。該重組酶的適用pH范圍較廣，在pH 5.0～11.0范圍內(nèi)酶活較穩(wěn)定。且其熱穩(wěn)定性較好，該酶在60℃保溫1h后，其相對酶活仍可維持在80%以上。在90℃保溫15min后，仍可殘留40%以上酶活。

此外，利用蛋白質(zhì)工程的方法可以進(jìn)一步提高工程菌的表達(dá)水平和改善其熱穩(wěn)定性。目前用于木聚糖酶蛋白質(zhì)工程的相關(guān)技術(shù)主要有定點(diǎn)突變技術(shù)、木聚糖酶分子的化學(xué)修飾和蛋白質(zhì)體外定向進(jìn)化技術(shù)［18］。M.Ebrahimi等人［19］采用易錯(cuò) PCR和定點(diǎn)突變技術(shù)獲得了新型耐高溫嗜堿芽孢桿菌（Bacillushalodurans）突變株，該突變株產(chǎn)生的木聚糖酶在75℃條件下仍具有較高活性。

2 木聚糖酶的發(fā)酵生產(chǎn)

微生物木聚糖酶產(chǎn)量的高低不僅取決于菌種的好壞，還取決于它的發(fā)酵生產(chǎn)工藝。發(fā)酵工藝的選擇及優(yōu)化對木聚糖酶的工業(yè)化生產(chǎn)具有重要的意義。目前，微生物木聚糖酶的發(fā)酵生產(chǎn)工藝主要有兩種：固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵。

2.1 固態(tài)發(fā)酵

固態(tài)發(fā)酵技術(shù)發(fā)展已久，早在古代中國就已經(jīng)應(yīng)用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)制曲釀酒、腌制食品和肥料堆積等。利用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)木聚糖酶是一項(xiàng)經(jīng)濟(jì)實(shí)用的新型發(fā)酵技術(shù)。微生物所產(chǎn)木聚糖酶通常為誘導(dǎo)酶，許多半纖維素資源，如麩皮、玉米芯、甘蔗渣、秸稈等對某些特定微生物產(chǎn)酶菌株具有很好的誘導(dǎo)作用，固態(tài)發(fā)酵采用這些廉價(jià)的農(nóng)業(yè)廢棄物為原料，發(fā)酵成本較經(jīng)濟(jì)，而且操作設(shè)備簡單，生產(chǎn)效率高，整個(gè)生產(chǎn)過程中廢液少，環(huán)境污染較輕。隨著人們對節(jié)能環(huán)保問題的重視，利用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)木聚糖酶具有較好的經(jīng)濟(jì)和環(huán)境效益。但固態(tài)發(fā)酵在發(fā)酵過程中一些發(fā)酵參數(shù)不易控制，發(fā)酵周期較長，發(fā)酵過程易發(fā)生污染，傳質(zhì)不均勻，產(chǎn)品回收率較低等。木聚糖酶固態(tài)發(fā)酵工藝的研究主要包括發(fā)酵培養(yǎng)基成分、料水比、發(fā)酵溫度、初始pH、接種量等。

周晨妍等［20］對黑曲霉產(chǎn)木聚糖酶的固態(tài)發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基成分為麩皮：玉米芯＝5∶3、（NH4）2SO41.0%、KH2PO40.2%、CaCl20.1%、MgSO40.1%，料水比1∶1.7；最佳培養(yǎng)條件為接種量1.0%，pH 值為7.5，培養(yǎng)溫度為28℃，培養(yǎng)時(shí)間為60h，其間翻曲2～3次。在此最佳工藝條件下，木聚糖酶的活力可達(dá)14698.21U／g。Assamoi等［21］對Penicilliumcanescens產(chǎn)木聚糖酶的固體發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，該研究以顆粒大小5mm的大豆油餅為培養(yǎng)基碳源，并添加含有3%酪蛋白和4%Na2HPO42H2O的營養(yǎng)液，初始含水量為80%，30℃培養(yǎng)7天后，用三角瓶固態(tài)發(fā)酵的木聚糖酶酶活達(dá)到了18895±778U／g，而用塑料袋發(fā)酵產(chǎn)生的木聚糖酶活為9300±589U／g。Pandya［22］對實(shí)驗(yàn)室選育的AspergillustubingensisJP－1菌株固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶條件進(jìn)行了研究，確定了利用未經(jīng)處理的小麥秸稈添加MS營養(yǎng)液為主要基質(zhì)進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)木聚糖酶的適宜條件：pH 6.0，料水比1∶5，培養(yǎng)溫度30℃，在250mL三角瓶中固態(tài)培養(yǎng)8天后，木聚糖酶活力可達(dá)（6887±16）U／g。

2.2 液態(tài)發(fā)酵

與固態(tài)發(fā)酵相比，液態(tài)發(fā)酵在生產(chǎn)的過程中可實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)檢測與自動(dòng)控制，易于擴(kuò)大生產(chǎn)規(guī)模，且不易染雜菌，生產(chǎn)效率高，產(chǎn)品的分離比較簡單，但會(huì)產(chǎn)生大量污水。木聚糖酶液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)中發(fā)酵效果除了受菌種自身產(chǎn)酶性能的影響外，主要受培養(yǎng)基組成成分、種齡、接種量、發(fā)酵溫度、pH、溶氧等條件的影響。研究主要通過各種試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，如單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)、正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)、響應(yīng)面分析法等確定最優(yōu)產(chǎn)酶培養(yǎng)基組成及最佳培養(yǎng)條件，從而提高木聚糖酶的產(chǎn)量。

王濤等［23］在5L發(fā)酵罐上對畢赤酵母產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酵條件進(jìn)行研究，確定了5L罐發(fā)酵的最佳種齡是24h，最佳接種量是10%。通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，得到5L罐發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的工藝條件：pH值為5.5，溫度為30℃，空氣流量3L／min，攪拌轉(zhuǎn)速為300r／min，發(fā)酵130h，畢赤酵母發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的酶活為2780U／mL。呂世鋒等［24］通過單因素試驗(yàn)與響應(yīng)面分析法對黑曲霉液體發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酵條件進(jìn)行了研究，當(dāng)培養(yǎng)基為麩皮40g／L，（NH4）2SO44g／L，KH2PO43g／L，Mg－SO40.8g／L，吐溫－80 1g／L，初始pH 值5.0，接種量8.0%，培養(yǎng)溫度30℃，在此條件下發(fā)酵木聚糖酶酶活達(dá)1456.27U／mL。Nagar S等［25］對BacilluspumilusSV－85S液體深層發(fā)酵產(chǎn)無纖維素酶活且耐堿性木聚糖酶的發(fā)酵條件進(jìn)行了研究。該研究表明，以麩皮作為培養(yǎng)基，接種量1%，種齡18h，pH 6.0，37℃發(fā)酵36h，所產(chǎn)木聚糖酶活力達(dá)到最高為（2995.20±200.00）U／mL。該酶具有很好的pH穩(wěn)定性，在37℃，pH 5～11范圍內(nèi)處理1h，仍殘留100%酶活力，而且所產(chǎn)酶無纖維素酶活性。

目前，國內(nèi)外對木聚糖酶的發(fā)酵放大工藝方面的報(bào)道不多，許多研究還停留在實(shí)驗(yàn)室搖瓶發(fā)酵階段。今后，應(yīng)以搖瓶中最優(yōu)培養(yǎng)條件作為小型發(fā)酵罐的初始培養(yǎng)條件進(jìn)行初步放大，通過對小型發(fā)酵罐的發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化后，逐級放大到工業(yè)規(guī)模的發(fā)酵。

3 展望

由于木聚糖酶存在較大的商業(yè)應(yīng)用價(jià)值，有關(guān)木聚糖酶的微生物發(fā)酵生產(chǎn)一直是人們關(guān)注和研究的熱點(diǎn)。我國對木聚糖酶的研究起步較晚，現(xiàn)在仍存在出發(fā)菌種所產(chǎn)木聚糖酶的產(chǎn)量低、酶學(xué)性質(zhì)不夠優(yōu)良等缺陷，使其大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)和應(yīng)有范圍受到很大的限制。因此，從天然微生物中篩選高木聚糖酶產(chǎn)量并具有優(yōu)良性狀的菌株，再通過誘變育種或結(jié)合基因工程育種手段，進(jìn)一步提高木聚糖酶的表達(dá)水平就顯得尤為關(guān)鍵。另外，隨著蛋白質(zhì)工程的迅速興起，也為木聚糖酶蛋白分子進(jìn)行定向分子改造，并改善其相應(yīng)酶學(xué)性質(zhì)提供了可能。而且我國具有豐富的玉米芯、玉米秸稈、麥麩、蔗渣等富含半纖維素類農(nóng)林纖維廢棄物，是一種用于生產(chǎn)木聚糖酶潛在的天然混合碳源，如能將其推廣應(yīng)用于木聚糖酶的生產(chǎn)中，不僅可以降低木聚糖酶的生產(chǎn)成本，獲得巨大的經(jīng)濟(jì)效益，還可以幫助處理農(nóng)業(yè)廢棄物，保護(hù)環(huán)境。因此，通過對木聚糖酶發(fā)酵工藝的優(yōu)化，提高木聚糖酶的生產(chǎn)力也是一個(gè)非常迫切的工作。

［1］張宇，王志成，周紅霞.液體發(fā)酵中木聚糖酶的研究 ［J］.黑龍江科學(xué)，2011，2（4）：18－20.

［2］POLIZELI M，RIZZATTI A，MONTI R，et al.Xylanases from fungi：properties and industrial applications ［J］.Applied Microbiology and Biotechnology，2005，67（5）：577－591.

［3］王蕾，王萬貴，季祥，等.木聚糖酶在制漿造紙工業(yè)中的研究狀況 ［J］.中國產(chǎn)業(yè)，2011（2）：45－47.

［4］BUTT MS，TAHIR－NADEEM M，AHMAD Z，et al.Xylanases and their applications in baking industry ［J］.Food Technology and Biotechnology.2008，46（1）：22.

［5］朱浩擁，王俊麗，吳春，等.酶法制備玉米芯低聚木糖工藝條件的研究 ［J］.飼料及飼養(yǎng)試驗(yàn)，2011（12）：54－57.

［6］方微，單玉萍，李峰，等.木聚糖酶的作用機(jī)理及其在飼料中的應(yīng)用 ［J］.中國飼料，2011（21）：21－24.

［7］FANG H Y，CHANG S M，HSIEH M C，et a1.Production，optimization growth conditions and properties of the xylanas fromAspergillusccarneusM34 ［J］.Journal of Molecular Catalysis B：Enzymatic，2007，49：36－42.

［8］陳和秀，龍敏南，徐方成，等.木聚糖酶生產(chǎn)菌株的篩選及產(chǎn)酶條件的優(yōu)化 ［J］.中國生物工程雜志，2007，27（11）：41－44.

［9］孫豐慧，李安明.耐堿性木聚糖酶產(chǎn)生菌的篩選及發(fā)酵條件研究 ［J］.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2008，14（3）：436－439.

［10］張世敏，郭慶，徐淑霞，等.酸性木聚糖酶高產(chǎn)霉菌的篩選及發(fā)酵條件研究 ［J］.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，44（3）：334－336.

［11］DHEERAN P，NANDHAGOPAL N，KUMAR S，et al.A novel thermostable xylanase ofPaenibacillusmaceransIIPSP3 isolated from the termite gut［J］.Journal of Industrial Microbiology Biotechnology，2012，39（6）：851－860.

［12］楊健，姚笛，王穎，等.紫外誘變球毛殼霉選育木聚糖酶高產(chǎn)菌株 ［J］.中國食品添加劑：試驗(yàn)研究，2011（4）：86－101.

［13］張新峰，張華山，王偉平，等.原生質(zhì)體紫外誘選育木聚糖酶高產(chǎn)菌株 ［J］.中國食釀造，2010（9）：73－76.

［14］曾瑩，向新柱.復(fù)合誘變原生質(zhì)體選育高活性木聚糖酶產(chǎn)生菌 ［J］.釀酒科技，2009（9）：58－60.

［15］徐同寶，王德培，李寧，等.誘變選育木聚糖酶高產(chǎn)菌株及其發(fā)酵條件的研究 ［J］.飼料工業(yè)，2009，30（12）：40－43.

［16］付正，張華山，曾小英，等.嗜熱真菌木聚糖酶1YNA的表達(dá)和定點(diǎn)突變 ［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50（7）：1488－1493.

［17］KUI H，LUO H，SHI P，et al.Gene Cloning，Expression，and Characterization of a Thermostable Xylanase fromNesterenkoniaxinjiangensisCCTCC AA001025 ［J］.Applied Biochemistry and Biotechnology，2010，162（4）：953－965.

［18］周平發(fā)，王敏，崔細(xì)鵬，等.微生物發(fā)酵木聚糖酶的研究進(jìn)展 ［J］.廣東飼料，2011，20（10）：27－30.

［19］M EBRAHIMI.Engineering thermostable xylanase enzyme mutant fromBacillushalodurans［J］.African Journal of Biotechnology，2010，9（47）：8110－8117.

［20］周晨妍，張金華，馬雪婷，等.黑曲霉產(chǎn)木聚糖酶的固態(tài)發(fā)酵條件優(yōu)化 ［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（21）：11052－11054.

［21］ASSAMOI AA，DESTAIN J，PHILIPPE T.Xylanase Produc－tion byPenicilliumcanescensonSoya Oil Cake in Solid－State Fermentation ［J］.Applied Biochemistry and Biotechnology，2010，160（1）：50－62.

［22］PANDYA J J，GUPTE A.Production of xylanase under solidstate fermentation byAspergillustubingensisJP－1and its application ［J］.Bioprocess and Biosystems Engineering，2012，35（5）：769－779.

［23］王濤，方紅貴，蔡恒，等.畢赤酵母發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶條件研究 ［J］.中國釀造，2009（7）：86－89.

［24］呂世鋒，任建偉，張滿，等.黑曲霉液體發(fā)酵產(chǎn)木聚糖酶的研究 ［J］.山東化工，2011，40（9）：8－12.

［25］NAGAR S，GUPTA V K，KUMAR D，et al.Production and optimization of cellulase－free，alkali－stable xylanase byBacilluspumilusSV－85Sin submerged fermentation ［J］.Journal of Industrial Microbiology Biotechnology，2010，37（1）：71－83.